MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANA 1

Métodos TurbidimétricosTotais

Contagens Microscópicas

Métodos de Contagem Bacteriana

ViáveisContagem em Placa

Determinação do NMP

Atividade Metabólica

Contagem em Membrana Filtrante

MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANA 2

MÉTODOS DE CONTAGEM MICROSCÓPICA

MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANA 3

MÉTODOS DE CONTAGEM MICROSCÓPICA

Principais Características:

� Contam células vivas e mortas;

� Mais adequado para amostras liquidas;

� A amostra deve possuir pouco material particulado;

� População deve ser elevada;

� Rápido e com resultados imediatos;

� Resultados podem bastante ser influenciados pelo executor;

� Mais fácil para culturas mono-microbianas e de células isoladas;

� Não é adequado para bactérias móveis;

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MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS

� A turvação da amostra bacteriana é determinada espectrofotometricamente;

Diretos

Métodos Turbidimétricos

Por Comparação

� A turvação da amostra bacteriana é comparada visualmente com padrões;

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MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - DIRETOS

Quanto menor a quantidade de bactérias maior a transmitância

menor a absorbância

Quanto maior a quantidade de bactérias menor a transmitância

maior a absorbância

LeituraCurva Padrão

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MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - DIRETOS

DOCurva Padrão

Contagem de Bactérias / mL

Leitura

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Principais Características:

� Contam células vivas e mortas;

� É um método de contagem indireto;

MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - DIRETOS

� Mais adequado para amostras liquidas;

� A amostra “não deve” possuir particulado;

� População deve ser elevada;

� Rápido e com resultados imediatos;

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MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - POR COMPARAÇÃO

Tubo da Escala

Quantidade de Bactérias x 106 bactérias /mL

0,5 150 (1,5 x 108)

1 300 (3,0 x 108)

2 600 (6,0 x 108)

Escala de McFarland

3 900 (9,0 x 108)

4 1200 (1,2 x 109)

5 1500 (1,5 x 109)

6 1800 (1,8 x 109)

7 2100 (2,1 x 109)

8 2400 (2,4 x 109)

9 2700 (2,7 x 109)

10 3000 (3,0 x 109)

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Principais Características:

� Contam células vivas e mortas;

� É um método de contagem indireto;

MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - POR COMPARAÇÃO

� Mais adequado para amostras liquidas;

� A amostra “não deve” possuir particulado;

� População deve ser elevada;

� Rápido e com resultados imediatos;

� Resultados dependem do operador;

� Resultados imprecisos;

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MÉTODOS DE DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE METABÓLICA

Vitamina + Cultura = Crescimento BiomassaBiomassa

Carboidrato + Cultura = Fermentação Dosagem de ÁcidosDosagem de Ácidos

Fonte de Energia + Cultura = Bioluminescência Dosagem da Luz EmitidaDosagem da Luz Emitida

� A população é determinada a partir da Atividade Metabólica das células;

Principais Características:

� É um método de contagem indireto;

� Aplicações bastante específicas;

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10 ml

MÉTODOS DE DETERMINAÇÃO DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL

Tabela específica para os volumes utilizados

Resultado Negativo

Resultado Positivo

1 ml

0,1 ml

NMP = 110 bactérias / 100 ml

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MÉTODOS DE DETERMINAÇÃO DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL

Principais Características:

� Contam células vivas;

� É um método de contagem estatístico;� É um método de contagem estatístico;

� É um método TRABALHOSO ;

� É um método DISPENDIOSO;

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CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA

Diluição Seriada na Razão 1/10

Contagem de Colônias

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CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA

Técnica de Espalhamento em Superfície

(“Spead-Plate”)

Técnica de Espalhamento em

Profundidade (“Pour-Plate”)

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CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA

Técnica de Espalhamento em Superfície

(“Spead-Plate”)

� Possibilita o uso de “Meios Opacos”;

� Não existe choque térmico “devido” ao meio de cultura ;

� Inóculo de 0,1 a 0,5 mL;

Técnica de Espalhamento em

Profundidade (“Pour-Plate”)

� Não possibilita o uso de “Meios Opacos”;

� Existe choque térmico “na adição” do meio de cultura;

� Inóculo de 1 a 5 mL;

� Detecção difícil de colônias no interio do meio de cultura

MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANA 16

CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA

Contagem de Colônias

Inverso da Diluição da Amostra

X

X

Determinação da Contagem de Unidades Formadoras de ColôniasUnidades Formadoras de Colônias

na Amostra

Fator de Correção de Volume do Inóculo

X

MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANA 17

CONTAGEM DE VIÁVEIS EM MEMBRANA FILTRANTE

Permite a Análise de “Grandes” Volumes

Meio de Cultura