avaliaÇÃo histolÓgica da reaÇÃo tecidual do fio de sutura ... · por meio de fios de sutura,...

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1 UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ODONTOLOGIA MESTRADO EM ODONTOLOGIA ÁREA DE CONCENTRAÇÃO CLÍNICA INTEGRADA ANDERSON MARCIANO PEREIRA AVALIAÇÃO HISTOLÓGICA DA REAÇÃO TECIDUAL DO FIO DE SUTURA À BASE DE BIOPOLÍMERO DE CANA-DE-AÇÚCAR COMPARADO COM O ADESIVO TECIDUAL ETIL-CIANOACRILATO E O MONONYLON 5-0 ® : ESTUDO EM RATOS. RECIFE – PE 2009

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Page 1: AVALIAÇÃO HISTOLÓGICA DA REAÇÃO TECIDUAL DO FIO DE SUTURA ... · por meio de fios de sutura, ... tais como: grande resistência à tração e à torção, calibre fino e regular,

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ODONTOLOGIA

MESTRADO EM ODONTOLOGIA

ÁREA DE CONCENTRAÇÃO CLÍNICA INTEGRADA

ANDERSON MARCIANO PEREIRA

AVALIAÇÃO HISTOLÓGICA DA REAÇÃO TECIDUAL DO FIO DE SUTURA

À BASE DE BIOPOLÍMERO DE CANA-DE-AÇÚCAR COMPARADO COM O

ADESIVO TECIDUAL ETIL-CIANOACRILATO E O MONONYLON 5-0®:

ESTUDO EM RATOS.

RECIFE – PE

2009

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ANDERSON MARCIANO PEREIRA

AVALIAÇÃO HISTOLÓGICA DA REAÇÃO TECIDUAL DO FIO DE SUTURA

À BASE DE BIOPOLÍMERO DE CANA-DE-AÇÚCAR COMPARADO COM O

ADESIVO TECIDUAL ETIL-CIANOACRILATO E O MONONYLON 5-0®:

ESTUDO EM RATOS.

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Odontologia do Centro de Ciências da Saúde da Universidade Federal de Pernambuco, como requisito parcial para obtenção do Grau de Mestre em Odontologia com área de concentração em Clínica Integrada.

Orientador: Prof. Dr. Geraldo Bosco Lindoso Couto

RECIFE - PE

2009

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Pereira, Anderson Marciano

Avaliação histológica da reação tecidual do fio desutura à base de biopolímero de cana-de-açúcar comparado com o adesivo tecidual etil-cianoacrilato e o mononylon 5-0®: estudo em ratos / Anderson Marciano Pereira. – Recife: O Autor, 2009.

40 folhas : il., fig., tab. Dissertação (mestrado) – Universidade Federal de

Pernambuco. CCS. Odontologia, 2009.

Inclui bibliografia, anexos e apêndices.

1. Biopolímero de cana-de-açúcar. 2. Mononylon 5-0®. 3. Adesivo tecidual. I. Título.

616.314 CDU (2.ed.) UFPE

617.695 CDD (22.ed.) CCS2009-058

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

REITOR

Prof. Dr. Amaro Henrique Pessoa Lins

VICE-REITOR

Prof. Dr. Gilson Edmar Gonçalves e Silva

PRÓ-REITOR DA PÓS-GRADUAÇÃO

Prof. Dr. Anísio Brasileiro de Freitas Dourado

CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

DIRETOR

Prof. Dr. José Thadeu Pinheiro

VICE-DIRETOR

Prof. Dr. Márcio Antônio de Andrade Coelho Gueiros

COORDENADOR DA PÓS-GRADUAÇÃO EM ODONTOLOGIA

Prof. Dr. Jair Carneiro Leão

VICE-COORDENADORA DA PÓS-GRADUAÇÃO EM ODONTOLOGIA

Profª. Drª. Lucia Carneiro de Souza Beatrice

PROGRAMA DE PÓS-GRADUÇÃO EM ODONTOLOGIA

MESTRADO EM CLÍNICA ODONTOLÓGICA INTEGRADA

COLEGIADO

Profª. Drª. Alessandra de Albuquerque T. Carvalho

Prof. Dr. Anderson Steves Leônidas Gomes

Prof. Dr. Carlos Menezes Aguiar

Prof. Dr. Cláudio Heliomar Vicente da Silva

Prof. Dr. Etenildo Dantas Cabral

Prof. Dr. Geraldo Bosco Lindoso Couto

Prof. Dr. Jair Carneiro Leão

Profª. Drª. Jurema Freire Lisboa de Castro

Profª. Drª. Lucia Carneiro de Souza Beatrice

Profª. Drª. Renata Cimões Jovino Silveira

SECRETÁRIA

Oziclere de Araújo Sena

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Agradecimentos Especiais

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Agradecimentos especiais

Aos meus queridos pais e irmão pelo amor, pela confiança, pelo exemplo de

vida, pelo encaminhamento e o sincero acreditar.

À minha esposa Emanuela Pereira, benção divina que encanta meus dias, pelo

incentivo, paciência, compreensão e amor.

À Deus pelo amor, fé e fidelidade.

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Agradecimentos

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Agradecimentos

Ao Prof. Dr. Geraldo Bosco Lindoso Couto, pelo apoio, orientação e, acima de

tudo, paciência com este humilde mestrando.

Ao Prof. Dr. José Lamartine de Andrade Aguiar, pela cessão do material

utilizado nesta pesquisa.

Ao Dr. Martinho Dinoá Medeiros Júnior pela valiosa ajuda na realização deste

trabalho.

Aos professores do programa de pós-graduação pelos ensinamentos

transmitidos.

Aos nobres colegas de mestrado, pelo companheirismo e convivência.

À secretária Oziclere Sena e demais funcionários da Pós-Graduação de

Odontologia e da Cirurgia experimental pela ajuda prestada.

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“Cuidar é mais do que um ato é uma atitude. Portanto

abrange mais que um momento de atenção, de zelo e

desvelo. Representa uma atitude de ocupação,

preocupação, de responsabilização e de envolvimento

afetivo com o outro”.

Leonardo Boff

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RESUMO

Introdução: Os fios de sutura são dispositivos utilizados na síntese de feridas

cirúrgicas ou traumáticas, onde a interação do fio com os tecidos durante o processo

cicatricial, deve apresentar entre outras metas a ausência de efeitos adversos.

Objetivo: avaliar, do ponto de vista histológico, o comportamento do biopolímero de

cana-de-açúcar sob a forma de fio de sutura comparando-o com o fio de sutura

Mononylon 5-0® e o adesivo tecidual etil-cianoacrilato na síntese de tecidos.

