Determinação de Aflatoxinas (B1, B2, G1, G2) em alimentos usando o triplo quadrupoloLC/MS/MS
Celso Blatt, Ph.D.
Agilent Technologies Brasil Ltda
1
Agenda:
1. Descrever um método viável e robusto para determinarsimultaneamente as aflatoxinas B1, B2, G1 e G2, usando LC-MS/MS para quatro tipos de alimentos (farinha de milho, amendoim, trigo e nozes);
2. Descrição do método e otimização;
3. Comparação entre preparos de amostra e custos;3. Comparação entre preparos de amostra e custos;
4. Mostrar a boa linearidade da curva atraves da faixa de concentração entre 0.1 a 100ng/g;
5. Descrever a sensibilidade e recuperação para cada aflatoxinaadicionada em cada uma das 4 matrizes;
6. Comparar o uso de padrão interno isotópico.
2
Introdução
“Aflatoxinas são um grupo de micotoxinas produzidas como metabolitos de um fungo Aspergillus flavus e Aspergillus parasiticus” :
•Elas podem ser encontradas em vários alimentos como grãos, nozes
e especiarias;
•As quatro aflatoxinas mais comuns naturalmente são: B , B , G e •As quatro aflatoxinas mais comuns naturalmente são: B1, B2, G1 e
G2;
•A exposição a elas pode causar cancer em humanos ou em animais;
•Métodos analíticos confiáveis e sensíveis para determinação de
aflatoxinas são necessários para garantir que nosso alimento seja
seguro.
3
Análises de aflatoxinas:
•Micotoxinas são produtos químicos tóxicos formados como metabólitossecundários de uma espécie de fungo que rapidamente coloniza as plantações e contamina tudo ou após a colheita;
•Aflatoxinas e Ocratoxinas são micotoxinas mais significativas;
•Os métodos de pre-tratamento de amostra mais usados são extraçãolíquido-liquido, extração em fase sólida ou extração com fluidoslíquido-liquido, extração em fase sólida ou extração com fluidossupercríticos;
•Os métodos de separação/analíticos mais usados são TLC, HPLC, GC, CE e ELISA.
*Review article – Nicholas W. Turner, Sreenath Subrahmanyam, Sergey A. Piletsky, Analytica Chimica Acta 632 (2009) 168–180.
4
Aflatoxinas deste estudo:
Aflatoxina G1 & G2 :
(produzida pela Aspergillus parasiticus.)
Aflatoxina B1 & B2 :
(produzida pela Aspergillus flavus
e A. parasiticus. )
5
Metodologia – preparo da amostra
10g of ground Corn flour, wheat,
peanut or walnut
Spiked with mixture of aflatoxins
@ 5 & 25 ng/g
Sample extracted in 40ml ACN/H O Sample extracted in 40ml ACN/H2O
(84/16%, v/v), 30 min/ambient/shaking
Natural settlement, supernatant
Transferred via two methods
MycoSep Clean-upSolid phase dispersive
Clean-up
6
Metodologia – preparo da amostra (continuação)
MycoSep Clean-up#226, Romer
Solid phase dispersiveClean-up
7ml supernatant cleaned with flash
Multifunctional MycoSep column
0.4ml aliquot diluted with Add 200mg of C18 ODS SPE bulk
0.8ml supernatant transferred to
1.7ml micro-centrifuge tubes
0.4ml supernatant diluted with 0.6ml
10mM ammonium acetate for LC/MS
Vortex for 1 min & centrifuge
@ 14,000 rpm, 3min
Supernatant used for
LC/MS analysis
Centrifuge @ 14,000 rpm,
3 min
0.4ml aliquot diluted with
0.6ml (10mM) ammonium acetate
Add 200mg of C18 ODS SPE bulk
Sorbent, Agilent (p/n 5982-1182)
7
Metodologia - HPLC
Coluna: Zorbax Eclipse C18, 4.6 x 50 mm, 1.8 µm
Fluxo: 0.6 mL/minTemp. Coluna: 40°C
Volume injeção: 5 µL
Canal A: 10 mM acetato de amonia em água,
Canal B: methanol
Gradiente: Tempo (min)
A (%) B (%)
(LC�Waste) 0 95 5
(LC�MS) 1.3 95 5
5 0 100
6.0 0 100
Pós-corrida: 1.5 min
Tempo de cliclo: 8 min
8
Metodologia – MS QQQ
Temp. gás secagem: 325°CFluxo do gás: 10 L/min Pressão nebulizador: 50 psi
Temp. Sheath gas: 350°CFluxo do Sheath gas: 11 L/min
Nebulizer N2 gas
(near sonic velocity)
Super-heated N2
sheath gas
LC flow
Fluxo do Sheath gas: 11 L/minVoltagem da agulha: 1000 V
delta EMV: 400 VVoltagem capilar: 4000 V
Thermal focusing
Electrospray
9
Formula Nominal
Mass
[M+H]+
m/z
Aflatoxin B1 C17
H12
O6
312.07 313.1
Aflatoxin B2 C17
H14
O6
314.08 315.1
Aflatoxin G1 C17
H12
O7
328.06 329.1
Aflatoxin G2 C17
H14
O7
330.08 331.1
Aflatoxinas – Ion precursor
10
QQQ – Otimização do analito: Maximizando a sensibilidade do QQQ.
