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DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DA ANEMIA FALCIFORME LABORATORY DIAGNOSIS OF FALCIFORM ANEMIA Angélica Cristina de Souza Barros Fermino ¹ Everson Stábile ² RESUMO A anemia falciforme é uma doença de origem genética, resultante de uma mutação no cromossomo onze, que possui no sexto códon da cadeia beta o processo de mutação, ocorrendo uma troca nos pares de bases nitrogenadas do DNA e pela alteração nos eritrócitos, obtendo o aspecto de foice levando a lesão nos órgãos e crises dolorosas. Seu diagnóstico é feito, principalmente, através de hemograma, eletroforese de hemoglobina e biologia molecular. Não há tratamento específico para essa doença, porém alguns procedimentos preventivos ou paliativos são adotados para minimizar seus efeitos. O objetivo do presente trabalho é desenvolver uma revisão literária a respeito da história das principais características da anemia falciforme e apresentar os meios para o diagnóstico laboratorial dessa doença. Palavras-chave: Anemia Falciforme; Diagnóstico Laboratorial; Tratamento. ABSTRACT Sickle anemia is a disease of genetic origin, resulting from a mutation on chromosome eleven, which has the mutation process in the sixth codon of the beta chain, occurring an exchange in the nitrogenous base pairs of the DNA and the alteration in the erythrocytes, obtaining the aspect of sickle leading to organ damage and painful crises. Its diagnosis is made mainly through hemogram, hemoglobin electrophoresis and molecular biology. There is no specific treatment for this disease, however some preventive or palliative procedures are adopted to minimize its effects. The objective of the present work is to develop a literary review about the history of the main characteristics of sickle cell anemia and to present the means for the laboratory diagnosis of this disease. Keywords: Sickle cell anemia; Laboratory diagnosis; Treatment. ________________ ¹ Graduada em Biomedicina pelo Unitoledo Araçatuba ² Biomédico (Centro Universitário Barão de Mauá), Farmacêutico (Faculdades Adamantinenses Integradas), Especialista em Imunologia Aplicada a Análises Clinicas, Especialista em Hematologia Laboratorial e docente do Centro Universitário Toledo.

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DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DA ANEMIA FALCIFORME

LABORATORY DIAGNOSIS OF FALCIFORM ANEMIA

Angélica Cristina de Souza Barros Fermino ¹

Everson Stábile ²

RESUMO

A anemia falciforme é uma doença de origem genética, resultante de uma mutação

no cromossomo onze, que possui no sexto códon da cadeia beta o processo de mutação,

ocorrendo uma troca nos pares de bases nitrogenadas do DNA e pela alteração nos

eritrócitos, obtendo o aspecto de foice levando a lesão nos órgãos e crises dolorosas. Seu

diagnóstico é feito, principalmente, através de hemograma, eletroforese de hemoglobina

e biologia molecular. Não há tratamento específico para essa doença, porém alguns

procedimentos preventivos ou paliativos são adotados para minimizar seus efeitos. O

objetivo do presente trabalho é desenvolver uma revisão literária a respeito da história

das principais características da anemia falciforme e apresentar os meios para o

diagnóstico laboratorial dessa doença.

Palavras-chave: Anemia Falciforme; Diagnóstico Laboratorial; Tratamento.

ABSTRACT

Sickle anemia is a disease of genetic origin, resulting from a mutation on

chromosome eleven, which has the mutation process in the sixth codon of the beta chain,

occurring an exchange in the nitrogenous base pairs of the DNA and the alteration in the

erythrocytes, obtaining the aspect of sickle leading to organ damage and painful crises.

Its diagnosis is made mainly through hemogram, hemoglobin electrophoresis and

molecular biology. There is no specific treatment for this disease, however some

preventive or palliative procedures are adopted to minimize its effects. The objective of

the present work is to develop a literary review about the history of the main

characteristics of sickle cell anemia and to present the means for the laboratory diagnosis

of this disease.

Keywords: Sickle cell anemia; Laboratory diagnosis; Treatment.