Metodologia: foram utilizados quarenta e cinco ratos machos da raça rattus novergicus

albinus wistar distribuídos aleatoriamente em três grupos, sedados com hidrato de

cloral a 10% (0,4ml/100g de peso), por via intraperitoneal. Após incisão linear

uniforme, na pele do dorso, atingindo pele, camada celular e tecido subcutâneo e

hemostasia, o material de síntese foi aplicado da seguinte forma: no grupo I, o

Mononylon® 5-0; no grupo II, o adesivo tecidual etil-cianoacrilato e no grupo III, o fio de

sutura à base de biopolímero de cana-de-açúcar. Após sacrifício dos animais no

período de 1, 5 e 10 dias de pós-operatório, os segmentos de pele retirados dos

espécimes, foram fixados em formol tamponado a 10% e, posteriormente, na área

correspondente à ferida cirúrgica, as peças foram seccionadas, transversalmente, em

três pontos eqüidistantes incluídas na superfície de corte, de modo a serem

visualizados as estruturas da superfície à profundidade. Resultados: nas primeiras 24

horas, a resposta tecidual foi semelhante entre os três grupos. Aos cinco dias, não se

observaram diferenças estatísticas entre os grupos quando os elementos histológicos

foram avaliados. Aos dez dias os resultados dos três grupos assemelharam-se. Em

nenhum momento foi observada diferença significativa entre os materiais utilizados.

Conclusão: pode-se afirmar que o biopolímero de cana-de-açúcar apresentou-se como

uma alternativa viável na síntese de ferimentos cirúrgicos.

Palavras-chaves: Biocompatibilidade. Cana-de-açúcar. Cicatrização de feridas.

Técnicas de sutura.

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ABSTRACT

Introduction: The suture wires are materials used in the synthesis of surgical wounds or

not, and the interaction of the wire with tissues during the cicatricial process, must have

among others objectives, the absence of side effects. Objective: analyze by descriptive

histologic study the characteristics of the tissue reply between the tissue adhesive

ethyl-cyanoacrylate, the Mononylon® wire suture 5-0 and a suture wire made of sugar-

cane biopolymer in the tissue synthesis. Methodology: forty five male rats of the rattus

novergicus albinus wistar race had been used distributed randomly in three groups,

knocked down with chloral hydrate 10% (0,4ml/100g of weight). After uniform line

incision, in the back skin, reaching skin, cellular and low tissue and hemostasia layer,

the synthesis material was applied by the following way: group I, Mononylon® 5-0;

group II, the tissue adhesive ethyl-cyanoacrylate and group III, the wire made of sugar-

cane biopolymer. Sacrifice was done in 1, 5 and 10 days after surgery. The segments

of skin of specimens were removed, fixed in formol 10% and, later, in the

corresponding area to the surgical wound, the parts were sliced, transversally, in three

equidistant points in the cut surface, in order to be visualized the structures of the

surface to the depth. Results: in first the 24 hours, the tissue reply was similar between

the three groups. To the five days, the histologicals characteristics of the group of

biopolymer more had been accented. To the ten days the results of the three groups if

had been similar. At no moment significant difference between the used materials was

observed. Conclusion: the wire made of sugar-cane biopolymer was presented as a

viable alternative in the synthesis of wounds.

Key words: Biocompatibility. Sugar-cane. Wound Healing. Suture Techniques.

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Lista de Ilustrações e Tabelas

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LISTA DE ILUSTRAÇÕES E TABELAS

Figura 1: Síntese tecidual com fio de sutura à 27

base de biopolímero de cana-de-açúcar.

Figura 2: 1º dia pós-operatório: bordas da incisão (seta) 27

apresentando neutrófilos, com infiltrado inflamatório de leve

a moderado. Mononylon 5-0® (1), etil-cianoacrilato (2),

biopolímero (3). Hematoxilina eosina (aumento 40x).

Figura 3: 5º dia pós-operatório: Presença de fibroblastos 28

jovens e com morfologia de fibrócitos distribuídos longitudinalmente

à linha de incisão (*). Mononylon 5-0® (1), etil-cianoacrilato (2),

biopolímero (3). Hematoxilina eosina (aumento 40x).

Figura 4: 10º dia pós-operatório: Presença de células 28

inflamatórias e capilares sanguineos, com fibroblastos paralelos

a linha de incisão (*).Mononylon 5-0® (1), etil-cianoacrilato (2),

biopolímero (3). Hematoxilina eosina (aumento 40x).

Tabela 1 - Distribuição dos elementos celulares de 29

acordo com o material de síntese utilizado e período pós-operatório.

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SUMÁRIO

Capa 14

Introdução 16

Metodologia 17

Resultados 19

Discussão 21

Conclusão 23

Referências 23

Apêndices

Ficha avaliativa das respostas teciduais 30

Anexo

Aprovação do comitê de ética 32

Normas da Revista Journal of Applied Oral Science 33

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AVALIAÇÃO HISTOLÓGICA DA REAÇÃO TECIDUAL DO FIO DE SUTURA À BASE

DE BIOPOLÍMERO DE CANA-DE-AÇÚCAR COMPARADO COM O ADESIVO

TECIDUAL ETIL-CIANOACRILATO E O MONONYLON 5-0®: ESTUDO EM RATOS.

Anderson Marciano Pereira1

Geraldo Bosco Lindoso Couto2

1 Mestrando do programa de Pós-graduação do Depto. de Prótese e Cirurgia

Bucofacial do Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal de Pernambuco,

Recife, Pernambuco, Brasil. 2 Professor Associado do Departamento de Clínica e Odontologia Preventiva, Centro

de Ciências da Saúde, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, Pernambuco,

Brasil.

Anderson Pereira (autor para correspondência). Endereço: Rua do Pombal, 844, Santo

Amaro, Recife – PE, 505100-170 Brasil. Telefone: 81 34217245

E-mail: [email protected]

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AVALIAÇÃO HISTOLÓGICA DA REAÇÃO TECIDUAL DO FIO DE SUTURA À BASE

DE BIOPOLÍMERO DE CANA-DE-AÇÚCAR COMPARADO COM O ADESIVO

TECIDUAL ETIL-CIANOACRILATO E O MONONYLON 5-0®: ESTUDO EM RATOS.

RESUMO

Introdução: Os fios de sutura são dispositivos utilizados na síntese de feridas

cirúrgicas ou traumáticas, onde a interação do fio com os tecidos durante o processo

cicatricial, deve apresentar entre outras metas a ausência de efeitos adversos.

Objetivo: avaliar, do ponto de vista histológico, o comportamento do biopolímero de

cana-de-açúcar sob a forma de fio de sutura comparando-o com o fio de sutura

Mononylon 5-0® e o adesivo tecidual etil-cianoacrilato na síntese de tecidos.

Metodologia: foram utilizados quarenta e cinco ratos machos da raça rattus novergicus

albinus wistar distribuídos aleatoriamente em três grupos, sedados com hidrato de

cloral a 10% (0,4ml/100g de peso), por via intraperitoneal. Após incisão linear

uniforme, na pele do dorso, atingindo pele, camada celular e tecido subcutâneo e

hemostasia, o material de síntese foi aplicado da seguinte forma: no grupo I, o

Mononylon® 5-0; no grupo II, o adesivo tecidual etil-cianoacrilato e no grupo III, o fio de

sutura à base de biopolímero de cana-de-açúcar. Após sacrifício dos animais no

período de 1, 5 e 10 dias de pós-operatório, os segmentos de pele retirados dos

espécimes, foram fixados em formol tamponado a 10% e, posteriormente, na área

correspondente à ferida cirúrgica, as peças foram seccionadas, transversalmente, em

três pontos eqüidistantes incluídas na superfície de corte, de modo a serem

visualizados as estruturas da superfície à profundidade. Resultados: nas primeiras 24

horas, a resposta tecidual foi semelhante entre os três grupos. Aos cinco dias, não se

observaram diferenças estatísticas entre os grupos quando os elementos histológicos

foram avaliados. Aos dez dias os resultados dos três grupos assemelharam-se. Em

nenhum momento foi observada diferença significativa entre os materiais utilizados.

