Cromatografia de Cromatografia de AfinidadeAfinidade

Aline CardosoBárbara Alamis

Gabriel BranzaniIsabela Rovero

Marcos MaldonadoRafael Medeiros

3º A – FarmáciaFMU - Liberdade

O que é?O que é?

Cromatografia de afinidade é uma técnica que utiliza propriedades físico-químicas

para separação dos componentes de uma mistura protéica.

Como funciona?Como funciona?

A Cromatografia de Afinidade se baseia numa especificidade biológica da proteína

que se pretende analisar, tal como a afinidade de uma enzima a um substrato ou a ligação entre antígeno e anticorpo.

Como funciona?Como funciona?

Consiste na separação de proteínas de uma mistura e é dividida em duas fases: uma estacionária, aonde a proteína a se analisar se liga a polímeros com ligantes específicos contidos na parede do tubo; e outra, aonde há a eluição das proteínas indesejadas restando somente aquela a

ser estudada.

Fase EstacionáriaFase Estacionária

Na fase estacionária, a proteína de interesse se liga ao composto contido no tubo. Por exemplo: numa mistura de proteínas A, B, C e D, desejamos estudar a proteína A, que se liga facilmente com glicose. Portanto, a parede do tubo aonde essa mistura será despejada conterá glicose, que logo atrairá a proteína A para si, conseqüentemente separando-a das demais, que serão filtradas do tubo.

EluiçãoEluição

Após restar no tubo apenas os ligante com as proteínas de interesse, é despejado no tubo uma solução contendo os mesmos ligantes contidos na parede do tubo ou reagente desnaturantes (uréia, guanidina, etc) desprendendo a proteína da parede do tubo. No exemplo, é adicionado uma solução de resíduos de glicose que fazem com que a proteína A se desprenda da parede do tubo, sendo despejada, em meio a solução, em outro tubo para estudo.

ResumoResumo

AplicaçõesAplicaçõesPurificar e concentrar uma substância de

uma mistura em uma solução tampão;Reduzir a quantidade de

uma substância em uma mistura;Entender as ligações entre compostos

biológicos e determinadas substâncias, como as drogas;

Purificar e concentrar uma solução enzimática.

Referências BibliográficasReferências Bibliográficashttp://www.bio.davidson.edu/courses/

genomics/method/Affinity.htmlhttp://www.quimica.ufscar.br/ignez/

Aula08-extracao-3D-http://teachline.ls.huji.ac.il/72682/

Booklets/PHARMACIA-AffinityManual.pdf08-10-07.pdf