________________

¹ Graduada em Biomedicina pelo Unitoledo Araçatuba

² Biomédico (Centro Universitário Barão de Mauá), Farmacêutico (Faculdades

Adamantinenses Integradas), Especialista em Imunologia Aplicada a Análises Clinicas,

Especialista em Hematologia Laboratorial e docente do Centro Universitário Toledo.

Page 2: DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DA ANEMIA FALCIFORME … Fermino (1).pdf · O diagnóstico da anemia falciforme é realizado por meio de vários exames como: hemograma, teste do pezinho,

1. INTRODUÇÃO

O primeiro relato a respeito da anemia falciforme foi descrito em 1910 pelo

médico James Herrick, ele publicou um artigo científico sobre a presença de eritrócitos

em forma de foice em um paciente negro com anemia grave, icterícia e fortes dores nas

articulações. Em 1949 Linus Pauling em companhia dos colegas laboratório conseguiu

separar por meio de eletroforese a hemoglobina anormal que causava a falcização das

hemácias. Em 1956, Ingram constatou que a diferença entre a hemoglobina A e S, se

devia à mutação do sexto aminoácido da globina beta, o ácido glutâmico pela valina.

No ano de 1978 Kan e Dozy foi descrito o polimorfismo de DNA, para gene da beta

globina. Em 1980, os mesmos pesquisadores estudaram a evolução da hemoglobina S por

meio de técnicas de biologia molecular e concluíram que apesar da mutação da

hemoglobina S ser a mesma, existem diferenças entre a sequência de bases nitrogenadas

(NAOUM et al, 2004).

A anemia falciforme é uma doença de caráter genético, causada por uma mutação

genética molecular da hemoglobina que acontece no cromossomo onze, onde ocorre a

troca de uma base nitrogenada do códon (GAG-GTG), resultando na substituição do

Ácido Glutâmico pela Valina na posição 6 da cadeia beta globina produz a hemoglobina

S. As hemácias sofrem um processo de falcização provocado pela baixa tensão de

oxigênio, dando origem ao formato de “foice” (MINISTÉRIO DA SAÚDE, 2014). O

glóbulo vermelho em forma foice não circulam adequadamente na microcirculação

sanguínea ocasionando lesões teciduais crônicas e agudas em órgãos e levando a crises

dolorosas (NUZZO et al, 2004).

A anemia falciforme ocorre quando a criança recebe de ambos os pais o gene da

hemoglobina S (Hb S), apresentando assim o genótipo hemoglobina SS (Hb SS). O traço

falciforme ocorre quando o bebê recebe de um dos pais o gene hemoglobina A e

hemoglobina S (Hb AS). O portador desse traço é assintomático e não desenvolve a

doença, se essa pessoa tiver filhos com outro portador deste traço a criança nascerá com

anemia falciforme (NETO et al, 2003).

No Brasil, a doença falciforme afeta cerca de 0,1% a 0,3% da população negra,

essa doença chegou ao Brasil pelo tráfico de pessoas negras escravizadas no período

colonial, estes escravos eram provenientes de diversos países da África, que levou a

miscigenação brasileira (FIGUEIREDO et al, 2014).

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O diagnóstico da anemia falciforme é realizado por meio de vários exames como:

hemograma, teste do pezinho, teste falcização, teste solubilidade, dosagem hemoglobina

fetal, focalização isoelétrica, Eletroforese alcalina em acetato de celulose, Eletroforese

ácida em ágar ou agarose, Cromatografia Líquida de Alta Performance (HPLC)

(ZANATA et al, 2009).

Não há tratamento específico para a anemia falciforme. Entretanto, quando houve

a descoberta dessa patologia, o paciente deve ter um acompanhamento médico adequado,

e uma equipe de profissionais capacitados, para orientar a família e o paciente, quando

ocorrer os sinais graves da doença e praticar medidas de prevenção contra as infecções e

crises dolorosas (MINISTÉRIO DA SAUDE, 2012).

2. OBJETIVO

O objetivo do presente trabalho é desenvolver uma revisão literária a respeito da

história das principais características da anemia falciforme e apresentar os meios para o

diagnóstico laboratorial dessa patologia.