Voltagem do fragmentor Energia de colisão
11
Aflatoxina B1 – Otimização do fragmentor
220 V200 V
180 V160 V100 V80 V60 V40 V 140 V120 V
Cromatograma do ion extraído, m/z = 131.1
180 V160 V100 V80 V60 V40 V 140 V120 V
Máxima transmissão da AFL B1 [M+H]+ = 130 V
12
Aflatoxina B1 – Otimização da energia de colisão
5x10
0
1
+ESI Product Ion (0.411-0.650 min, 30 scans) Frag=140.0V [email protected] (313.1 -> **) Aflatoxin B1_FIA_CD.d
313.1
285.1
5x10
0
0.5
1
1.5+ESI Product Ion (0.926-1.171 min, 29 scans) Frag=140.0V [email protected] (313.1 -> **) Aflatoxin B1_FIA_CD.d
313.1
285.1
4x10
0
5
+ESI Product Ion (1.452-1.697 min, 29 scans) Frag=140.0V [email protected] (313.1 -> **) Aflatoxin B1_FIA_CD.d
313.1
285.1270.0
4x10
2
4
+ESI Product Ion (1.978-2.205 min, 27 scans) Frag=140.0V [email protected] (313.1 -> **) Aflatoxin B1_FIA_CD.d
313.1285.1
270.0298.1241.1214.1
20 eV
15 eV
10 eV
5 eV
5x10
1.05
1.1
1.15
1.2
1.25
1.3
1.35
1.4
1.45
1.5
1.55
1.6
1.65
1.7
1.75
1.8
1.85
1.9
+ESI Product Ion (0.411-0.650 min, 30 scans) Frag=140.0V [email protected] (313.1 -> **) Aflatoxin B1_FIA_CD.d
313.1
Product Ion Spectra Overlaid;
(All Collision Energies)
4x10
2.3
2.4
2.5
2.6
2.7
2.8
2.9
3
3.1
3.2
3.3
3.4
3.5
3.6
3.7
3.8
3.9
4
4.1
4.2
+ESI Product Ion (1.978-2.205 min, 27 scans) Frag=140.0V [email protected] (313.1 -> **) Aflatoxin B1_FIA_CD.d
313.1
285.1
Ion produto m/z = 285.1
Energia de colisão = 20 eV
4x10
2.8
2.9
3
+ESI Product Ion (1.978-2.205 min, 27 scans) Frag=140.0V [email protected] (313.1 -> **) Aflatoxin B1_FIA_CD.d
285.120 eV
FIA TIC – AFL B1
0
4x10
0
1
+ESI Product Ion (2.503-2.731 min, 27 scans) Frag=140.0V [email protected] (313.1 -> **) Aflatoxin B1_FIA_CD.d
285.1269.1 313.1241.1
214.1 298.0257.1187.1
4x10
0
0.5
1
1.5
+ESI Product Ion (3.020-3.265 min, 29 scans) Frag=140.0V [email protected] (313.1 -> **) Aflatoxin B1_FIA_CD.d
241.1 269.0285.1
214.1
253.0 313.1229.1 298.0185.1158.0141.1
4x10
0
1
+ESI Product Ion (3.546-3.791 min, 29 scans) Frag=140.0V [email protected] (313.1 -> **) Aflatoxin B1_FIA_CD.d
241.1269.0
214.1
185.1 285.1253.1158.1141.1115.1
4x10
0
1
+ESI Product Ion (4.072-4.308 min, 28 scans) Frag=140.0V [email protected] (313.1 -> **) Aflatoxin B1_FIA_CD.d
241.1213.1
269.1185.1
115.1 158.1141.1 253.1201.1 227.0
Counts vs. Mass-to-Charge (m/z)
50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 360 370 380 390 400 410 420 430 440 450
25 eV
35 eV
30 eV
40 eV0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.35
0.4
0.45
0.5
0.55
0.6
0.65
0.7
0.75
0.8
0.85
0.9
0.95
1
285.1
Counts vs. Mass-to-Charge (m/z)
50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 360 370 380 390 400 410 420 430 440 450
