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Diagnóstico dos Vírus Cultivo e Isolamento em Sistemas Hospedeiros Vivos

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Page 1: C U L T I V O  E  I S O L A M E N T O

Diagnóstico dos Vírus

Cultivo e Isolamento em Sistemas Hospedeiros Vivos

Page 2: C U L T I V O  E  I S O L A M E N T O

Sistemas de Hospedeiro Vivos

CCéélulas eucarilulas eucarióóticas podem ser cultivadas ticas podem ser cultivadas in in vitrovitro (cultura (cultura de tecidos) e os vde tecidos) e os víírus podem ser propagados nestas culturas.rus podem ser propagados nestas culturas.Alguns vAlguns víírus se replicarão nos tecidos vivos de ovos rus se replicarão nos tecidos vivos de ovos embrionados embrionados de galinha em desenvolvimento, como o vde galinha em desenvolvimento, como o víírus rus de gripe.de gripe.Ovos Ovos embrionadosembrionados de galinha foram de galinha foram inicialmeninicialmente usados te usados para propagar vpara propagar víírus no inrus no iníício do scio do sééculo 20. Estes provaram culo 20. Estes provaram ser um meio efetivo de isolamento e cultivo de vser um meio efetivo de isolamento e cultivo de víírus, rus, sobretudo os vsobretudo os víírus da gripe (Influenza) e o da varrus da gripe (Influenza) e o da varííola.ola.Determinados vDeterminados víírus srus sóó conseguem se multiplicar se conseguem se multiplicar se inoculados em animais de laboratinoculados em animais de laboratóório.rio.

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Obtenção de uma

Cultura de Células

Primárias

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Obtenção de uma Cultura de Células Primárias

CBA

A. Tecido é tratado com enzimas para separar as células.

B. As células são ressuspensas em meio de cultura.

C. As células normais ou primárias aderem à superfície da placa ou garrafa e crescem em monocamada.

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Diferentes tipos decultura de células

A) Cultura primária de fibroblastos humanos.

B) Cultura estabelecida ou contínua de fibroblastos de rato.

C) Linhagem de células epiteliais contínuas (transformadas) HeLa

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Fluxo laminar

Garrafa com cultura de célula

Estufa de CO2

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Efeito citopático (ECP)

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Efeitocitopático

(ECP)

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Plaqueamento

• Utilizado para quantificação.

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Plaqueamento

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Isolamento de vírus em ovos embrionados de galinha

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Isolamento de vírus em ovos embrionados de galinha

• O local de inoculação vai depender do tipo de vírus que se pretende isolar.

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Animais de laboratório

BIOTÉRIO

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Animais de laboratórioPotencial uso:

• Estudar os vírus que não podem ser propagados cultura de células.• Estudar a patogênese das infecções virais.• Testar segurança de vacinas, e.x. vacina de Poliovirus oral.

Uso de animais é minimizado o máximo possível, porque:• Alimentação & manutenção dos animais infectados com vírus é cara.• Animais são sistemas complexos, onde muitas vezes são difíceis de

interpretar.• Resultados obtidos nem sempre são reprodutíveis, devido a variações

do hospedeiro.• Uso desnecessário de animais é antiético.

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Animais de laboratório

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Animais de laboratório