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Introdução à Biologia Molecular de Micro-organismos
O agente transformanteFrederick Griffith (1928)
Linhagem S
Linhagem R
Streptococcus pneumoniae
A natureza do princípio transformante Avery, MacLeod e McCarty (1944)
Testaram cada classe de moléculas dos restos das bactérias S mortas
O DNA induzia a transformação das bactérias
• Observações de quantidades de componentes do DNA de vários organismos (Erwin Chargaff)
U para RNA
• Dados de difração de raios X(Rosalind Franklin e Maurice Wilkins)
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Watson e Crick (1953)
• Dupla hélice
• Ligações fosfodiéster (entre nucleotídeos)
• Pontes de hidrogênio (entre as bases)
• Fitas em sentidos opostos
Ligações
Nucleotídeo(base + açúcar + fosfato)
Ácido nucleico(base e açúcar)
Nucleosídeo(base e açúcar)
Sentido 5’ – 3’
Antiparalelas
Pontes H
Int. Prot.
Estrutura em haste-alça
• Repetições invertidas
• Regulação da expressão
• RNA – Estrutura secundária (ribossomal e transportador)
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Desnaturação do DNA - temperatura
≠ degradação DNA
Desnaturaçã Química
Uréia
Anelamento
Superenovelamento
Topoisomerases – ex. DNA Girase – Bacteria e Archaea
relaxado superenovelado
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Dogma central da biologia molecular
Modelo semiconservativo
Replicação do DNA Experimento de Meselson-Stahl (1958) E. coli cultivadas em meio contendo o isótopo 15N
Conclusão: experimento confirma a replicação semiconservativa
Parental Primeira geração Segunda geração
Replicação cromossômica também é semi-conservativa Replicação procariótica - bidirecional
TG E. Coli – 20 min.Replicação – 40 min.
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Replicação eucariótica – vários pontos de replicação Forquilha de replicação
�Primers de RNA: sintetizados pela RNA polimerase ou pela primase
�DNA polimerase III: maior parte da síntese – sentido 5’-3’
�DNA pol I: preenche espaços na fita descontínua
�DNA ligase
�Helicases: perturbam as pontes de hidrogênio e causam torções no DNA
�Topoisomerases (DNA girase): remover a superelicoidização
� Revisão e reparação
Dogma central da biologia molecular
Gene - Estrutura
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RNA
� Diferenças em relação ao DNA: - ribose no lugar de desoxiribose; - U no lugar de T; -fita simples
RNA
� mRNA; tRNA; rRNA
Transcrição
TranscriçãoFator Sigma
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Tradução – produção de proteínas Número de aminoácidos: 20 Polipeptídeos são as cadeias de aminoácidos que compõem as proteínas
Fórmula geral de um aminoácido:
Remoção de H20 para formar ligações peptídicas
Tradução O código genético
Degenerado
43 = 64
Posição de oscilação: um simples tRNA pode reconhecer dois códons
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Genômica – DNA - Proteína
INICIAÇÃO DA TRADUÇÃO EM PROCARIOTOS
O primeiro aminoácido é sempre N-formilmetionina (AUG)Metionina modificada – demais AUGs codificam metionina
ELONGAÇÃO DA TRADUÇÃO EM PROCARIOTOS TÉRMINO DA TRADUÇÃO EM PROCARIOTOS
1-Fatores de liberação (RF1 ou RF2) reconhecem os códons STOP
2- Ligam-se ao sítio A
3- O polipeptídeo é liberado do sítio P
4- Ribossomos dissociam-se em suas 2 subunidades
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