UFPB – PRG _____________________________________________________________X ENCONTRO DE INICIAÇÃO À DOCÊNCIA

SEPARAÇÃO PROTÉICA POR MEIO DE CROMATOGRAFIA DE AFINIDADE Alisson Guedes Campos (1) , Tatiane Santi Gadelha (3) , Carlos Alberto de Almeida Gadelha (4) .

Centro de Ciências Exatas e da Natureza/Departamento de Biologia Molecular/MONITORIA

RESUMO: Cromatografia de afinidade é uma técnica que utiliza propriedades físico­químicas para separação dos componentes de uma mistura, a partir da distribuição destes em duas fases uma móvel e outra estacionária que se encontram em íntimo contato. Durante a passagem da fase móvel (extrato protéico) pela fase estacionária (sephadex G ­50), os componentes da mistura são distribuídos de modo que deles são seletivamente retidos na fase estacionária (apresentam afinidade pela fase estacionária), enquanto outros migram de forma diferenciada. Para a separação de uma proteína em particular, é introduzida uma substância que se liga à fase estacionaria removendo­a da coluna. Essa prática tem como objetivo separar um grupo de proteínas (as lectinas) de um extrato vegetal, baseando­se na afinidade que elas têm por determinados monossacarídeos manose e glicose. As proteínas presentes na farinha de sementes de Canavalia marítima foram extraídas com uma solução de NaCl 0,15 M; 1:10 (m/v), sob agitação constante durante 4 horas à temperatura de 25 C. A solução será centrifugada a 5.000 x g por 20 minutos a 4 ºC. O sobrenadante (extrato protéico) será filtrado em papel de filtro. O extrato obtido foi aplicado em coluna de Sephadex G 50 (v= 10 mL) previamente equilibrada com solução de NaCl 0,15 M. A amostra aplicada foi deixada em contato por 30 min, a fim de permitir a interação com a coluna. Após remoção do material não retido com NaCl 0,15M, o material retido (lectina) será eluído com solução de glicose 0,1M, com coleta manual de 1 mL por fração e monitorada por atividade hemaglutinante a fim de detectar a presença de lectina. A cromatografia de afinidade tem se mostrado eficiente para separar proteínas com afinidade por carboidratos, tendo em vista que, o extrato de Canavalia marítima quando submetida a esse tipo de cromatografia apresentou um eluato retido com atividade hemaglutinante. Esta técnica se mostrou eficiente e de fácil compreensão no que diz respeito à interação composto ligante com a fase estacionaria, além do que pode facilmente ser apresentada em aulas práticas, tendo em vista que o processo de interação ligante ocorre em 30 minutos.

Palavras Chave: Cromatografia; Separação Protéica.

5CCENDBMMT02.P

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(1) Monitor(a) Bolsista(a); (3) Prof(a) Orientador(a)/Coordenador(a); (4) Prof(a)Colaborador(a).