Conclusão: pode-se afirmar que o biopolímero de cana-de-açúcar apresentou-se como

uma alternativa viável na síntese de ferimentos cirúrgicos.

UNITERMOS: Cicatrização de feridas. Biocompatibilidade. Cana-de-açúcar. Técnicas de

sutura.

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INTRODUÇÃO

O processo de cicatrização é de fundamental importância no sucesso cirúrgico

e depende, entre outros fatores, do material utilizado na síntese dos tecidos

(CANCINO, OLIVEIRA e SANT’ANA FILHO5, 2004).

Assim, a coaptação de feridas cirúrgicas tem sido tradicionalmente realizada

por meio de fios de sutura, embora alguns efeitos desfavoráveis sobre o processo de

reparação sejam atribuídos a esse método (NASCIMENTO, et al.19, 1996). Os fios de

sutura são dispositivos que mantêm os tecidos na posição desejada para o início do

processo de reparação, e são considerados ideais, os fios que cumpram exigências

tais como: grande resistência à tração e à torção, calibre fino e regular, flexível e

pouco elástico, de fácil esterilização, baixo custo e ausência de reações teciduais

(LISBOA, LOWCZYK e SENDYK14, 2005).

Segundo Dourado et al.9 (2005), o fio de nylon, dentre os fios de sutura

convencionais, é o que apresenta melhor resposta biológica, cicatricial e capacidade

de coaptação de bordos de uma ferida incisa. Tendo em vista as necessidades

estéticas, o cianoacrilato tem sido aplicado com resultados satisfatórios, quando

comparado às suturas com o fio de nylon, pois apresentam melhor capacidade de

coaptação dos bordos de uma lesão de pele, menor cicatriz residual, menor tempo

cirúrgico e biocompatibilidade, estando limitado às zonas de baixa tensão tecidual

(OROZCO-RAZÓN, MILLÁN-GUERRERO e VERA-RODRÍGUEZ20, 2002; Nahas, et

al.18, 2004; HOLGER, WANDERSEE e HALE11, 2004; BLONDEEL, et al.3, 2004;

COULTHARD, et al.8, 2004).

Recentemente, um novo material de estrutura química polimérica, foi obtido por

síntese a partir do melaço da cana-de-açúcar na Estação Experimental de cana-de-

açúcar de Carpina da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE). Esse

polissacarídeo extracelular produzido por síntese, através da bactéria Zoogloea sp, foi

denominado de biopolímero de cana-de-açúcar e apresenta, além de excepcional

capacidade de processo em vários materiais, características físicas e químicas

adequadas para a confecção de próteses (PATERSON-BEEDLE, et al.21, 2000;

COELHO, et al.6, 2002; LIMA, et al.13, 2005; MARQUES, et al.15, 2007).

O biopolímero in natura, ainda com açúcares residuais, foi inicialmente

empregado no tratamento de feridas acidentais em animais domésticos, reduzindo a

contaminação bacteriana e o tempo de cicatrização (COELHO, et al.6, 2002).

Atualmente um grupo de pesquisa do biopolímero de cana-de-açúcar desenvolveu um

processo de tratamento para redução de açúcares residuais do biopolímero obtendo

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um produto puro, constituído unicamente de açúcares e ácido glicurônico

polimerizados. O referido polímero em estado de pureza apresenta elasticidade,

resistência à tração, flexibilidade e ainda pode ser modelado em diferentes formas

(MONTEIRO, et al.17, 2001; SILVA, et al.24, 2006; AGUIAR, et al.2, 2007).

No intuito de observar se o presente material apresenta biocompatibilidade, o

objetivo deste trabalho foi avaliar, do ponto de vista histológico, o comportamento

desse material sob a forma de fio de sutura comparando-o com o fio de sutura

Mononylon 5-0® e o adesivo tecidual etil-cianoacrilato.

METODOLOGIA

Foram utilizados, neste experimento, 45 (quarenta e cinco) ratos da raça rattus

novergicus albinus wistar, adultos, machos, com idade entre 60 e 90 dias de vida,

pesando em média 300 gramas, procedentes do biotério do Departamento de Nutrição

da UFPE. Foram distribuídos, aleatoriamente, em três grupos, alocando-se um animal

para cada grupo experimental, até completar 15 ratos em cada grupo. Os

experimentos foram realizados no Núcleo de Cirurgia Experimental da Universidade

Federal de Pernambuco.

Os animais foram sedados administrando-se hidrato de cloral em solução a

10% (0,4mL/100g de peso), injetando-se a solução por via intraperitoneal. Os animais,

após sedados, foram colocados, individualmente, em decúbito ventral sobre uma mesa

de trabalho de 30x30 cm.

Após a tricotomia manual da região dorsal paramediana direita e a anti-sepsia

com PVPI (Polivinil Pirrolidona Iodo), os campos estéreis foram aposicionados. Uma

vez isolado o campo operatório, foi realizada uma incisão linear, uniforme, na pele do

dorso, no sentido céfalo-caudal, lateral a linha média e com aproximadamente 25 mm

de extensão - atingindo pele, camada celular e tecido subcutêneo - utilizando-se para

isso um cabo de bisturi montado com uma lâmina nº10 (Lâmina de bisturi B-D aço

inox). Posteriormente, a hemostasia foi realizada e o material de síntese aplicado. Este

procedimento, desde a incisão até a aplicação do material da síntese, foi realizado em

um animal por vez e igualmente em todos os animais de todos os grupos (MARTINS,

et al.16, 1995).

Nos animais do grupo I, a síntese tecidual foi realizada por meio de sutura

simples com quatro pontos isolados, distando 5mm entre si (CANCINO, OLIVEIRA e

SANT’ANA FILHO5, 2004), utilizando-se para tal fim Mononylon® 5-0 [Ethilon – 45cm.

Agulha Prime, E-16 com curvatura de 3/8 e comprimento de 1,65cm, Divisão Ethicon

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(Ethicon, Somerville, NJ Jonhson & Jonhson)], uma pinça tipo Adson-Brown e porta

agulha

Nos animais do grupo II, a síntese tecidual foi obtida com a aplicação de etil-

cianoacrilato (Super Bond® – Loctite do Brasil – Itapevi, SP). Depois da aproximação

manual das bordas da ferida, o adesivo foi aplicado sobre a área incisada.

Previamente à aplicação, uma agulha hipodérmica descartável foi adaptada à ponta do

frasco de etil-cianoacrilato. Uma aplicação recobrindo a área operada, em sentido

céfalo-caudal foi realizada, sem penetrar na área cruenta. A agulha foi substituída em

cada aplicação, a fim de evitar a contaminação, tanto do material, como da ferida. A

pele foi mantida segura por 20 segundos até a polimerização do adesivo (BRUNS e

WORTHINGTON4, 2000).

