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7/29/2019 Cromatografia de excluso molecular e Cromatografia de Afinidade - Sem videos
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Cromatografia de ExclusoMolecular e Cromatografia de
Afinidade
Alessandra Honjo Ide
Franciane de Almeida Brehm
Larissa Richter
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INTRODUO
Ambos os mtodos, da excluso molecular e
de afinidade, so mtodos de cromatografia
LQUIDA;
So mtodos muito novos, visto que, seus
desenvolvimentos se iniciaram,
respectivamente em 1964 e 1987.
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Como funciona um HPLC?
Para compreender melhor como funcionam as
tcnicas, vamos verificar um pouco o
funcionamento de um HPLC.
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Como funciona um HPLC?
VIDEO HPLC
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CROMATOGRAFIA DE AFINIDADE
, comumente, um mtodo de separao de
misturas bioqumicas, baseadas em interaes
biolgicas altamente especficas como:
Antgeno e Anticorpo;
Enzima e substrato;
Receptor e ligante.
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USOS DA CROMATOGRAFIA DEAFINIDADE
Purificar e concentrar uma substncia de uma de uma
mistura para uma soluo-tampo;
Reduzir a quantidade de uma substncia em umamistura;
Descobrir qual composto biolgico se liga a uma
substncia em particular;
Purificar e concentrar uma soluo de enzimas.
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QUAL O PRINCPIO DA SEPARAO?
A fase ESTACIONRIA comumente uma matriz gelatinosa,
geralmente de agarose.
A molcula de interesse na mistura deve ter suas caractersticas
fsico-qumicas conhecidas, de modo que uma propriedade definida
e diferente das demais deve existir para que seja explorada na
interao com a fase estacionria;
Como as outras substncias da mistura no possuem essa
interao, no sero retidas na coluna;
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QUAL O PRINCPIO DA SEPARAO?
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QUAL O PRINCPIO DA SEPARAO?
Podemos detalhar entre:
A fase estacionria
O processo de Eluio
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A FASE ESTACIONRIA
O composto de interesse se liga ao
composto contido fase estacionria.
Por exemplo: numa mistura de protenas
A, B, C e D, desejamos estudar a protenaA, que se liga facilmente com glicose.
Portanto, a parede do tubo aonde essa
mistura ser despejada conter glicose,
que logo atrair a protena A para si,
conseqentemente separando-a das
demais, que sero filtradas do tubo.
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A ELUIO
Aps restar na fase estacionria apenas os
ligante com os compostos de interesse,
despejado no tubo uma soluo contendo os
mesmos ligantes contidos na parede do tubo ou
reagente desnaturantes (uria, guanidina, etc)
desprendendo a protena da parede do tubo.
No exemplo, adicionado uma soluo de
resduos de glicose que fazem com que a
protena A se desprenda da parede do tubo,
sendo despejada, em meio a soluo, em outro
tubo para estudo.
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PARA ENTENDER MELHOR:
VIDEO AFINIDADE
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APLICAES
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INTRODUO
FALTA COMENTAR: Detectores, principaiscolunas, principais utilizaes, preparo deamostra: Tem naquele livro!
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INTRODUO
VIDEO ALE