determinação quantitativa de amido em produtos cárneos por ... · baseia-se na determinação...

MAPA/SDA/CGAL Laboratório Nacional Agropecuário - LANAGRO/RS Laboratório de Produtos de Origem Animal - POA/SLAV Método de Ensaio - MET

Código: MET POA/SLAV/49/02/01 Página 1 de 7 Emissão: 20/02/2014

Determinação quantitativa de amido em produtos cárn eos por espectrometria

1 Escopo

Este método tem por objetivo quantificar amido em produtos cárneos por espectrometria

molecular no Laboratório de Produtos de Origem Animal - POA/SLAV.

2 Fundamentos

Baseia-se na determinação espectrofotométrica a 620 nm do composto colorido formado pela

reação entre a antrona e a glicose proveniente da hidrólise do amido.

3 Reagentes, padrões e materiais

Todos os reagentes são de grau analítico (p.a.), exceto quando especificado. Toda a água

utilizada nos procedimentos é destilada/deionizada, exceto quando especificada.

3.1 Reagentes

• Ácido sulfúrico (H2SO4);

• Álcool etílico (C2H5OH);

• Antrona (C14H10O);

• Éter etílico ((C2H5)2O).

3.2 Padrões

D-glicose (C6H12O6) (material de referência).

3.2 Materiais

• Balão volumétrico de 500 mL;

• Cubeta de vidro de 1 cm de largura;

• Funil de vidro;

• Pipetas automática de 5 mL;

• Pipetas volumétricas de 1, 2 e 10 mL;

• Proveta;

• Tubo de centrífuga de 25 mL;

• Tubo de ensaio.




4 Equipamentos

• Balança analítica;

• Banho-maria;

• Centrífuga;

• Espectrofotômetro;

• Estufa;

• Placa aquecedora.

5 Precauções analíticas

Este método emprega substâncias químicas nocivas e possui procedimentos que podem

representar risco ao operador. Equipamentos de proteção individual e uniforme apropriado

devem ser utilizados durante todo o processo.

Amostras de alimentos em geral devem ser consideradas como de risco biológico, evitando-se

o contato direto com pele e mucosas.

A lavagem com álcool etílico dos frascos de vidro e instrumentos a serem postos em contato

com o reagente antrona é essencial, visto que a poeira e as sujidades reagem com ela,

produzindo resultados errôneos.

O tempo de 10 minutos da reação no banho-maria, descrita no item 6.0, deve ser respeitado à

risca, usando em seguida um banho de gelo para cessar a reação.

6 Procedimentos

Todas as operações são devidamente registradas no formulário “Dados brutos – Determinação

quantitativa de amido em produtos cárneos” (Anexo A).

6.1 Preparo de soluções e reagentes

6.1.1 Solução de álcool etílico a 80% (v/v)

Transferir 80 mL utilizando uma proveta 100 mL para balão volumétrico de 100 mL. Completar

volume com água e homogeneizar. Essa solução tem prazo de validade indeterminado.




6.1.2 Solução de ácido sulfúrico a 0,5 N

Pipetar 15 mL de ácido sulfúrico utilizando pipeta volumétrica e transferir para um balão

volumétrico de 1000 mL já contendo aproximadamente 100 mL de água. Completar o volume

com água e homogeneizar. Armazenar em frasco âmbar. Essa solução tem prazo de validade

de um ano.

6.1.3 Solução de ácido sulfúrico a 70% (v/v)

Limpar toda vidraria que utilizar para o preparo da solução com álcool etílico. Secar a vidraria.

Adicionar 240 mL de água deionizada no balão volumétrico de 1000 mL, acondicionando este

balão em um banho de gelo. Adicionar lentamente com auxílio de uma proveta 700 mL de

ácido sulfúrico p.a. Esfriar e avolumar o balão. Armazenar em frasco âmbar. Essa solução tem

prazo de validade de um ano.

6.1.4 Solução de antrona a 0,1% (m/v)

Limpar toda vidraria que utilizar para o preparo da solução com álcool etílico. Pesar 0,10 g de

antrona em béquer de 100 mL. Macerar os cristais com um bastão de vidro. Adicionar

pequenas porções da solução de ácido sulfúrico 70%, devidamente fria, e com o auxílio de um

bastão de vidro dissolver completamente a antrona. Transferir o conteúdo do béquer para o

balão volumétrico de 100 mL completando o volume com a solução de ácido sulfúrico 70%.

Esta solução deve ser preparada e utilizada no dia da análise, ou seja, não deve ser estocada.

Sua coloração é amarelada e seu complexo com glicose é de cor esverdeada.

6.1.5 Solução padrão estoque de D-glicose a 1% (m/v)

Pesar 1 g de D-glicose (seco em estufa a 70°C por 1 hora) em um béquer de 100 mL, dissolver

com a ajuda de um bastão de vidro utilizando água. Transferir quantitativamente todo conteúdo

para um balão volumétrico de 100 mL.


6.1.6 Solução padrão de trabalho de D-glicose a 0,01% (m/v)

Pipetar 1 mL da solução padrão estoque de D-glicose para uma balão volumétrico de 100 mL,

completando com água.





6.2 Determinação do amido

6.2.1 Viabilização do analito

Pesar com exatidão 0,5 g de amostra, perfeitamente homogeneizada, diretamente para tubo de

centrífuga e lavar com três porções sucessivas de 5 mL de éter etílico seguidas de duas

porções sucessivas de 5 mL de solução a 80% (v/v) de álcool etílico à quente. Após a adição

de cada alíquota de solvente, agitar bem o tubo e centrifugar por 5 minutos a 1500 rpm. Após

as lavagens, secar o resíduo em estufa a 105ºC por uma hora, ou em banho de água fervente.

