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Claire Francisco
Luís Miguel Santos
Nilma Vanessa Harilal
Ricardo Viais
Mestrado de Bioquímica
Estrutura e Função de Proteínas
2011/2012
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Efeito da indução da IGFBP-3 pela MS-275
Linhas celulares de hepatoblastomas: HepG2 e HuH6
HepG2 + MS-275 (24h)
Aumento da acetilação das histonas H3 e H4
Perda de viabilidade
24h
48h
controlos
controlos
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Efeitos da indução da IGFBP-3 pela MS-275
Inibição da síntese DNA Indução da apoptose
6 µM MS-275
0 µM MS-275
Perda de viabilidade celular
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Efeito da indução da IGFBP-3 pela MS-275
24h
48h
Secreção de IGFBP-3 aumentada pela MS-275
mRNA IGFBP-3 aumentada na presença de MS-275
Células HepG2
HuH6Secreção de IGFBP-3 indetectável
mRNA IGFBP-3 induzível pela MS-275
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Efeito da indução da IGFBP-3 pela MS-275
Poço 1 e 5 – Imunoprecipitado de RNA pol IIPoço 2 e 6 – Controlo IgGPoço 3 e 7 – Histona H3 acetilada imunoprecipitadaPoço 4 e 8 – Histona H4 anti-acetil
Controlos positivos
Tratamento com MS-275 levou ao aumento de H3 acetilada
Imunoprecepitados negativos
Fraca associação
Histona H3 acetilda associa-se com o promotor da IGFBP-3, levando a um enhancement da transcrição
? Acho que
não percebi bem
este gráfico
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Efeito da sub-regulação da IGFP-3 endógena
< 0,5 ng/mL
Células HepG2
Células HuH6
IGFBP-3 secretado indetectável
Transfecções com siRNA por electroporação
Células HepG2
Células HuH6
mRNA IGFBP-3 80% inferior com siRNA da IGFBP-3
90% inferior
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Efeito da sub-regulação da IGFP-3 endógena
Células viáveis diminuiram com 6 µM MS-275
Perda de viabilidade revertida pela sub-regulação IGFBP-3 pelo siRNA
Sub-regulação IGFBP-3 pelo siRNA não tem efeito na viabilidade na ausência de MS-275