Rio de Janeiro, 10 de Dezembro de 2010
Leandro Santiago Emmerick
INTRODUÇÃO
Caranguejo da LamaScylla serrata
Taxonomia
Característica do
sudeste asiático
Ampla importância
econômica
108 mil toneladas
em 2004 na China
INTRODUÇÃO
MCRV
Dicistrovírus - Família
recente (2002)
Retrovírus, positive-
sense fita única (ssRNA),
não envelopados
30nm de diâmetro e
simetria icosaédrica
INTRODUÇÃO
MCRV
Infectam invertebrados
Doença do sono
13 segmentos de RNA
Necrose da gills e
intestino dos
hospedeiros infectados
INTRODUÇÃO
VP3
121 aminoácidos
Região C-terminal é
carregada positivamente
Sinal para localização e
exportação nuclear
Induz apoptose celular
Muito imunogênica
Antígeno produzido durante
o processo de infecção e
replicação viral
OBJETIVO
Investigar os mecanismos da infecção por MCDV no caranguejo da lama
Controlar a doença viral
Estudar a estrutura da proteína VP3
EXPERIMENTOS
Desenho de primers
Expressão de MCDV-VP3 em E. coli
Produção de 3 MAbs contra MCDV-VP3
Clonagem, expressão e purificação da recombinante
Imunização de camundongos por injeção intraesplênica
Caracterização dos MAbs por ELISA e Western Blotting
Localização da MCDV-VP3 na superfície externa por MET
RESULTADOS
Proteína recombinante purificada e principais proteínas estruturais do MCDV
1:2.048x105
Western blotting ELISA indireto
3 MAbs:1G6H9 – 1E7B8 – 4B6E10
Os MAbs reconhecem a MCDV-VP3
RESULTADOS
VP3 é uma proteína do capsídeo do MCDV
RESULTADOS
DISCUSSÃO
MAbs: alta especificidade e atividade usadas para diagnóstico
VP3 < VP1 e VP2
MAbs reconheceram tanto a nativa quanto a recombinante
Os resultados sugerem que VP3 é uma nova proteína estrutural do MCDV
CONCLUSÃO
Foi obtido e caracterizado com sucesso
os MAbs contra MCDV que são altamente
sensíveis e específicas tanto para a forma recombinante
quanto para a forma nativa da proteína estrutural MCDV-
VP3. Os MAbs fornecem uma ferramenta conveniente para
uso em laboratório para estudar a biologia básica do MCDV
e aprofundar o estudo do imunodiagnóstico da MCDV para
controlar MCDV na aquicultura caranguejo da lama e reduzir
a perda de produção de caranguejo associados MCDV.