6.2.2 Hidrólise ácida

Adicionar 10 mL da solução de ácido sulfúrico 0,5 N e colocar o tubo em banho-maria tendo o

cuidado de manter o nível da solução contida no tubo abaixo do nível do banho. Aquecer

durante uma hora mantendo o nível da água do banho na posição original, agitando o conteúdo

do tubo ocasionalmente.

6.2.3 Preparo de solução-estoque

Decorrido o tempo estabelecido no tem 6.2.2, transferir quantitativamente o conteúdo do tubo

para balão volumétrico de 500 mL e completar o volume com água. Homogeneizar e decantar

por aproximadamente uma hora.

6.2.4 Complexação

Pipetar 2 mL desta solução para um tubo de ensaio previamente lavado com álcool etílico.

Adicionar 10 mL da solução de antrona agitando o tubo e utilizando um banho de gelo. Levar

para banho-maria por 10 minutos sob ebulição. Retirar do banho e esfriar imediatamente

submetendo a banho de gelo. Ler a cor desenvolvida em espectrofotômetro a 620 nm em

temperatura ambiente.

6.3 Curva analítica

Pipetar alíquotas de 0,5; 1,0; 1,5; 2 mL da solução de D-glicose a 0,01% para tubo de ensaio e

adicionar água, de modo que todos eles venham a conter volume final de 2 mL. Adicionar 10

mL da solução de antrona agitando o tubo e utilizando um banho de gelo. Em seguida, colocar




exatamente por 10 minutos em um banho-maria sob ebulição. Esfriar imediatamente

submetendo a um banho de gelo. Ler as absorbâncias a 620 nm contra um branco preparado

de modo similar ao descrito, usando água em substituição ao padrão. Construir uma curva de

calibração, lançando no eixo das ordenadas os valores de absorbância e no eixo das abscissas

as concentrações finais de glicose em 0, 50, 100, 150 e 200 µg de glicose/2 mL.

7 Resultados

Os resultados são aceitos se observadas as precauções analíticas e se realizados todos os

procedimentos em conformidade com este método. Em caso de quebra de balões volumétricos

ou perda de amostra, os resultados são desconsiderados e o ensaio deve ser repetido.

Realizar o ensaio em duplicata.

7.1 Cálculos e expressão dos resultados

Os cálculos devem ser realizados na planilha eletrônica “Cálculos – Determinação quantitativa

de amido em produtos cárneos” (Anexo B). O resultado é a média das duplicatas.

7.1.1Cálculo do amido em porcentagem:

Onde:

0,9 = fator de conversão da glicose em amido;

A = absorbância;

a = coeficiente linear da reta;

Al = alíquota de amostra utilizada (mL);

b = coeficiente angular da reta;

D = volume estoque do balão utilizado (mL);

L = valor de amido em (µg/2mL);

m = massa da amostra em microgramas.




7.2 Validação da planilha

A planilha “Cálculos – Determinação quantitativa de amido em produtos cárneos” deve ser

validada quinzenalmente, através de cálculos manuais que devem ser registrados no formulário

“Validação da planilha de cálculos – Determinação quantitativa de amido em produtos cárneos”

(Anexo C).

8 Arquivamento dos registros

O formulário “Dados brutos - Determinação quantitativa de amido em produtos cárneos” deve

ser arquivado na pasta “Dados brutos”. A planilha “Cálculos – Determinação quantitativa de

amido em produtos cárneos” deve ser mantida protegida na pasta eletrônica “Resultados”. O

formulário “Validação da planilha de cálculos” deve ser arquivado na pasta “Validação da

planilha de cálculos – Determinação quantitativa de amido em produtos cárneos”.

9 Referências

BRASIL. Ministério da Agricultura e do Abastecimento. Instrução Normativa nº. 20, de 21 de

julho de 1999. Métodos analíticos físico-químicos para controle de produtos cárneos e seus

ingredientes, sal e salmoura. Diário Oficial da União de 27/07/1999 , Brasília, DF.

10 Anexos

Anexo A MET POA/SLAV/49/02 Formulário “Dados Brutos – Determinação quantitativa de

amido em produtos cárneos”.

Anexo B MET POA/SLAV/49/02 Planilha “Cálculos – Determinação quantitativa de amido em

produtos cárneos”.

Anexo C MET POA/SLAV/49/02 Formulário “Validação da Planilha de Cálculos – Determinação

quantitativa de amido em produtos cárneos”.

11 Alterações

Item 6.1: Incluído “Solução de ácido sulfúrico a 70% (v/v)”.

Item 6.1.5: Incluído “seco em estufa a 70°C por 1 hora”.




Item 6.2: Dividido em subitens. Incluído “agitando o tubo e utilizando um banho de gelo”, “sob

ebulição”, “em temperatura ambiente” e “por aproximadamente uma hora” e “agitando o tubo e

utilizando um banho de gelo”.

Item 6.3: Excluído o ponto 0,75 mL de glicose que corresponde a 75 (µg/2mL) na curva de

calibração.

Item 7.1.1: Excluído “FC”. Incluído “a, b Al, L, A, D”

Item 7.1.2: Excluído.

12 Responsabilidades

O Responsável pelo POA/SLAV deve garantir a elaboração, aprovação, emissão, distribuição

de cópias, capacitação de analistas, implementação, treinamento do pessoal para utilização,

gerenciamento de não conformidades, análise crítica e revisão deste MET.

A UGQ é responsável pela verificação deste MET.

Elaboração/Revisão: Aprovação: Verificação:

Luciano Molognoni – POA/SLAV Heitor Daguer – POA /SLAV Angélica Polenz Wielewicki – UGQ

Data: 07/02/2014 Data: 12/02/2014 Data: 20/02/2014

determinação quantitativa de amido em produtos cárneos por ... · baseia-se na determinação...

Documents