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Profa. Zara Hoffmann
CromatografiaConceitos Básicos
Cromatografia
• Método físico-químico para separação dos componentes de uma mistura
• Efetua-se fazendo-se passar uma solução (líquida ou gasosa) através de uma fase estacionária, onde se efetua o procedimento de separação.
• A solução recebe a denominação de fase móvel (líquida ou gasosa)
• A fase estacionária (sólida ou líquida)
• Esta separação resulta das diferenças de velocidade dos componentes arrastados
pela fase móvel devido às diferentes interações com a fase estacionária.
• Os principais métodos cromatográficos são: cromatografia em papel (CP), cromatografia de camada delgada (CCD), cromatografia gasosa (CG) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE).
• A seleção do método a ser empregado depende do material a ser utilizado.
Algumas definições
• Dissolvente: substância ou mistura de substâncias que constituem a fase móvel (geralmente líquido com alta PVapor)
• Origem: onde se aplica a amostra• Adsorção: concentração na superfície de um
sólido, das partículas de uma substância em dissolução
• Eluente: dissolvente polar• Série eluotrópica: pentano, éter de petróleo,
cicloexano, benzeno, clorofórmio, éter etílico, acetato de etila, acetona, etanol
Cromatografia por Adsorção fase estacionária sólida
• À medida que a solução passa através da fase sólida, os solutos vão sendo sucessivamente adsorvidos e dessorvidos, cada qual com uma característica específica
• Os que são mais adsorvidos atrasam-se em relação aos menos adsorvidos, e consegue-se a separação uns dos outros
Cromatografia por partição fase estacionária líquida
• O mecanismo da separação é baseado na diferente repartição dos solutos entre o solvente da solução e o líquido estacionário (solubilidade e interações intermoleculares)
• Cromatografia em coluna (fase
estacionária sólida) • Cromatografia em papel (fase
estacionária líquida)
• Cromatografia em camada fina (fase estacionária sólida)
• Cromatografia Gasosa (fase estacionária sólida)
Utilização
• Técnica de análise muito versátil
• Extensa e corrente aplicação em bioquímica, em química analítica, etc– Separação de componentes– Identificação de compostos (comparação com
padrões)– Purificação de compostos
Cromatografia em Camada Delgada (CDD)
• Técnica de Adsorção líquido/sólido
• Diferença de afinidade dos componentes de uma mistura pela fase estacionária
• Reações orgânicas, purificação e identificação de substâncias
• Placas de vidro (3/4mm) + sílica Gel ou alumina(fase estacionária)- polares
• Ativação: 105 – 110º.C, por 30/60 min
• Fase móvel – solvente adequado ou mistura (pouco polar)
• Cuba de vidro tampada – capilaridade• Revelação: fase estacionária fluorescente
(UV), ou iodo (complexos c/compostos insaturados)
• Fator de Retenção - Rf - Razão entre a distância percorrida pela substância em questão e a distância percorrida pela fase móvel
• Valores ideais entre 0,4 e 0,6
Cromatografia de placas (CDD)
Cromatografia Líquida de Alta Eficiência – CLAE (HPLC)
• Os componentes de um cromatógrafo líquido são:– bomba, coluna cromatográfica, detector e o
registrador.• Fase móvel
– dissolver a amostra sem qualquer interação química entre ambas; ter alto grau de pureza (impurezas podem interferir na detecção do analito por ultravioleta- UV; ser compatível com o detector empregado e possuir polaridade adequada para permitir uma separação conveniente dos componentes da amostra.
• Solventes: água, metanol e acetonitrila.
• Fase estacionária– utiliza-se sólidos ou semi-rígidos, partículas porosas
esféricas ou irregulares com diferentes diâmetros e suportam pressão até 350 bar.
• A coluna cromatográfica– material inerte que resiste a todas as pressões em
que ela vai ser usada
• Capacidade da coluna– determinada pelo comprimento, diâmetro e pelo
material de recheio.
• As colunas geralmente utilizadas são: octadecil (C18, RP18, ODS), octil (C8, RP8), CN (cianopropil) e NH2 (amina).
• Detectores mais usados– os fotométricos, baseados na absorbância
no ultra-violeta e no visível– os detectores de fluorescência (ordem de
picograma)– detectores por índice de refração
(acompanham continuamente a diferença no índice de refração entre a fase móvel pura e o eluente que sai da coluna contendo os componentes da amostra (ordem de micrograma.).
Cromatografia de Alta Resolução e Absorção Atômica
HPLC