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
1.1
1.2
1.3
1.4
1.5
1.6
1.7
1.8
1.9
2
2.1
2.2
2.3
270.0
298.1
241.1 257.1
Counts vs. Mass-to-Charge (m/z)
240 245 250 255 260 265 270 275 280 285 290 295 300 305 310 315 320
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
1.1
1.2
1.3
1.4
1.5
1.6
1.7
1.8
1.9
2
2.1
2.2
2.3
2.4
2.5
2.6
2.7
2.8
284.1
Counts vs. Mass-to-Charge (m/z)
278.5 279 279.5 280 280.5 281 281.5 282 282.5 283 283.5 284 284.5 285 285.5 286 286.5 287 287.5 288 288.5 289 289.5 290 290.5 291
5 eV
15 eV
10 eV
25 eV
13
Transições MRM – aflatoxinas B1, B2, G1 & G2
Name Retention
time (min)
Fragmentor
voltage
(V)
Precursor ion
(m/z)
Product ion
(m/z)
Collision
energy
(eV)
Aflatoxin B1 4.68 130 313.1 241.1 35
285.1 20
269.1 25
Aflatoxin B2 4.57 130 315.1 287.1 25
259.1 25
243.1 40
Aflatoxin G1 4.40 130 329.1 243.1 25
311.1 20
283.1 20283.1 20
Aflatoxin G2 4.26 130 331.1 245.1 30
285.1 25
313.1 25
Isotope B1 4.68 130 330.1 301.1 20
255.1 40
Isotope B2 4.57 130 332.1 303 25
273.0 30
Isotope G1 4.40 130 346.1 257.1 25
299.1 25
Isotope G2 4.26 130 348.1 330.1 25
259.1 30
14
Cromatogramas sobrepostos do branco e adicionado (spike)
a, Branco de amendoin e spike 5 ppb b, Branco milho e spike 5 ppb
15
Chromatografia
B1
G2
B2G1
aflatoxinas
Sobreposição EICs
Quant ion & 2 x Qualifiers
(1ppb)
G2
Aflatoxinas marcadas
Sobreposição EICs
Quant ion & Qualifier ion
(2.5ppb)
B1
G2
B2G1
16
B1
Curvas com Aflatoxinas
B2
17
G1
Curvas com Aflatoxinas
G2
18
Curvas com Aflatoxinas B1, B2, G1 & G2
400,000
500,000
600,000
700,000
800,000
LC
-MS
resp
on
ses
B1, y=6747x + 938, R2=0.9988
B2, y=5099x + 1329, R2=0.9984
G1, y=4308x + 739, R2=0.9989
G2, y=1088x + 241, R2=0.9988
B2
G1
B1
SEMPadrãoInterno
0
100,000
200,000
300,000
0 20 40 60 80 100 120
Aflatoxin concentration (ng/mL)
LC
-MS
resp
on
ses
G2
Interno
19
90,000
120,000
150,000
LC
-MS
resp
on
ses
B1, y=6747x + 938, R2=0.9988
B2, y=5099x + 1329, R2=0.9984
G1, y=4308x + 739, R2=0.9989
G2, y=1088x + 241, R2=0.9988
Curvas com Aflatoxinas – (ampliado)
B2
G1
B1
SEM
0
30,000
60,000
0 4 8 12 16 20
Aflatoxin concentration (ng/mL)
LC
-MS
resp
on
ses
G2
SEMPadrãoInterno
20
Limite de detecção do método em milhoComparação dos métodos de clean-up
Aflatoxin Mycosep
(#226, Romer)
Dispersive C18ODS SPE bulk
Sorbent,
Agilent (p/n 5982-1182)
LOD LOR LOD LOR
B1 0.047 0.16 0.060 0.20
Milho – média de 7x Batches
B2 0.036 0.12 0.085 0.28
G1 0.08 0.28 0.10 0.35
G2 0.046 0.15 0.033 0.11
Units = ng/g,
LOD = Limit of Detection (S/N >3 )
LOR = Limit of reporting (S/N > 10)
S/N algorithm = peak to peak
21
Limite de detecção do método em trigoComparação dos métodos de clean-up
