MODELO DA ATIVIDADE DE PROTEASES PARA AVALIAR O TRATAMENTO DE FERIDAS IN VITRO

RESUMO OBJETIVOS

O Ambiente da Ferida Crônica Proteses Inflamatórias Elevadas em Feridas Crônicas

Colágeno/ORC/Prata reduz a atividade de Elastase e MMPs em feridas com EPA Colágeno/ORC/Prata reduz a atividade de Elastase e MMP-9 in vitro

CONCLUSÕES

Objetivo: Avaliar a capacidade de algumas terapias para feridas em reduzir a atividade das proteases inflamatórias in vitro.

Introdução: Feridas crônicas ficam 'estagnadas' na fase inflamatória, e essa Atividade Elevada de Proteases (EPA) pode desempenhar um papel chave na sua incapacidade para seguir uma trajetória normal de cura. A presença desta Atividade Elevada de Proteases (EPA) cria um ambiente hostil que é prejudicial para a cicatrização de feridas. Portanto, muitos tratamentos podem ser usados para reequilibrar este ambiente desfavorável da ferida.

Método: Amostras de Colágeno/ORC (Celulose Oxidada Regenerada), Colágeno/ORC/Prata, somente Colágeno, Colágeno/Prata ou coberturas à base de NOSF (Fator Nano-OligoSacarídeo) foram incubadas a 37 ° C com soluções contendo EPA. O nível de atividade presente foi clinicamente relevante com base na análise clínica anterior do exsudato da ferida. Utilizando ensaios fluorométricos, as atividades de elastase derivada de neutrófilos (HNE) e matriz de metaloproteases (MMPs) foram medidas ao longo do tempo na presença de cada cobertura. Para confirmar os resultados, fluidos de feridas contendo EPA também foram testados.

Resultados: Os resultados indicam diferenças entre cada tipo de cobertura na sua capacidade para reduzir a EPA, mais especificamente em relação a elastase derivada de neutrófilos e MMPs. As coberturas de Colágeno/ORC/Prata e Colágeno/ORC foram mais eficazes na redução da EPA do que outras coberturas testadas. Isso ocorreu principalmente devido à presença da ORC, que fornece uma funcionalidade original que não pode ser conseguida com prata ou colágeno sozinhos.

Conclusões: Este estudo reforça estudos clínicos anteriores onde a combinação de Colágeno/ ORC e Colágeno/ ORC/Prata foi mais eficaz na redução da EPA. Uma redução na EPA ajuda a reequilibrar o ambiente da ferida, que por sua vez facilita a cicatrização. Este estudo demonstra também a nossa capacidade para medir a EPA e comparar a eficácia relativa das diferentes terapias para tratamento de feridas, usando um modelo in vitro.

Comparar a capacidade do Colágeno/ORC com outros produtos compostos apenas por Colágeno ou Colágeno/Prata em reduzir proteases inflamatórias.

Mostrar se este modelo é clinicamente relevante, testando as coberturas nos fluidos retirados de feridas crônicas com EPA.

Os resultados mostram que o Colágeno/ORC/Prata tem propriedades que são benéficas para a cicatrização de feridas.

Os resultados indicam as diferenças entre cada tipo de cobertura na sua capacidade de reduzir o nível de proteases inflamatórias.

A combinação única de Colágeno/ ORC/Prata proporciona uma redução superior da atividade das proteases quando comparada a coberturas com Colágeno/Prata, tanto in vitro como no fluido de feridas. A redução da atividade de proteases inflamatórias reequilibra o ambiente bioquímico da ferida facilitando a cicatrização.

Proteases inflamatórias - Métodos de medição

Utilizando ensaios de atividade da protease, foi avaliado o efeito do Colágeno/ORC/Prata sobre os níveis de protease em relação aos produtos que possuem em sua composição apenas Colágeno ou Colágeno/Prata. Níveis clinicamente relevantes de proteases foram usados no ensaio in vitro; foi usado exsudato de ferida crônica para avaliar o efeito em feridas com EPA

Elastases derivadas de neutrófilos foram medidas utilizando um substrato específico e um sistema tampão.Tampão: 0,1 M Hepes, pH 7,5, 0,5 M NaCl , 10% DMSO.2

Substrato: MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-7-amino-4-metilcumarina.

Atividade total de MMP foi medida utilizando um substrato específico e um sistema tampão.Tampão: 50 mM Tris, 10 mM de cloreto de cálcio desidratado, 100 mM de cloreto de sódio, 50uM de cloreto de zinco, 0,025% de Brij 35, 0,09% de azida de sódio.Substrato: MCA-Lys-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2.Os níveis de MMP-9 foram medidos através de ensaios de atividade baseados em ELISA (Anaspec).

Um homem de 74 anos com diabetes tipo 2

apresentou com uma úlcera em pé diabético

no membro direito. O paciente já havia

sofrido amputação transmetatarsiana nesse

pé. No início do tratamento a ferida tinha 7

meses com uma área de 2,5 cm², e uma

profundidade máxima de 0,4 cm. Em 14

s e m a n a s d e t r a t a m e n t o c o m

Colágeno/ORC/Prata houve uma redução na

atividade das proteases, resultando em uma

redução da área da ferida.

Estudo de Caso - Efeitos Clínicos e Bioquímicos do tratamento com Colágeno/ORC/Prata em uma úlcera em pé diabético

oirbíli

uq

es

eD

Proteases Bacterianase Toxinas

Degradação da MEC e dos fatores de crescimento

Células produzemproteases em excesso

Aumento da resposta inflamatória

Pro

teas

e

s

me

ossecxe

Persistência

Publicado:

Úlcera Venosa na Perna

Ati

vid

ade

da

Pro

teas

e (

Nív

el d

e M

MP

(n

g/m

l/m

g)

Úlcera do Pé Diabético

Úlcera por Pressão

Fluido Crônico

Cobertura + Proteaseencubada por mais de

24 horas

Amostra coletada eadicionada ao

substrato e tampão

Níveis defluorescência

medidos ao longo de 1 hora

Elastase ( 24 horas de incubação)Elastase ( 24 horas de incubação)

Semana 0 Semana 4 Semana 14

Área da Ferida

MMP 9 ( 2 horas de incubação)

MMP ( 2 horas de incubação)

% A

tivi

dad

e R

esi

du

al

% A

tivi

dad

e R

esi

du

al

Este estudo demonstra - A Elastase é a protease predominante no fluido de feridas crônicas - MMPs também foram encontradas em excesso no fluido de feridas crônicas - MMP-2, MMP-8 & MMP-9 são as principais MMPs presentes no fluido das feridas

# Significativamente diferente de Colágeno/ORC/Prata (P<0,05)# Significativamente diferente de Colágeno/ORC e Colágeno/ORC/Prata (P<0,05)

Tecido Danificado

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Colágeno/ORC/Prata

Colágeno/ORC/P

rata

Colágeno/ORC

Colágeno+ Prata

Colágeno/Alginato

Colágeno

Colágeno com

desidade

extra Gelatin

a/EDTA

Gelatina/E

DTA + Pra

ta

Matri

z dérm

ica co

lágeno

suínoColágeno/ORC Colágeno Colágeno + Prata