3. METODOLOGIA

Consiste em uma análise bibliográfica visando as principais características da

anemia falciforme e os meios para o diagnóstico laboratorial dessa patologia, onde foram

utilizadas como referência as palavras chaves: anemia falciforme, diagnóstico

laboratorial, tratamento. Foram encontrados 25 artigos científicos, as fontes mais

utilizadas foram revistas cientificas nas bases de dados científicos como Scielo, Pubmed

e livros didáticos de Hematologia disponíveis na Biblioteca Central do Centro

Universitário Toledo de Araçatuba-SP.

4. DISCUSSÃO

A anemia falciforme é caracterizada por uma mutação do ponto (GAG-GTG),

levando a substituição do Ácido Glutâmico pela Valina na sexta posição da cadeia beta

de uma hemoglobina, levando a formação de hemoglobina com características diferentes

de uma normal, a hemoglobina S (TEIXEIRA, 2006).

Os glóbulos vermelhos quando oxigenados apresentam morfologicamente

normais, quando é submetido a baixa tensão de oxigênio, sofre alteração no seu formato,

tornando -se rígida e com aspecto de foice, ilustrada na figura 1 (NAOUM et al, 2004).

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Figura 1: hemácias normais e falcizadas.

Fonte: ADAM, 2011

No processo de falcização a hemoglobina S tem uma característica que em

situações de ausência ou diminuição de oxigênio provoca a sua polimerização, alterando

a morfologia do eritrócito que adquire a forma de foice. As hemácias falcizadas dificultam

a circulação sanguínea provocando vaso-oclusão e infarto na área afetada.

Consequentemente, esses problemas resultam em isquemia, dor, necrose e disfunções,

bem como danos permanentes aos tecidos e órgãos além da hemólise crônica ilustrada na

figura 2 (MINISTÉRIO DA SAÚDE, 2007).

Figura 2: Visão esquemática da fisiopatologia da doença falciforme.

Fonte: Manual de condutas básicas na doença falciforme, MS,2006.

A alteração celular provocada pelo processo de falcização influencia intensamente

o fluxo sanguíneo, aumentando sua viscosidade. A deposição de grandes números de

glóbulos vermelhos alterados na superfície endotelial, reduz a luz dos capilares, tornando

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a estase inevitável, com isso ocorre a hipóxia tecidual levando mais hemoglobina S para

o estado de desoxigenação, provocando a má circulação e lesionando os tecidos

(SANTOS, 2015).

A doença falciforme se manifesta em indivíduos monozigóticos perante a

combinação com outras hemoglobinas anormais, com diversos graus de gravidade:

coerança com um gene da hemoglobina (SC), um gene da ß+ talassemia (SAF), ou um

gene da ß° talassemia (SF) (NUZZO et al, 2004).

Quando é recebido um gene hemoglobina A e hemoglobina S (Hb AS), a criança

nasce com traço falciforme, o portador deste traço é assintomático, não padece a doença.

Quando o bebê herda dos pais ambos genes da hemoglobina S, apresentando hemoglobina

SS (Hb SS), o bebê já nasce com a anemia falciforme (SANTOS, 2015).

A doença falciforme possui algumas características bem definidas entre elas a

icterícia, crises de dor, febre, acidente vascular cerebral, sendo este uma das complicações

mais graves desta patologia. Uma pessoa que tem anemia falciforme tem sintomas de uma

anemia comum. Os sintomas agudos causados pela doença falciforme são, pela obstrução

dos vasos sanguíneos e hipóxia dos tecidos, provocadas pela perfusão anormal do sangue.

Entre os sintomas agudos mais comuns estão as crises de dor, que podem ocorrer, na

região abdominal, nos pulmões, nas articulações e nos ossos, devido à isquemia em seus

tecidos. O baço é um dos órgãos mais afetados pela obstrução dos vasos sanguíneos, com

a consequente perda de sua função durante os primeiros anos da infância. Os sintomas

crônicos derivam, especialmente, das injúrias provocadas pela hipóxia nos tecidos

(NOGUEIRA et al, 2013).

