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22/03/2010 1 Disciplina Biologia Celular Profª Cristina Lacerda Soares Petrarolha Silva Curso de Biotecnologia FISMA / FEA Aula 2: Tecnologia da Biologia Celular Parte I Bio Cel Profª Cristina

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22/03/2010

1

Disciplina Biologia Celular

Profª Cristina Lacerda Soares Petrarolha Silva

Curso de Biotecnologia

FISMA / FEA

Aula 2:Tecnologia da Biologia Celular

Parte I

Bio Cel Profª Cristina

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Tamanho das céls e seus componentes

Unidades de medidas

utilizadas

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1- Confecção de cortes para microscopia

• Ao natural

• Preservadas

– Fixação:

• Evita Autólise e Proliferação bactérias

• Propicia endurecimento celular

• Aumenta afinidade a corantes e contrastes

• FORMOL e GLUTARALDEÍDO

• TETRÓXIDO DE ÓSMIO e GLUTARALDEÍDO

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– Microtomia

• Inclusão

• Corte espessura 1 a 6 μm

• Corantes

– Organelas transparentes

– Corantes Básicos :

• grupamento cromóforo catiônico (+ carga positiva)

• Afinidade por ácidos (aniônicos – carga negativa)

• DNA e RNA são basófilas

• Ex: azul de toluidina, azul de metileno, hematoxilina

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– Corantes Ácidos :

• grupamento cromóforo aniônico (: – carga negativa)

• Afinidade por bases (catiônicos: + carga positiva)

• Proteínas são acidófilas

• Ex: Eosina, Fucsina ácida e Orange G

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2- Microscópio Óptico ou de Luz

s

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• Sinônimos para o microscópio óptico:

– Microscópio Comum

– Microscópio de Luz

– Microscópio Fotónico

– Microscópio de Campo Claro

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• Porção mecânica

• Porção óptica

– Sistema óptico de observação

– Sistema óptico de iluminação

O Princípio de funcionamento:

– Condensador: projeta cone luz material em observação

– Cone de luz atravessa o objeto e atinge a objetiva

– Objetiva: projeta imagem aumentada no plano focal da ocular

– Ocular – novamente aumenta o objeto

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Para uma leitura mais detalhada de como ocorre a formação da imagem no olho, consulte:

• MARQUES, G. C., UETA, N. Ótica da visão. Disponível em: http://efisica.if.usp.br/otica/basico/visao/olho/

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• Ampliação do microscópio= aumento da objetiva X aumento da ocular

• Poder de resolução: – capacidade de separar detalhes

• É medido pelo Limite de resolução– Menor distância que deve existir entre dois

pontos, para que eles apareçam individualizados

• O que determina a riqueza dos detalhes:

Poder de resolução

ou

Ampliação ??????

Compr. onda

objetiva

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Outros Microscópios Ópticos

• Microscópio de Polarização

• Microscópio de Contraste de Fase

• Microscópio Confocal

• Microscópio de Fluorescência

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Polarização

• Foco de luz polarizado

• Estruturas e substâncias celulares dividem o foco de luz em 2 (planos perpendiculares) = estruturas anisotrópica e são birrefrinfgentes - apresentam índice de refração diferentes conforme a incidência da luz

• Estruturas isotrópicas – não modificam o plano de polarização da luz

• Prismas: polarizador (condensador)

• analisador (objetiva)

Em planos

perpendiculares

permitem a

visualização apenas

das estruturas

birrefringentes

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reflexão

refração

Contraste de Fase

• Transforma as diferenças de fase dos raios luminosos em diferenças de intensidade luminosa.

• Fase escura (positiva) e fase clara (negativa)

• Estudo de células vivas

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Comparações

• A) Microscópio óptico comum, B) Contraste de fase POSITIVO, C) Microscopia interferencial segundo Normasky, D) Contraste de fase NEGATIVO

Contraste de fase

+

Luz polarizada

Confocal

• Células isoladas e cortes de tecidos – espessura superior ao plano de foco do microscópio óptico

• Na prática- com o movimento do micromético um plano entra em foco enquanto os demais saem de foco = PERDA DE NITIDEZ

• No confocal: varredura por feixe de laser, ponto a ponto = “CORTE ÓPTICO “– Resultado: apenas aquela fatia fará parte da formação da imagem =

maior nitidez

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Confocal

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Fluorescência

2-Microscópio Eletrônico

• Transmissão

• Varredura

• Melhor resolução

• Células não vivas

• Preparativos

• Eletrodensidade

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• Imagens, esquemas e fotos retirados dainternet, através do site:

http://images.google.com.br/imghp?hl=pt-BR&tab=wi

Para estudar:

• Junqueira, L.C., Carneiro, J. Biologia Celular e Molecular. Guanabara Koogan. 8ª ed. 2005.

– Capítulo 2, p.19-26