Aflatoxin Mycosep
(#226, Romer)
Dispersive C18ODS SPE bulk
Sorbent,
Agilent (p/n 5982-1182)
LOD LOR LOD LOR
B1 0.068 0.23 0.012 0.042
Trigo – média de 7x Batches
B2 0.11 0.36 0.037 0.12
G1 0.14 0.47 0.15 0.50
G2 0.038 0.13 0.11 0.36
Units = ng/g,
LOD = Limit of Detection (S/N >3 )
LOR = Limit of reporting (S/N > 10)
S/N algorithm = peak to peak
22
Limite de detecção do método em amendoimComparação dos métodos de clean-up
Aflatoxin Mycosep
(#226, Romer)
Dispersive C18ODS SPE bulk
Sorbent,
Agilent (p/n 5982-1182)
LOD LOR LOD LOR
B1 0.051 0.17 0.056 0.19
Amendoim – média de 7x Batches
B2 0.045 0.15 0.069 0.23
G1 0.07 0.23 0.05 0.15
G2 0.052 0.17 0.14 0.45
Units = ng/g,
LOD = Limit of Detection (S/N >3 )
LOR = Limit of reporting (S/N > 10)
S/N algorithm = peak to peak
23
Limite de detecção do método em nozesComparação dos métodos de clean-up
Aflatoxin Mycosep
(#226, Romer)
Dispersive C18ODS SPE bulk
Sorbent,
Agilent (p/n 5982-1182)
LOD LOR LOD LOR
B1 0.12 0.41 0.093 0.31
Nozes – média de 7x Batches
B2 0.035 0.12 0.098 0.33
G1 0.03 0.10 0.12 0.40
G2 0.047 0.16 0.04 0.13
Units = ng/g,
LOD = Limit of Detection (S/N >3 )
LOR = Limit of reporting (S/N > 10)
S/N algorithm = peak to peak
24
Limites de detecção para Aflatoxinas
Dispersive C18 ODS bulk sorbent, vortexed.
Food Matrix B1LOD (ng/g)
B2LOD (ng/g)
G1LOD (ng/g)
G2LOD (ng/g)
Corn 0.060 0.085 0.100 0.033
Wheat 0.012 0.037 0.150 0.110
Peanut 0.056 0.069 0.050 0.140
Walnut 0.093 0.098 0.120 0.040
LOD = Limit of Detection (S/N >3 )
S/N algorithm = peak to peak
Average = 0.055 0.072 0.105 0.080
Mass On-Column = 275 fg 360 fg 525 fg 400 fg
25
Limites de detecção para Aflatoxinas
Mycosep, #226 clean-up
Food Matrix B1LOD (ng/g)
B2LOD (ng/g)
G1LOD (ng/g)
G2LOD (ng/g)
Corn 0.047 0.036 0.080 0.046
Wheat 0.068 0.110 0.140 0.038
Peanut 0.051 0.045 0.070 0.052
Walnut 0.120 0.035 0.030 0.047
LOD = Limit of Detection (S/N >3 )
S/N algorithm = peak to peak
Average = 0.072 0.057 0.080 0.046
Mass On-Column = 360 fg 283 fg 400 fg 229 fg
26
Limites de detecção para Aflatoxinas
Método Dispersive C18 x Mycosep, #226 clean-up
aflatoxin: B1LOD
B2LOD
G1LOD
G2LOD
Dispersive C18 Average
Mass On-Column = 275 fg 360 fg 525 fg 400 fg
LOD = Limit of Detection (S/N >3 )
S/N algorithm = peak to peak
Mycosep 3226:Average
Mass On-Column = 360 fg 283 fg 400 fg 229 fg
27
Curvas de aflatoxinas B1, B2, G1 & G2
400,000
500,000
600,000
700,000
800,000
LC
-MS
resp
on
ses
B1, y=6747x + 938, R2=0.9988
B2, y=5099x + 1329, R2=0.9984
G1, y=4308x + 739, R2=0.9989
G2, y=1088x + 241, R2=0.9988
B2
G1
B1
SEMPadrãoInterno
0
100,000
200,000
300,000
0 20 40 60 80 100 120