Nos animais do grupo III, a síntese tecidual foi realizada, por meio de sutura

simples, com quatro pontos isolados, distando 5mm entre si, utilizando-se, para tal fim,

fio de sutura à base de biopolímero de cana-de-açúcar, uma pinça tipo Adson-Brown e

porta agulha (figura 1).

Para obtenção das peças de análise, foi realizado o sacrifício dos animais em

1, 5 e 10 dias após o procedimento cirúrgico, por meio da administração de hidrato de

cloral a 10%, por via intraperitoneal, na proporção de 1,6mL/100g de peso do animal.

Após a eutanásia, com uma margem de segurança de 05 mm, as áreas

operadas foram incisadas, dissecadas e removidas com o auxílio de uma tesoura

Metzembaum. Os segmentos de pele foram fixados em formol tamponado a 10% e,

posteriormente, na área correspondente à ferida cirúrgica, as peças foram secionadas,

transversalmente, em três pontos eqüidistantes, incluídas na superfície de corte, de

modo a visualizarem-se as estruturas da superfície à profundidade.

As peças foram submetidas ao processamento histológico de rotina, incluídas

em parafina e coradas com hematoxilina e eosina (HE). Os cortes histológicos foram

de 05µm de espessura, incluindo quatro porções em cada lâmina. Este procedimento

foi realizado no Laboratório de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco.

Procedeu-se a observação histológica e descrição do conjunto de lâminas por

dois examinadores com mestrado em Patologia, utilizando-se um microscópio com

uma ocular de 10X de aumento e objetivas de 4X e 10X de aumento.. As lâminas

foram identificadas com um código para garantir que, durante a leitura, o examinador

desconhecesse a qual grupo pertencia cada lâmina observada e, de modo a que,

posteriormente fossem identificadas para se saber a que grupos pertenciam.

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Por serem representativos do processo de cicatrização, estabeleceu-se como

critérios de avaliação a presença ou não de: necrose, reação de corpo estranho,

fibroblastos, neoformação vascular; e a contagem de células inflamatórias, linfócitos,

neutrófilos e infiltrado linfoplasmocitário. As definições em leve, moderado e intenso,

foram atribuídas quando observou-se a presença de elementos histológicos que

correspondessem, respectivamente, de 0 a 33, de 34 a 66 ou de 67 a 100% da região

da lâmina examinada. Os achados foram registrados em uma ficha, utilizando-se os

símbolos (+) ou (-) de acordo com a presença ou não de, pelo menos, uma célula que

representasse um dos critérios estabelecidos (Cancino, Oliveira e Sant’ana Filho5,

2004).

Os dados foram analisados estatisticamente, onde a interpretação foi baseada

a luz da literatura (Teste exato de Fisher e Teste de Kruskal−−−−Wallis), considerando

p<0.05 como significante. A metodologia da análise estatística foi descrita a partir dos

dados observados e coletados no presente estudo. A representação dos resultados

deu-se graficamente em distribuições de freqüências absolutas e relativas.

O presente estudo foi submetido à apreciação do Comitê de Ética em

Experimentação Animal (CEEA) da Universidade Federal de Pernambuco e foi

aprovado sob o número 028/06.

RESULTADOS

Na descrição dos resultados foram consideradas todas as áreas das sínteses

próximas ao material de sutura. Os eventos histológicos observados foram descritos,

considerando-se o conteúdo dos achados mais representativos de cada grupo

experimental, no primeiro, quinto e décimo dia, respectivamente.

Linfócitos

A Tabela 1 apresenta a proporção de presença de linfócitos, de acordo com o

dia de observação e o material utilizado tratamento. Ao primeiro, quinto e décimo dia

de observação, as percentagens da presença de linfócitos não apresentaram variação

estatisticamente significante entre os materiais (Teste exato de Fisher: p = 0,725 (dia

1); p = 0,800 (dia 5) e p = 1,000 (dia 10)). Para cada material, as percentagens da

presença de linfócitos não apresentaram variação estatisticamente significante entre

os dias de observação (Teste exato de Fisher: p = 0,534 (cianoacrilato); p = 0,800

(Nylon) e p = 0,251 (biopolímero)).

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Neutrófilos

A Tabela 1 apresenta a proporção de presença de neutrófilos, de acordo com o

dia de observação e o material. Ao primeiro e quinto, as percentagens da presença de

neutrófilos não apresentaram variação estatisticamente significante entre os materiais

(Teste exato de Fisher: p = 1,000 (dia 1); e p = 0,800 (dia 5)). No dia décimo, não foi

registrada presença de neutrófilos em nenhum material. Com exceção do fio nylon, as

percentagens da presença de linfócitos não apresentaram variação estatisticamente

significante entre os dias de observação (Teste exato de Fisher: p = 0,051

(cianoacrilato); p = 0,009 (Nylon) e p = 0,066 (biopolímero)).

Presença de Reação de Células Gigantes (RCG)

A Tabela 1 apresenta a proporção de presença de RCG, de acordo com o dia

de observação e o material. Em cada um dos dias de observação, as percentagens da

presença de RCG não apresentaram variação estatisticamente significante entre os

materiais (Teste exato de Fisher: p = 1,000 (dia 1); p = 0,451 (dia 5) e p = 0,066 (dia

10)). Em cada material, as percentagens da presença de linfócitos não apresentaram

variação estatisticamente significante entre os dias de observação (Teste exato de

Fisher: p = 0,451 (cianoacrilato); p = 0,051 (Nylon) e p = 0,286(biopolímero)).

Presença de formação vascular

A Tabela 1 apresenta a proporção da presença de formação vascular, de

acordo com o dia de observação e o material. Em cada um dos dias de observação, as

percentagens da presença de vascular não apresentaram variação estatisticamente

significante entre os tratamentos (Teste exato de Fisher: p = 0,066 (dia 1); p = 0,500

(dia 5) e p = 0,451 (dia 10)). Em cada material, as percentagens da presença de

formação vascular não apresentaram variação estatisticamente significante entre os

dias de observação (Teste exato de Fisher: p = 0,068 (cianoacrilato); p = 0,231 (Nylon)

e p = 0,800 (biopolímero)).

Presença de reação inflamatória

Em cada um dos dias de observação, as distribuições da reação inflamatória

não apresentaram variação estatisticamente significante entre os materiais (Teste de

Kruskal−−−−Wallis: p = 0,961 (dia 1); p = 0,584 (dia 5) e p = 0,584 (dia 10)). Para cada

material, as distribuições da reação inflamatória não apresentaram variação

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estatisticamente significante entre os dias (Teste de Kruskal−−−−Wallis: p = 0,116

(cianoacrilato); p = 0,727 (Nylon) e p = 0,638 (Biopolímero)).

Fibroblastos

No primeiro dia não foi observada a presença de fibroblastos em nenhum dos

espécimes estudados.

Ao quinto dia no grupo do mononylon® 5-0, na linha de incisão observou-se

ocasionais fibroblastos jovens ou com morfologia de fibrócitos. No grupo do etil-

cianoacrilato, as bordas apresentaram-se com densa presença de fibroblastos jovens

longitudinalmente a linha de incisão, alguns com morfologia de fibrócitos. No grupo do

biopolímero, observaram-se na linha de incisão fibroblastos com morfologia de

fibrócitos.

