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  • 1

    UNIVERSIDAD TCNICA PARTICULAR DE LOJA

    La Universidad Catlica de Loja

    ESCUELA DE BIOQUMICA Y FARMACIA

    DETERMINACIN DE PATRONES ELECTROFORTICOS

    DURANTE EL PROCESO DE DESHIDRATACIN EN SEMILLAS

    DE DIFERENTE COMPORTAMIENTO DE CONSERVACIN.

    (ORTODOXO, RECALCITRANTE E INTERMEDIO)

    Previo a la obtencin del ttulo

    de Bioqumico Farmacutico

    AUTORAS:

    Miriam Cecilia Cueva Guamn

    Mara Eugenia Imaicela Ordez

    DIRECTOR:

    Ing. Jos Miguel Romero Saritama

    Loja- Ecuador

    2012

  • i

    CESIN DE DERECHOS

    Miriam Cecilia Cueva Guamn, y Mara Eugenia Imaicela Ordez,

    declaramos conocer y aceptar la disposicin del Artculo 67 del Estatuto

    Orgnico de La Universidad Tcnica Particular de Loja que en su parte

    pertinente textualmente dice: Forman parte de Patrimonio de la

    Universidad la propiedad intelectual de investigaciones, trabajos

    cientficos o tcnicos y tesis de grado que se realicen a travs, o con el

    apoyo financiero, acadmico o institucional (operativo) de la

    Universidad.

    Loja, Junio del 2012

    Miriam Cecilia Cueva Guamn Mara Eugenia Imaicela Ordez.

    TESISTA TESISTA

  • ii

    CERTIFICACIN

    Ing.

    Jos Miguel Romero Saritama

    DIRECTOR DE TESIS DE GRADO

    CERTIFICO:

    Que una vez revisado el proyecto de investigacin efectuado por Miriam

    Cecilia Cueva Guamn, y Mara Eugenia Imaicela Ordez, previo a la

    obtencin del Ttulo de BIOQUMICO FARMACUTICO, se autoriza su

    presentacin final para la evaluacin correspondiente.

    Loja, Junio del 2011

    Ing. Jos Miguel Romero Saritama

    DIRECTOR DE TESIS

  • iii

    AUTORA

    La presentacin, procedimientos y conceptos, as como, los resultados y

    conclusiones vertidos en el presente trabajo de tesis son de

    responsabilidad absoluta de las autoras.

    Miriam Cecilia Cueva Guamn Mara Eugenia Imaicela Ordez

  • iv

    AGRADECIMIENTO

    Nuestra gratitud, principalmente est dirigida al Dios por habernos dado la existencia y permitido llegar al final de nuestras carreras. A la Universidad Tcnica Particular de Loja, a la escuela de Bioqumica y Farmacia, y de manera muy especial al Ing. Jos Miguel Romero, quien de la manera ms comedida y acertada supo dirigir el presente trabajo; y a todos los profesores que con entereza nos han inculcado sus valiosos conocimientos en el transcurso de nuestra formacin profesional.

    Miriam Cecilia y Mara Eugenia

  • v

    DEDICATORIA

    Quiero dedicarle este trabajo a Dios que me ha dado la vida y fortaleza para terminar este proyecto de investigacin, A mis Padres y hermanos y sobrinos por estar ah cuando ms los necesit; en especial a mi padre quien a lo largo de mi vida ha velado por mi bienestar y educacin siendo mi apoyo en todo momento. Depositando su entera confianza en cada reto que se me presentaba sin dudar ni un solo momento de mi inteligencia y capacidad. A Linder mi novio mi gran amor, mi inspiracin y mi fuerza, gracias por apoyarme siempre, comprenderme y hasta soportarme en los momentos ms difciles. Gracias por estar a mi lado incondicionalmente y por ser tan especial. No s qu hara sin ti.

    Mara Eugenia

  • vi

    DEDICATORIA

    A Dios Por su amor incondicional y por permitirme seguir adelante y cumplir con mi sueo. A mis padres Elio y Flor Como un pequeo gesto de gratitud porque creyeron en m y por ensearme a nunca darme por vencida, inculcndome ejemplos dignos de superacin y entrega, porque en gran parte gracias a ustedes, hoy puedo ver alcanzada mi meta. Ya que siempre estuvieron impulsndome en los momentos ms difciles de mi carrera, porque el orgullo que sienten por m, fue lo que me hizo ir hasta el final.

    Va por ustedes, Y a ti; mi luz, mi aliento y mis ganas de vivir, tu sabes y solo t por quien lucho a ti; que me diste tu amor y gratitud, gracias por siempre haberme apoyado y nunca haberme dejado sola no sabes, cmo te extrao y aunque Dios no te dio el tiempo suficiente siempre estars en mis recuerdos.

    A tu Memoria

    Miriam Cecilia

  • vii

    CONTENIDO.

