Diagnóstico laboratorial para doenças causadas por protozoários sanguíneos e

teciduais

Exame Parasitológico de sangue e tecido

→ Pesquisa de Protozoários sanguíneos (presente no sangue circulante) e teciduais

→ Principais doenças causadas por protozoários e pesquisadas em amostras de sangue: doença de Chagas e Malária.

→ Principais doenças causadas por protozoários e pesquisadas em amostras de tecidos: doença de Chagas, leishmaniose e Toxoplasmose.

→ Os métodos adotados: executados imediatamente após colheita do sangue.

Diagnóstico de protozoários sanguíneos T. cruzi - tripomastigotas

Diagnóstico de protozoários sanguíneos Plasmodium sp

Esquizonte - Rosácea

Merozoítos

Esquizonte

Amostra biológica - Coleta do sangue

→ punção digital ou lóbulo da orelha.

→ faz a anti-sepsia (com álcool iodado ou álcool 70%).

→ Por compressão, sai uma pequena gota e coloca-se sobre a lâmina.

Métodos de Diagnóstico - Exame

→ Direto: a fresco - para retardar a coagulação pinga-se 2 gts de salina.

→ Esfregaços: • Esfregaço em camada delgada (camada estirada) -

mais usado• Esfregaço em camada espessa (gota espessa) -

diagnóstico epidemiológico

Vantagens e Desvantagens da gota estirada (esfregaço)

• Vantagens• Por fixar as hemácias, permite melhor estudo da morfologia

do parasito.• Por ser fixado e não submetido à desemoglobinização, a

perda de parasitos é bem menor que na gota espessa.• Permite a determinação percentual da parasitemia, mediante

a contagem de eritrócitos parasitados em 100 hemácias.

• Desvantagens• Por ser espalhado, ocupa maior área da lâmina – dificuldades

para baixa parasitemias.• Área endêmica – demora da leitura

Vantagens e Desvantagens da gota espessa

• Vantagens:• Maior quantidade de sangue desemoglobinizado –

probabilidade de encontrar parasitos• Por ser desemoglobinizada - o processo de coloração é

mais rápido.

• Desvantagens:• Requer experiência para a identificação de espécies, uma

vez que a morfologia do parasito altera-se durante o processo de desemoglobinização;

• Requer processamento parcial ou total relativamente rápido depois de colhida a amostra, para evitar a fixação de hemoglobina, a supercoloração e a descoloração.

Diagnóstico de Protozoários teciduais

Esfregaços de tecidos

• Retirar um pequeno fragmento de tecido (biopsia) da lesão ou fazer uma punção e colocar sobre a lâmina.

• Comprimir sobre uma lâmina, diversas vezes em pontos diferentes, o fragmento retirado

• Corar da mesma forma com os esfregaços sanguíneos

Raspado ou Punção da lesão

Diagnóstico de Protozoários teciduais

Leishamania em célula do SFM - macrófago

Diagnóstico de Protozoários teciduais

Trypanosoma cruzi em de tecido

Flebotomíneo – Lutzomya longypalpis vetor da leishmania

EPS – Técnica de Leishman

1- Técnica do esfregaço: exatamente igual ao esfregaço sangüíneo. Coloca-se uma segunda lâmina em ângulo de 45° sobre o material expelido na primeira lâmina e desliza a lâmina inclinada sobre a outra rapidamente. O material a ser examinado concentra-se nas bordas do esfregaço.

2 - Coloração: A) Cobrir o esfregaço com 6 a 7 gotas do corante;B) Deixar fixar por 15 segundos, no máximo;C) Adicionar 12 a 14 gotas de solução tampão;D) Homogeneizar, soprando o corante com pipeta e repouso por 20’;E) Escorrer o corante e lavar em água corrente;F) Deixar secar e examinar ao microscópio