Aflatoxin concentration (ng/mL)
LC
-MS
resp
on
ses
G2
Interno
28
25
30
35
40
45
50
Re
sp
on
se
ra
tio
n
(afl
ato
xin
/is
oto
pe
afl
ato
xin
2.5
ng
/mL
)B1, y=0.46x-0.18, R2=0.9998
B2, y=0.40x-0.12, R2=0.9996
G1, y=0.40x-0.08, R2=0.9999
G2, y=0.44x-0.05, R2=0.9999
b
Curvas ISTD para aflatoxinas B1, B2, G1 & G2
0
5
10
15
20
25
0 20 40 60 80 100 120
Aflatoxin concentration (ng/mL)
Re
sp
on
se
ra
tio
n
(afl
ato
xin
/is
oto
pe
afl
ato
xin
2.5
ng
/mL
)
b
Com padrão interno@ 2.5ng/ml
29
Estudos de recuperação - milho(% Recuperação, ± RSD, N=7)
Aflatoxin Corn spiked
at 5 ng/g
C18 clean-up
Corn spiked
at 25 ng/g
C18 clean-up
Corn spiked
at 5 ng/g
MycoSep#226
Corn spiked
at 25 ng/g
Mycosep#226
B1 101.7 ± 3.7 95.7 ± 3.0 107.8 ± 2.8 105.4 ± 2.8
B2 95 ± 6.3 95.4 ± 1.4 103.0 ± 5.7 105.3 ± 2.0
G1 102.7 ± 7.1 96.8 ± 1.75 110.2 ± 7.9 103.7 ± 3.0
G2 107.9 ± 3.5 97.8 ± 0.88 108.1 ± 5.4 104.3 ± 2.4
Sem Padrão interno:
Padrão interno:
Aflatoxin Corn spiked
at 5 ng/g
C18 clean-up
Corn spiked
at 25 ng/g
C18 clean-up
Corn spiked
at 5 ng/g
MycoSep#226
Corn spiked
at 25 ng/g
Mycosep#226
B1 102.3 ± 2.9 100.1 ± 2.4 108.2 ± 5.1 97.8 ± 3.3
B2 100.0 ± 7.9 94.0 ± 3.1 101.7 ± 4.7 92.8 ± 3.5
G1 107.3 ± 3.5 97.0 ± 6.0 110.3 ± 3.6 102.5 ± 1.8
G2 101.3 ± 5.6 100.4 ± 3.8 104.9 ± 5.4 97.2 ± 6.3
Padrão interno:
30
Estudos de recuperação - trigo(% Recuperação, ± RSD, N=7)
Sem padrão interno:
Padrão interno:
Aflatoxin Wheat spiked
at 5 ng/g
C18 clean-up
Wheat spiked
at 25 ng/g
C18 clean-up
Wheat spiked
at 5 ng/g
MycoSep#226
Wheat spiked
at 25 ng/g
Mycosep#226
B1 100.1 ± 4.4 96.6 ± 2.9 113.5 ± 5.9 100.6 ± 1.8
B2 98.2 ± 6.9 96.4 ± 2.6 105.1 ± 4.5 102.1 ± 4.4
G1 100.5 ± 5.5 105.4 ± 3.8 111.5 ± 10.4 106.1 ± 4.0
G2 104.9 ± 3.2 106.7 ± 1.3 108.6 ± 5.2 103.7 ± 2.9
Padrão interno:
Aflatoxin Wheat spiked
at 5 ng/g
C18 clean-up
Wheat spiked
at 25 ng/g
C18 clean-up
Wheat spiked
at 5 ng/g
MycoSep#226
Wheat spiked
at 25 ng/g
Mycosep#226
B1 100.9 ± 3.6 109.3 ± 4.7 107.5 ± 4.8 111.7 ± 4.9
B2 85.2 ± 7.7 99.8 ± 2.8 92.4 ± 6.3 101.0 ± 4.0
G1 110.6 ± 7.8 112.8 ± 1.8 117.6 ± 7.7 109.3 ± 5.7
G2 108.4 ± 6.2 108.3 ± 3.9 115.6 ± 7.1 109.8 ± 3.6
31
Estudos de recuperação - amendoim(% Recuperação, ± RSD, N=7)
Sem padrão interno:
Padrão interno:
Aflatoxin Peanut spiked
at 5 ng/g
C18 clean-up
Peanut spiked
at 25 ng/g
C18 clean-up
Peanut spiked
at 5 ng/g
MycoSep#226
Peanut spiked
at 25 ng/g
Mycosep#226
B1 96.7 ± 3.4 97.0 ± 4.6 112.0 ± 8.4 104.9 ± 1.7
B2 98.3 ± 4.7 97.4 ± 2.9 108.0 ± 4.6 104.5 ± 2.0
G1 95.0 ± 5.6 95.0 ± 4.9 109.9 ± 2.1 105.7 ± 3.4
G2 100.0 ± 2.3 100.0 ± 2.0 114.7 ± 3.2 106.3 ± 1.1
Padrão interno:
Aflatoxin Peanut spiked
at 5 ng/g