No décimo dia o grupo do mononylon® 5-0 evidenciou a presença de

fibroblastos distribuídos longitudinalmente à linha de incisão. No grupo do etil-

cianoacrilato houve a presença de fibroblastos com morfologia de fibrócito. E no grupo

do biopolímero houve uma resposta fibroblástica densa com fibroblastos jovens e com

morfologia de fibrócitos.

DISCUSSÃO

A proposta deste trabalho foi descrever, a partir de uma análise histológica, as

características do processo de cicatrização de ferimentos cutâneos frente a diferentes

materiais de síntese: fio nylon, fio de biopolímero de cana-de-açúcar e adesivo tecidual

etil-cianoacrilato, aplicados no dorso de ratos. Esta metodologia também foi utilizada

por Santos, et al. 23 (1990), Greco Junior, Carmo e Lopes Filho10 (2000) que avaliaram

os eventos histológicos resultantes da aplicação de derivados do cianoacrilato e fios

de sutura, baseando-se na descrição de lâminas em relação à presença de infiltrado

linfocitário e fibroblastos.

Há uma escassez de trabalhos experimentais que comparem histologicamente,

os três materiais aqui estudados. Isso se deve por conta do biopolímero ser um

material que está sendo estudado de forma experimental e que ainda não se encontra

disponível no mercado. Assim, justifica-se a execução de outros estudos que avaliem,

experimentalmente, a resposta tecidual quando da utilização tanto do adesivo etil-

cianoacrilato como do fio de nylon em seres humanos em comparação ao biopolímero,

visto que, nos trabalhos de Santos, et al. 23 (1990) e Martins, et al.16 (1995), o etil-

cianoacrilato teve um comportamento histológico favorável ao processo de

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cicatrização e o fio de nylon, dentre os fios de sutura convencionais, é o que

apresentou melhor resposta biológica, cicatricial e capacidade de coaptação de

bordos de uma ferida incisa (Dourado, et al.9, 2005).

O resultado mais significante de efetividade da síntese do ferimento é a

ausencia de deiscência (KUO12, 2006) e corroborando com essa observação, neste

estudo não houve casos de deiscência, nem casos de infecção, sem a presença de

indícios como vermelhidão, edema, drenagem purulenta ou aumento de temperatura

da pele. Os resultados obtidos nesta pesquisa, quanto à reação inflamatória, foram

similares àqueles descritos por Vanholder, et al.27 (1993), os quais mostraram, em

trabalho experimental, realizado em ratos, que, aos 7 dias, a reação inflamatória foi

semelhante a utilização, tanto do adesivo, quanto do fio de sutura.

Os achados obtidos pela análise microscópica nas primeiras 24 horas quando

a síntese tecidual foi realizada com o fio de sutura e com o etil-cianoacrilato,

mostraram que a resposta tecidual geral caracterizou-se pela presença de neutrófilos

e reação inflamatória de leve a moderada, sendo semelhante entre os grupos (figura

2), concordando com os trabalhos de Cotran, Kumar e Collins7 (2000) e Adzick1

(2000), os quais relataram esse tipo de reação inflamatória, como decorrente do

trauma cirúrgico provocado pela passagem da agulha e do fio entre os tecidos, e do

processo de cicatrização de ferimentos cutâneos (TAYLOR25, 1975; WEISMANN e

BRITO28, 1993). Quando da utilização do biopolímero, as respostas observadas foram

semelhantes as dos outros materiais, com exceção da presença de linfócitos onde não

foi observada nenhuma ocorrência.

Neste estudo, aos cinco dias, independente do material de síntese utilizado,

observou-se um aumento da presença de linfócitos, baixa presença de neutrófilos e

reação de células gigantes e maior presença vascular. Além disso, os sinais de

inflamação tenderam ao desaparecimento, com a presença de fibroblastos ao longo da

linha de incisão; e onde alguns já apresentavam morfologia de fibrócitos como foi o

caso do etil-cianoacrilato e do biopolímero (figura 3). Esses eventos também foram

observados no estudo de Cancino, Oliveira e Sant’ana Filho5 (2004), que no quinto dia

de pós-operatório, nos animais que tiveram as incisões suturadas, persistia a presença

de linfócitos, embora escassos e fibroblastos dispostos transversalmente à linha de

incisão, sugerindo maior necessidade de ancoragem para dar continuidade ao

processo de cicatrização; e, nos animais que receberam etil-cianoacrilato, foi nula a

presença de células inflamatórias, com fibroblastos jovens paralelos à linha de incisão,

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caracterizando uma melhor coaptação das bordas da ferida. Postlethwait, Willigan e

Ulin22 (1975); Santos, et al.23 (1990) e Martins, et al.16 (1995), também salientaram a

presença de linfócitos e fibroblastos jovens nessa etapa, sendo constante a presença

de tecido de granulação. Contudo, no trabalho de Valenzuela26 (1995) os fragmentos

de adesivo e o tecido de granulação evidenciados, alteraram o processo de

cicatrização, fato que não foi confirmado pela presente pesquisa.

Aos dez dias do experimento, o processo de cicatrização das feridas que

receberam fio de sutura de biopolímero de cana-de-açúcar foi considerado semelhante

em relação ao grupo do fio nylon (figura 4). Contudo, no mesmo período de

experimento, Cancino, Oliveira e Sant’ana Filho5 (2004) verificaram que os mesmos

eventos observados com os cianoacrilatos aos cinco dias foram os mesmos

observados, aos dez dias, com o grupo da sutura; e no grupo do cianoacrilato, aos dez

dias, os fibroblastos apresentavam morfologia de fibrócitos, concluindo, dessa forma,

que o processo de cicatrização das feridas que receberam sutura foi considerado

retardado em relação aos grupos dos adesivos, sugerindo que a cicatrização, com o

uso do adesivo completou-se mais rapidamente.

Entretanto, neste trabalho, através da observação histológica do processo de

cicatrização, o biopolímero evidenciou, tanto no quinto como no décimo dia de

observação, a presença de fibroblastos, inclusive com morfologia de fibrócitos,

mostrando que este material pode tornar-se uma boa alternativa na síntese de tecidos.

CONCLUSÃO

Após análise dos resultados pode-se concluir que:

• Do ponto de vista histológico, a utilização do fio de sutura de biopolímero de

cana-de-açúcar foi semelhante ao fio de sutura Mononylon 5-0® e o adesivo

tecidual etil-cianoacrilato, pois mostraram reação tecidual parecidas.

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27

FIGURAS

Figura 1 – Síntese tecidual com fio de sutura à base de biopolímero de cana-de-

açúcar.

Figura 2 – 1º dia pós-operatório: bordas da incisão (seta) apresentando neutrófilos,

com infiltrado inflamatório de leve a moderado. Mononylon 5-0® (1), etil-cianoacrilato

(2), biopolímero (3). Hematoxilina eosina (aumento 40x).

1 2 3

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Figura 3 – 5º dia pós-operatório: Presença de fibroblastos jovens e com morfologia de

fibrócitos distribuídos longitudinalmente à linha de incisão (*). Mononylon 5-0® (1), etil-

cianoacrilato (2), biopolímero (3). Hematoxilina eosina (aumento 40x).