O diagnóstico laboratorial da doença falciforme baseia-se na detecção da

hemoglobina S envolvendo análises que devem considerar, além dos dados clínicos e a

herança genética, outros fatores que influenciam como: idade da criança por ocasião da

coleta, tempo de estocagem e condições de armazenamento da amostra (FERRAZ et al,

2007).

O hemograma é um exame de sangue feito para medir a saúde geral do paciente,

é muito usado para diagnosticar distúrbios como anemia, esse teste consiste na medição

dos níveis de glóbulos vermelhos (hemácias), responsáveis pelo transporte de oxigênio,

glóbulos brancos (leucócitos), sinônimos responsáveis pelo sistema de defesa do

organismo e plaquetas, fragmentos de células produzidas na medula óssea e responsáveis

pela coagulação do sangue. Esse exame e realizado em três etapas: Eritrograma são

dosados valores dos glóbulos vermelhos como: hemácias, hemoglobina, hematócrito,

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VCM (Volume Corpuscular Médio), HCM (Hemoglobina Corpuscular Média), CHCM

(Concentração de Hemoglobina Corpuscular Média), RDW (Red Cell Distribution

Width). Leucograma representa análise dos valores glóbulos brancos: leucócitos,

basófilos, eosinófilos, neutrófilos, linfócitos, monócitos. Plaquetas os valores muito

abaixo do normal podem representar trombocitopenia, os valores considerados normais

não apresentam dificuldades em iniciar a coagulação.

A anemia falciforme é considerada uma anemia grave, com valores de

hemoglobina, hematócrito, VCM, HCM baixos, o RDW estará elevado e o CHCM será

normal, os leucócitos estarão elevados, devido às crises de hemólise ou infecções, as

plaquetas estarão altas, devido à relação da atrofia do baço. O esfregaço sanguíneo analisa

formato e a contagem de células, os eritrócitos da anemia falciforme são as células em

forma de foice. (NOGUEIRA et al, 2013).

O teste do pezinho é feito em toda criança na primeira semana de vida. Esse teste

é utilizado para detecção precoce de doenças, inclusive a anemia falciforme

(MINISTÉRIO DA SAÚDE, 2007)

O teste de falcização consiste em colocar as hemácias a ser pesquisadas, sob baixa

concentração de oxigênio, induzindo o seu afoiçamento através do metabissulfito de

sódio, que reduz a tensão oxigênio. Essa técnica é menos indicada devido ao baixo grau

de resolução, pois quando positivo não diferencia o estado de associação genética da HbS.

(ZANATA et al,2009).

O teste de solubilidade é fundamentado na insolubilidade da Hb S no estado

reduzido. É um teste que serve apenas para detectar a presença da hemoglobina mutante,

não apresenta boa sensibilidade para a detecção da presença de hemoglobina S no período

neonatal, nesse período os recém nascidos são assintomáticos devido ao efeito protetor

da hemoglobina fetal, que neste período de vida representa cerca de 80% do total da

hemoglobina, por esse motivo esse teste é inadequado para diagnostico do perfil de

hemoglobinas por levarem a resultados falsos-negativos, já que as concentrações elevadas

de hemoglobina fetal e baixas de hemoglobina S podem influenciar no diagnóstico

(ZANATA et al,2009).

A focalização isoelétrica é um método especifico para o fracionamento das

espécies moleculares da hemoglobina, nesse teste é separada as macromoléculas pelo seu

ponto isoelétrico, com a diferença de unidades de pH. Essa técnica mostrou ser de fácil

execução, interpretação e com resolução capaz de diferenciar as bandas de cada fenótipo

de hemoglobina na dependência do ponto isoelétrico de cada fração. Esse teste tem alto

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custo/benefício devido aos seus equipamentos e reagentes importados (BERTHOLO et

al,2006).