    CERTIFICACIN DE CESIN DE DERECHOS

    i

    CERTIFICACIN

    ii

    AUTORA

    iii

    AGRADECIMIENTO

    iv

    DEDICATORIA

    v

    CONTENIDO

    RESUMEN

    ARTICULO

    vii

    xi

    xii

    I PRESENTACIN DE FIN, PROPSITO Y COMPONENTES DEL PROYECTO

    - FIN DEL PROYECTO

    - PROPSITO DEL PROYECTO

    - COMPONENTES DEL PROYECTO

    II INTRODUCCIN

    2

    2

    2

    2. 1. INTRODUCCIN

    III MATERIALES Y MTODOS

    4

    3.1. SITIO DE ESTUDIO Y ESPECIES

    9

    3.2. DETERMINACIN DE CONTENIDO DE HUMEDAD

    9

    3.3. DESHIDRATACIN DE SEMILLAS

    9

    3.4. VIABILIDAD DE SEMILLAS 10

  • viii

    3.5. EXTRACCIN DE PROTENAS

    3.6. CUANTIFICACIN DE PROTENAS

    3.6.1. Curva de Calibracin

    3.6.2. Cuanficacin de Protenas Totales.

    3.7. ELECTROFORESIS SDS-PAGE

    3.7.1. Preparacin de Geles

    3.7.2. Preparacin de las muestras proteicas

    3.7.3. Desarrollo de la Electroforesis

    3.7.4. Tincin de gel

    IV RESULTADOS Y ANLISIS

    10

    11 11

    12

    12 12

    13

    13 14

    4.1. Deshidratacin y Viabilidad 16

    4.2. Protenas Totales

    20

    4.3. Electroforesis SDS-PAGE 24

    V CONCLUSIONES 30

    VI RECOMENDACIONES 32

  • ix

    LISTA DE TABLAS

    Tabla 1. Porcentajes de Contenidos de Humedad a deshidratar para cada una

    de las especies.

    9

    Tabla 2. Preparacin de estndares para la curva calibracin de protenas

    con una solucin patrn de BSA (4 mg/ml).

    11

    Tabla 3. Composicin del gel separador y del gel concentrador. 12

    Tabla 4. Volumen de protena y Buffer desnaturalizante determinado segn

    las concentraciones de Bradford en 30 g de protena y la cantidad de muestra

    final que se coloca en la corrida electrofortica.

    13

    Tabla 5. Tiempo de secado, contenido de humedad y germinacin inicial de

    las semillas.

    16

    Tabla 6. Concentracin de protenas totales en ug/ml en especies y sus

    distintos niveles de deshidratacin.

    21

    Tabla 7. Presencia de Bandas de protenas en semillas de (I. carnea y S.

    mollissima), en distintos contenidos de Humedad (%)

    Tabla 8. Bandas de protenas en semillas de (C. flexuosa y Caesalpinia

    spinosa), en distintos contenidos de Humedad (%).

    LISTA DE GRFICAS

    Grfica 1. A) Variacin del Porcentaje de germinacin en semillas de

    Capparis flexuosa durante el proceso de deshidratacin. B) Correlacin entre

    contenido de humedad y germinacin de C. flexuosa.

    Grfica 2. A) Porcentaje de germinacin de semillas C. spinosa con sus cinco

    diferentes contenidos de humedad, luego de ser deshidratadas. . B)

    Correlacin entre contenido de humedad y germinacin de C. spinosa.

    Grfica 3. A) Porcentaje de germinacin de semillas de I. carnea con sus

    cuatro diferentes contenidos de humedad, luego de ser deshidratadas. B)

    Correlacin entre contenido de humedad y germinacin de I. carnea

    Grfica 4. A) Porcentaje de germinacin de semillas de S. mollissima con sus

    cuatro diferentes contenidos de humedad, luego de ser deshidratadas. B)

    Correlacin entre contenido de humedad y germinacin de S. mollissima

    25

    27

    17

    18

    19

    20

  • x

    Grafica 5. Anlisis de correlacin entre porcentaje de Contenido de humedad

    (CH) y concentracin de protenas totales (ug/ml), con un intervalo de

    confianza del 95% A) I. carnea, B) S. mollissima, C) C. spinosa y D) C. flexuosa

    LISTA DE FIGURAS

    23

    Figura 1. . Electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE) de protenas

    en semillas usando (MM) marcador molecular sigma de 6,500- 200,000Da.

    Las fechas negras indican bandas bien definidas en todos los niveles de

    deshidratacin y las flechas rojas indican bandas que se presentaron en

    algunos niveles deshidratados

    24

    Figura 2. Electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE) de protenas

    en semillas usando (MM) marcador molecular sigma de 6,500- 200,000Da.

    Las fechas negras indican bandas bien definidas en todos los niveles de

    deshidratacin y las flechas rojas indican bandas que se presentaron en

    algunos niveles deshidratados

    LISTA DE FOTOGRAFIAS

    Fotografa 1. Semillas en proceso de deshidratacin con gel de slice.

    Fotografa 2. Germinacin de las semillas.

    Fotografa 3. Extraccin de protenas de