Figura 4 – 10º dia pós-operatório: Presença de células inflamatórias e capilares

sanguineos, com fibroblastos paralelos a linha de incisão (*).Mononylon 5-0® (1), etil-

cianoacrilato (2), biopolímero (3). Hematoxilina eosina (aumento 40x).

*

*

*

*

3 2 1

1 2 3

* *

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TABELAS

Tabela 1. Distribuição dos elementos celulares de acordo com o material de síntese utilizado e período pós-operatório.

Presença de linfócitos

nos espécimes

Presença de

neutrófilos Presença de RCG

Presença de formação

vascular Reação inflamatória

Dia Material Sim Não Sim Não Sim Não Sim Não Leve Moderada Intensa

1 Cianoacrilato 2 (40,0%) 3 (60,0%) 4(80,0%) 1 (20,0%) 0 ( −−−−) 5(1000,0%) 0 ( −−−−) 5 (1000,0%) 3 (60,0%) 2 (40,0%) 0 (−−−−)

1 Nylon 1 (20,0%) 4 (80,0%) 5(100,0%) 0 (−−−−) 1(20,0%) 4 (80,0%) 4 (80,0%) 1 (20,0%) 3 (60,0%) 2 (40,0%) 0 (−−−−)

1 Biopolímero 0 (−−−−) 5(100,0%) 4 (80,0%) 1(20,0%) 0 (−−−−) 5(100,0%) 2 (40,0%) 3 (60,0%) 3 (60,0%) 1 (20,0%) 1 (20,0%)

5 Cianoacrilato 4 (80,0%) 1 (20,0%) 1 (10,0%) 4 (90,0%) 2(40,0%) 3 (60,0%) 4 (80,0%) 1 (20,0%) 5 (100,0%) 0 (−−−−) 0 (−−−−)

5 Nylon 2 (40,0%) 3 (60,0%) 3 (60,0%) 2 (40,0%) 0 (−−−−) 5 (100,0%) 2 (40,0%) 3 (60,0%) 4 (80,0%) 1 (20,0%) 0 (−−−−)

5 Biopolímero 3 (60,0%) 2 (40,0%) 2 (40,0%) 3 (60,0%) 2(40,0%) 3 (60,0%) 4 (20,0%) 1 (20,0%) 4 (80,0%) 1 (20,0%) 0 (−−−−)

10 Cianoacrilato 2 (40,0%) 3 (60,0%) 0 (−−−−) 5(100,0%) 2(40,0%) 3 (60,0%) 3 (60,0%) 2 (40,0%) 5 (100,0%) 0 (−−−−) 0 (−−−−)

10 Nylon 3 (60,0%) 2 (40,0%) 0 (−−−−) 5(100,0%) 4(80,0%) 1 (20,0%) 5(100,0%) 0 (−−−−) 4 (80,0%) 1 (20,0%) 0 (−−−−)

10 Biopolímero 2 (40,0%) 3 (60,0%) 0 (−−−−) 5(100,0%) 0 (−−−−) 5 (100,0%) 3 (60,0%) 2 (40,0%) 4 (80,0%) 1 (20,0%) 0 (−−−−)

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APÊNDICE A

FICHA AVALIATIVA DAS RESPOSTAS TECIDUAIS

Examinador: ____________________________________ Data: ___/___/___ Orientação: os achados deverão ser registrados nesta ficha, utilizando-se os símbolos (+) e (-) de acordo com a presença ou não de pelo menos uma célula que represente cada um dos itens relacionados, sendo: (-): nulo (+): leve (++): moderado (+++): intenso

Lâmina Necrose Fibroblastos Linfócito Neutrófilo Reação de Células

Gigantes

Vascularização Reação Inflamatória

1A 1B 1C 1D 1E 2A 2B 2C 2D 2E 3A 3B 3C 3D 3E 4A 4B 4C 4D 4E 5A 5B 5C 5D 5E 6A 6B 6C 6D 6E 7A 7B 7C 7D 7E

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8A 8B 8C 8D 8E 9A 9B 9C 9D 9E

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ANEXO A

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ANEXO B

INSTRUÇÕES AOS AUTORES

ISSN 1678-7757 versão impressa ISSN 1678-7765 versão online

Escopo e política

1 ESCOPO

O periódico Journal of Applied Oral Science tem como missão a divulgação dos avanços científicos e tecnológicos conquistados pela comunidade odontológica, respeitando os indicadores de qualidade, a fim de que seja assegurada a sua aceitabilidade junto à comunidade de pesquisadores da área em nível local, regional, nacional e internacional. Tem como objetivo principal publicar resultados de pesquisas originais, e a convite do editor,casos clínicos e revisões no campo da Odontologia e áreas correlatas.

2 DAS NORMAS GERAIS

2.1 Os trabalhos enviados para publicação devem ser inéditos, não sendo permitida a sua submissão simultânea em outro periódico, seja este de âmbito nacional ou internacional. O Journal of Applied Oral Science reserva todo o direito autoral dos trabalhos publicados, inclusive tradução, permitindo, entretanto, a sua posterior reprodução como transcrição com devida citação de fonte. 2.2 Só serão recebidos para publicação, trabalhos redigidos em inglês, ficando o conteúdo dos textos, das citações e das referências sob inteira responsabilidade dos autores.

2.3 O Journal of Applied Oral Science tem o direito de submeter todos os manuscritos ao corpo editorial, o qual está completamente autorizado a determinar a conveniência de sua aceitação, ou devolvê-los aos autores com sugestões e modificações no texto e/ou para adaptação às regras editoriais da revista. Neste caso, o manuscrito será reavaliado pelo Editor-Chefe e Corpo Editorial.

2.4 Os conceitos afirmados nos trabalhos publicados são de inteira responsabilidade dos autores, não refletindo obrigatoriamente a opinião do Editor-Chefe ou Corpo Editorial.

2.5 As datas do recebimento do original e da aceitação do artigo constarão quando da publicação.

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2.6 Cada autor receberá um fascículo da revista no qual seu trabalho foi publicado. Exemplares adicionais, se solicitados, serão fornecidos, sendo-lhes levado a débito o respectivo acréscimo.

2.7 Dependendo da disponibilidade dos recursos financeiros do Journal of Applied Oral Science ou dos autores, ilustrações coloridas serão publicadas a critério do Editor-Chefe.