A cromatografia liquida de alta performance é um método cromatográfico, que

permite a detecção de anomalias da hemoglobina de forma rápida e precisa. A técnica

desse teste na anemia falciforme possibilita a caracterização qualitativa das hemoglobinas

variantes S, C, D e E, além de outras variantes de migração rápida, sendo empregado no

diagnóstico neonatal de hemoglobinopatia. É um teste usado na rotina laboratorial, por

ter a quantificação exata das frações de hemoglobinas e alta resolução (SANTOS, 2015).

A eletroforese alcalina em acetato de celulose é o método mais usado na rotina e

pesquisa laboratorial de hemoglobinopatias e, também, para avaliação quantitativa de

hemoglobina F (Hb F). Sua avaliação é qualitativa, esse teste permite a separação dos

principais genótipos de hemoglobinas, podendo mostrar que em algumas situações a

fração da hemoglobina esteja elevada, a eletroforese em pH alcalino, mostra um resultado

diferente do que a pH ácida, porque modifica a carga da hemoglobina, a hemoglobina

possui carga negativa e migra para o polo positivo (ZAMARO et al,2002).

A eletroforese ácida em ágar, tem sido realizada apenas em alguns laboratórios e

na diferenciação de hemoglobinas que migram na mesma posição em pH alcalino, como

é o caso das hemoglobinas S e D e das C e E. Esse teste se desenvolve em agarose

confeccionada com tampão pH 6,2 e separa as hemoglobinas através da carga elétrica

associada ao intenso grau de eletroendosmose (ZAMARO et al, 2002).

A dosagem de hemoglobina fetal é mais resistente à desnaturação por soluções

fortemente alcalinas que outros tipos de hemoglobinas. Tem importância essencial na

fisiologia da distribuição de oxigênio durante a fase fetal que abrange o período entre o

terceiro mês de gestação até o dia do nascimento. O Método de Singer, é utilizado para

altas concentrações de Hb Fetal e o Método de Betke, usado para baixas concentrações

de Hb Fetal (ZANATA et al,2009).

A biologia molecular é um teste específico e sensível para o prognóstico da

doença falciforme, que vem contribuindo para um diagnóstico diferencial possibilitando

a análise do genótipo de interesse através dos seus marcadores. A Reação da cadeia

polimerase (PCR) é considerado um teste qualitativo devido a capacidade de identificar

o gene S, O marcador Restriction Fragment Length Polymorfism- RFLP é uma técnica

voltada para identificação de mutações pontuais e polimorfismos genético. Por meio

desta técnica PCR-RFLP, são utilizadas enzimas de restrição para identificar sítios

específicos do DNA (ZANATA et al, 2009).

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Não há tratamento específico para a anemia falciforme. Entretanto, quando houve

a descoberta desta patologia, o paciente deve ter um acompanhamento médico adequado,

e uma equipe de profissionais capacitados, para orientar a família e o paciente, quando

os sinais e sintomas da doença aparecerem, como tratar adequadamente as crises

dolorosas, quando presentes, e a praticar medidas para prevenir as crises da doença e as

infecções graves. As transfusões sanguíneas algumas vezes são feitas como profilaxia

em pacientes com crises frequentes ou lesões orgânicas. O transplante de células tronco

pode curar a doença, só e indicado nos casos mais graves da doença (HOFFBRAND et

al, 2007).

5. CONSIDERAÇÕES FINAIS

A anemia falciforme é uma doença de origem genética e hereditária, resultante de

uma mutação no gene da globina beta e pela alteração das hemácias. Diante deste trabalho

de revisão bibliográfica identificou-se que os principais métodos laboratoriais para

diagnosticar essa patologia são: hemograma usado para detectar a anemia e a análise

citomorfológica para identificar os drepanócitos, eletroforese de hemoglobina é utilizado

para monitorar, medir e identificar os diferentes tipos de hemoglobinas e a confirmação

é pelo teste biologia molecular (PCR), que investiga alterações e mutações nos genes que

produzem a hemoglobina. Portanto, seu diagnóstico precoce é essencial para ajudar no

combate dessa patologia, das crises dolorosas e lesões nos órgãos, proporcionando um

tratamento adequado na vida desses pacientes.

6. REFERÊNCIAS

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