C18 clean-up
Peanut spiked
at 25 ng/g
C18 clean-up
Peanut spiked
at 5 ng/g
MycoSep#226
Peanut spiked
at 25 ng/g
Mycosep#226
B1 101.8 ± 3.6 96.1 ± 2.0 100.0 ± 6.8 103.0 ± 3.5
B2 102.5 ± 5.5 100.2 ± 5.0 99.4 ± 4.1 102.9 ± 2.7
G1 105.7 ± 7.3 99.2 ± 2.2 105.2 ± 4.3 101.7 ± 5.2
G2 107.5 ± 10.9 104.9 ± 6.7 109.3 ± 8.7 102.4 ± 3.1
32
Estudos de recuperação - nozes(% Recuperação, ± RSD, N=7)
Sem padrão interno:
Padrão interno:
Aflatoxin Walnut spiked
at 5 ng/g
C18 clean-up
Walnut spiked
at 25 ng/g
C18 clean-up
Walnut spiked
at 5 ng/g
MycoSep#226
Walnut spiked
at 25 ng/g
Mycosep#226
B1 84.9 ± 3.7 85.2 ± 2.2 101.4 ± 3.2 101.0 ± 2.3
B2 91.5 ± 3.9 89.8 ± 2.8 104.2 ± 7.9 106.3 ± 2.9
G1 89.4 ± 4.4 86.7 ± 1.5 103.9 ± 5.9 101.7 ± 4.2
G2 84.0 ± 4.0 83.1 ± 1.3 109.9 ± 3.4 106.3 ± 1.5
Padrão interno:
Aflatoxin Walnut spiked
at 5 ng/g
C18 clean-up
Walnut spiked
at 25 ng/g
C18 clean-up
Walnut spiked
at 5 ng/g
MycoSep#226
Walnut spiked
at 25 ng/g
Mycosep#226
B1 106.5 ± 4.9 98.9 ± 4.1 93.8± 1.4 100.2 ± 2.9
B2 99 ± 5.4 96.5 ± 3.5 92.4 ± 2.7 98.7 ± 4.4
G1 103.2 ± 5.9 94.9 ± 2.5 102.8 ± 9.0 102.1 ± 3.9
G2 100.2 ± 6.2 97.5 ± 4.6 99.5 ± 6.8 101.2 ± 3.8
33
Resumo - Estudos de recuperação
• Em uma matriz alimento isenta de aflatoxinas foi feito o spike com aflatoxinasB1, B2, G1, G2 @ 5 e 25 ng/g;
•Clean-up usando Dispersive C18, ou Mycosep #226;
•Ambos métodos de preparo deram recuperações entre 95-110%;
•Não houve nenhuma diferença substancial entre os métodos de clean-up paraas amostras de milho, trigo e amendoim;
•Nenhuma diferença em resultados com e sem padrão interno para milho, trigo e •Nenhuma diferença em resultados com e sem padrão interno para milho, trigo e amendoim;
•A recuperação para dispersive C18 foi consistentemente menor para nozes(83-90%);
•Os dados de precisão para recuperação foram tipicamente abaixo de 5% RSD nos 7 batches;
•As baixas recuperações para nozes foram superadas com o uso do padrãointerno.
34
Resumo do método de aflatoxina e desempenho
•O método de clean-up barato e rápido Dispersive C18 clean-up demonstraresultados comparáveis com a técnica conhecida MycoSep com muitasemelhança em performance analitica;
•aflatoxinas B1, B2, G1 & G2 deram um LODs menor do que 140ng/g (menos do que 530fg on-column) para as 4 matrizes de alimentos;
•Os estudos de recuperação para 7 batches mostraram uma recuperação•Os estudos de recuperação para 7 batches mostraram uma recuperaçãoentre 95 e 110% para ambos métodos de clean-up;
•Uma exceção devido provavelmente a supressão de ions ocorrreu com nozes usando a dispersive C18 para o clean-up. Isto foi superado usandopadrões internos marcados isotopicamente.
35