3 CRITÉRIOS DE ARBITRAGEM

3.1 Os trabalhos serão avaliados primeiramente quanto ao cumprimento das normas de publicação. Manuscritos não adequados às instruções serão rejeitados e devolvidos aos autores antes mesmo de serem submetidos à avaliação pelos revisores. 3.2 Os manuscritos aprovados quanto às normas serão submetidos à apreciação quanto ao mérito e método científico por, no mínimo, dois relatores de unidades distintas à de origem do trabalho, além do Editor-Chefe. Quando necessária revisão do original, o manuscrito será devolvido ao autor correspondente para modificação. Uma versão revisada com as alterações efetuadas deverá ser re-submetida pelos autores, que será reavaliada pelo Editor-Chefe e Corpo Editorial. 3.3 O Editor-Chefe decidirá sobre a aceitação do manuscrito, podendo, inclusive, devolvê-lo aos autores com sugestões para que sejam feitas as alterações necessárias no texto e/ou ilustrações. Neste caso, é solicitado aos autores o envio da versão revisada contendo as devidas alterações ou justificativas. Esta nova versão do trabalho será reavaliada pelo Editor-Chefe e Corpo Editorial. 3.4 Após aprovação quanto ao mérito científico, os trabalhos serão submetidos à análise da língua inglesa (revisão técnica) e da precisão estatística. Nos casos de inadequação os trabalhos serão encaminhados para os autores para revisão. 3.5 Tanto os avaliadores quanto os autores, durante todo o processo de tramitação dos artigos, não são identificados pela outra parte. 3.6 Os conceitos emitidos nos trabalhos publicados serão de responsabilidade exclusiva dos autores, não refletindo obrigatoriamente a opinião do Editor-Chefe ou Corpo Editorial.

4 DA CORREÇÃO DAS PROVAS TIPOGRÁFICAS

4.1 A prova tipográfica será enviada ao autor correspondente por meio de correio eletrônico em formato PDF para aprovação final. 4.2 O autor dispõe de um prazo de 72 horas para correção e devolução do original devidamente revisado, se necessário. 4.3 Se não houver retorno da prova em 72 horas, o Editor-Chefe considerará como final a versão sem alterações, e não serão permitidas maiores modificações. Apenas pequenas modificações, correções de ortografia e verificação das ilustrações serão aceitas. Modificações extensas implicarão na reapreciação pelos assessores e atraso na publicação do trabalho.

4.4 A inclusão de novos autores não é permitida nesta fase do processo de publicação.

Forma e preparação de manuscritos

1 APRESENTAÇÃO DO MANUSCRITO

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1.1 Estrutura do manuscrito

- Página de rosto (deverá ser submetida como arquivo suplementar pelo sistema de submissão online da revista) que deverá conter apenas:

- O título do manuscrito em inglês.

- Os nomes dos autores na ordem direta seguido da sua principal titulação e filiação institucional em inglês. Correspondências entre as titulações brasileiras e internacionais pode ser obtida em nossa home page: www.fob.usp.br/jaos.

- Endereço completo do autor correspondente, a quem todas as correspondências devem ser endereçadas, incluindo telefone e fax bem como endereço de e-mail.

1.2 Texto

- Título e subtítulo, se necessário, do trabalho em inglês - Resumo: deverá incluir o máximo de 300 palavras, ressaltando-se no texto uma pequena introdução, objetivo, material e métodos, resultados e conclusões.

- Palavras-chave: (correspondem às palavras ou expressões que identificam o conteúdo do artigo). Para determinação das palavras-chave, os autores deverão consultar a lista de assuntos do "Índex Medicus" e os Descritores em Ciências da Saúde – DeCS (consulta eletrônica pelo endereço: http://decs.bvs.br/). Deve-se usar ponto final para separar as palavras-chave, que devem ter a primeira letra da primeira palavra em letra maiúscula. Ex: Dental implants. Fixed prosthesis. Photoelasticity. Passive fit.

- Introdução: resumo do raciocínio e a proposta do estudo, citando somente referências pertinentes. Estabelecer a hipótese do trabalho.

- Material e Métodos: o material e os métodos são apresentados com detalhes suficientes para permitir a confirmação das observações. Incluir cidade, estado e país de todos os fabricantes depois da primeira menção dos produtos, reagentes ou equipamentos. Métodos publicados devem ser referenciados e discutidos brevemente, exceto se modificações tenham sido feitas. Indicar os métodos estatísticos utilizados, se aplicável. Consultar o item 3 para princípios éticos e registro de ensaios clínicos.

- Resultados: apresenta os resultados em uma seqüência lógica no texto, tabelas e ilustrações. Não repetir no texto todos os dados das tabelas e ilustrações, enfatizando somente as observações importantes. Utilizar o mínimo de tabelas e ilustrações possível.

- Discussão: enfatizar os aspectos novos e importantes do estudo e as conclusões resultantes. Não repetir em detalhes dados ou informações citadas na introdução ou resultados. Relatar observações de outros estudos relevantes e apontar as implicações de seus achados e suas limitações.

- Conclusão(ões): (quando houver).

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- Agradecimentos: (quando houver) - agradeça pessoas que tenham contribuído de maneira significativa para o estudo. Especifique auxílios financeiros citando o nome da organização de apoio de fomento e o número do processo.

- Referências (ver item 2.3)

2 NORMALIZAÇÃO TÉCNICA

O manuscrito deve ser digitado com: espacejamento de 1,5, fonte ARIAL, tamanho 11, 3cm de margem de cada um dos lados, papel A4, perfazendo um total de, no máximo, 15 páginas, incluindo ilustrações (gráficos, fotografias, tabelas, etc). Os autores devem manter uma cópia do manuscrito para eventuais solicitações.

2.1 Ilustrações e Tabelas

2.1.1 As ilustrações (fotografias, gráficos, desenhos, quadros etc.), serão consideradas no texto como figuras, sendo limitadas ao mínimo indispensáveis e devem ser adicionadas em arquivos separados, numeradas consecutivamente em algarismos arábicos segundo a ordem em que aparecem no texto.

2.1.2 As fotografias deverão ser encaminhadas em cores originais, digitalizadas em formato .tif, .gif ou .jpg, com no mínimo de 300dpi de resolução e 10cm de largura. Essas fotos deverão estar em arquivos separados e não inseridas no texto do Word.

2.1.3 As legendas correspondentes deverão ser claras, concisas e localizadas ao final do trabalho em forma de lista separada e precedidas da numeração correspondente.

2.1.4 As tabelas deverão ser logicamente organizadas, numeradas consecutivamente em algarismos arábicos. A legenda será colocada na parte superior das mesmas. As tabelas deverão ser abertas nas laterais direita e esquerda.

2.1.5 As notas de rodapé serão indicadas por asteriscos e restritas ao mínimo indispensável.

2.2 Citação de autores

A citação dos autores no texto poderá ser feita de duas maneiras:

1) Somente numérica: ... and interfere with the bacterial system and tissue system3,4,7-

10. As referências devem ser citadas em ordem ascendente no parágrafo.

2) ou alfanumérica:

- Um autor: Silva23 (1986)

- Dois autores: Silva and Carvalho25 (1987)

- Três autores: Ferreira, Silva and Martins27 (1997)

- mais que três autores: Silva, et al.28 (1998)

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Caracteres de pontuação tal como "pontos" e "vírgulas" devem ser colocados depois da citação numérica dos autores. Ex: Ferreira38.

2.3 Referências

As Referências deverão obedecer aos requisitos "Uniform requirements for manuscripts submitted to Biomedical Journals – Vancouver", para a submissão de manuscritos a revistas biomédicas - disponível no seguinte endereço eletrônico:

http://www.nlm.nih.gov/bsd/uniform_requirements.html.

2.3.1 Toda referência deverá ser citada no texto. Elas devem ser ordenadas alfabeticamente pelo sobrenome do autor e numeradas em ordem crescente. A ordem de citação no texto obedecerá a esta numeração. As abreviaturas dos títulos dos periódicos internacionais citados deverão estar de acordo com o Index Medicus/ MEDLINE.

