PROF. MARCELO TEIXEIRA PACHECO
UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SULFACULDADE DE AGRONOMIA
DEPARTAMENTO DE PLANTAS DE LAVOURA
PARTE II
TRANSFERÊNCIA DOS GENES CLONADOS PARA A PLANTA
PRINCIPAIS MÉTODOS
Transformação via Agrobacterium tumefaciens
Biolística ou pistola de genes
Eletroporação (descarga elétrica)
VETOR (veículo) DE TRANSFORMAÇÃO DE TRANSGENES
GALHA DA COROA
Sintoma infecção por A. tumefaciens Plasmídeo Ti
A. tumefaciens
TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens
Agrobacteriumtumefaciens
A. tumefaciens
Plasmídio Ti
T-DNADNAcromossômico
T-DNA
Célula vegetaltransformada
Tumor dagalha
Cromossomo
TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens
TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens
Célula vegetal
Co-cultivo de células da planta com Agrobacterium
“desarmada”
Transferência para meiode cultura com antibiótico, herbicida ou outro método
de seleção
Regeneração da planta transgênica
Testes da planta transgênica em laboratório e mais tarde
a campo
PRINCIPAIS ETAPAS DA TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens
Bombardeamento de partículas ou Biolística
GENE DE INTERESSE
MICROPARTÍCULASDE OURO
DNA ADERE ÀSPARTÍCULAS
ACELERAÇÃODAS PARTÍCULAS
LIBERAÇÃODO DNA NO
NÚCLEO
SELEÇÃO DASCÉLULAS
TRANSFORMADAS
REGENERAÇÃODAS PLANTAS
TRANSGÊNICAS
TIPOS DE PISTOLAS DE GENES
PISTOLA DE GENES EM AÇÃO
CLICAR AQUI PARA VER ANIMAÇÃO
(após a animação recarregar a apresentação)
EXEMPLO DE TESTE A CAMPO
Milho transgênico Bt
(Resistente a diferentes insetos)
Milho não transgênico
Gene de seleçãoResistência a antibiótico,
Resistência a herbicida, …Gene Bt
CASSETE DO GENE Bt
UM GENE SIMPLIFICADO
Promotor Seqüência de terminação
Seqüência codificando gene Bt
Controla quando, como e quanto o
gene vai ser expresso
Contém a informação do que o gene faz
Diz onde termina o gene
GENES DEVEM SER “CONSTRUÍDOS” ANTES DE SEREM USADOS NA TRANSFORMAÇÃO DE PLANTAS
PROMOTOR, GENE E SEQÜÊNCIA DE TERMINAÇÃO PODEM VIR DE ORGANISMOS DIFERENTES
PORQUE A EFICIÊNCIA DE TRANSFERÊNCIA DO TRANSGENE É BAIXA (1 A 5%) É NECESSÁRIO USAR UM GENE MARCADOR PARA SELEÇÃO.
(RESISTÊNCIA A ANTIBIÓTICOS E A HERBICIDAS MAIS COMUMENTES USADOS, MAS EXISTEM OUTRAS TÉCNICAS)
NECESSÁRIOS VÁRIOS EVENTOS DE TRANSFORMAÇÃO PARA SELECIONAR UM TRANSGÊNICO COM AS CARACTERÍSTICAS DESEJADAS
NEM TUDO É TÃO SIMPLES
EXEMPLOS DE DIFERENTES EVENTOS DE TRANSFORMAÇÃO
BATATA RESISTENTE AO FUNGO Verticillium dahliae
Transgênico
Não-transgênico Transgênico
Transgênico