2.3.2 Não incluir comunicações pessoais e materiais bibliográficos sem data de publicação na lista de referências.

2.3.3 Teses, dissertações, monografias e resumos não serão aceitos como referências.

2.3.4 Listar os nomes dos 6 primeiros autores do trabalho; excedendo este número, os 6 primeiros autores do trabalho devem ser citados, seguidos pela expressão ", et al.", que deve ser seguida por "ponto" e não escrita em itálico. Ex: Uhl, et al.

2.3.5 Não ultrapassar a citação de 30 referências, exceto para artigos de revisão de literatura a convite do Editor-Chefe.

Exemplos de referências:

Livro

Melberg JR, Ripa LW, Leske GS. Fluoride in preventive dentistry: theory and clinical applications. Chicago: Quintessence; 1983.

Capítulo de Livro

Verbeeck RMH. Minerals in human enamel and dentin. ln: Driessens FCM, Woltgens JHM, editors. Tooth development and caries. Boca Raton: CRC Press; 1986. p. 95-152.

Artigo de periódico

Wenzel A, Fejerskov O. Validity of diagnosis of questionable caries lesions in occlusal surfaces of extracted third molars. Caries Res. 1992;26:188-93.

Artigos com mais de 6 autores:

Citam-se até os 6 primeiros seguidos da expressão " ,et al."

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Parkin DM, Clayton D, Black, RJ, Masuyer E, Friedl HP, Ivanov E, et al. Childhood - leukaemia in Europe after Chernobyl: 5 years follou-up. Br J Cancer. 1996;73:1006-12.

Artigo sem autor

Seeing nature through the lens of gender. Science. 1993;260:428-9.

Volume com suplemento e/ou Número Especial

Davisdson CL. Advances in glass-ionomer cements. J Appl Oral Sci. 2006;14(sp. Issue):3-9.

Fascículo no todo

Dental Update. Guildford 1991 Jan/Feb;18(1).

A exatidão das referências é de responsabilidade dos autores.

3 PRINCÍPIOS ÉTICOS E REGISTROS DE ENSAIOS CLÍNICOS

3.1 Procedimentos experimentais em animais e humanos. O periódico Journal of Applied Oral Science endossa os princípios incorporados na Declaração de Helsinki e insiste que todas as pesquisas que envolvam seres humanos publicadas nesta Revista, sejam conduzidas em conformidade com esses princípios e com outros similares dispostos nos respectivos Comitês de Ética em Pesquisa das respectivas instituições de origem dos autores. No caso de experimentos com animais, estes devem seguir os mesmos princípios de ética envolvidos. Em experimentos que envolvam procedimentos cirúrgicos em animais, os autores devem descrever na seção de Material e Métodos evidências de que a dosagem anestésica produziu efeito adequado e por tempo necessário para a condução do ato cirúrgico. Todos os experimentos com humanos ou animais devem vir acompanhados de descrição, na seção de Material e Métodos de que o estudo foi aprovado pelos respectivos órgãos que gerenciam a Ética em Pesquisa nas suas instituições de origem. O Editor-Chefe e o Conselho Editorial se reservam o direito de recusar artigos que não demonstrem evidência clara de que esses princípios foram seguidos ou que, ao julgamento dos mesmos, os métodos empregados não foram apropriados para o uso de humanos ou animais nos trabalhos submetidos à este periódico.

Registros de Ensaios Clínicos – International Standard Randomized Controlled Trial Number (ISRCTN)

O periódico Journal of Applied Oral Science apóia as políticas para registro de ensaios clínicos da Organização Mundial da Saúde (OMS) e do Comitê Internacional de Editores de Revistas Médicas (ICMJE), reconhecendo a importância dessas iniciativas para o registro e divulgação internacional sobre estudos clínicos com acesso aberto. Sendo assim, somente serão aceitos para publicação os artigos de pesquisas clínicas que tenham recebido um número de identificação, o ISRCTN, em um dos registros de ensaios clínicos, validados pelos critérios estabelecidos pela OMS e pelo ICMJE. A OMS define Ensaio Clínico como "qualquer estudo de pesquisa que prospectivamente designa participantes humanos ou grupos de humanos para uma ou mais intervenções relacionadas à saúde para avaliar os efeitos e os resultados de saúde. Intervenções

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incluem, mas não se restringem a drogas, células e outros produtos biológicos, procedimentos cirúrgicos, procedimentos radiológicos, dispositivos, tratamentos comportamentais, mudanças no processo de cuidado, cuidado preventivo etc."

Para realizar o registro do Ensaio Clínico acesse um dos endereços abaixo:

Registro no Clinicaltrials.gov

URL: http://prsinfo.clinicaltrials.gov/

Registro no International Standard Randomized Controlled Trial Number (ISRCTN)

URL: http://www.controlled-trials.com/

4 OUTRAS QUESTÕES SERÃO RESOLVIDAS PELO EDITOR-CHEFE E CONSELHO EDITORIAL

Envio de manuscritos

1 SUBMISSÃO DO TRABALHO

1.1 Os manuscritos deverão ser submetidos por meio do endereço: http://www.scielo.br/jaos

1.2 O autor correspondente deverá manter uma cópia do original em formato Word assim como as ilustrações (quando aplicável).

1.3 O arquivo original contendo o manuscrito deve ser submetido sem a identificação dos autores e afiliações. A folha de rosto deverá ser submetida como arquivo suplementar contendo o nome dos autores, afiliações e endereço para correspondência.

1.4 As figuras devem ser submetidas como arquivos suplementares de acordo com as especificações do item 2.1 sobre forma e preparação dos manuscritos.

1.5 As tabelas devem ser preparadas em formato Word e inseridas depois das referências no final do arquivo Word original.

1.6 O formulário de submissão, assinado por TODOS os autores, deve ser submetido como arquivo suplementar contendo o seguinte texto:

A assinatura deste formulário de submissão implica na aceitação do seguinte:

Transferência de Direitos: Considerando a aceitação do trabalho acima descrito, Eu transfiro para o Journal of Applied Oral Science, todos os direitos, título e interesse nos direitos autorais do artigo mencionado acima. Este documento se aplica a todas as traduções do mesmo, assim como a apresentação preliminar, sob quaisquer meios de divulgação, do trabalho aceito e ainda não publicado. Se alguma mudança na autoria (ordem, acréscimo ou eliminação) ocorrer após a submissão do trabalho, um

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documento de concordância de todos os autores deve ser enviado para ser mantido nos arquivos do Editor-Chefe. O nome de um autor(a) somente poderá ser removido mediante solicitação do(a) mesmo(a).

Responsabilidades do autor: Eu atesto que: O trabalho é original e não contém dados falsificados, plagiados ou fraudulentos; O conteúdo do trabalho não se encontra atualmente em apreciação, e nem será submetido para publicação em outro periódico, até que uma decisão final de não aceitação seja emitida por esta revista; Eu tive uma contribuição significativa para o trabalho e estou familiarizado com os dados originais descritos no mesmo; Eu li o trabalho por completo e assumo a responsabilidade pelo conteúdo completo da versão final que foi submetida. Entendo que se o trabalho, ou parte dele, for considerada deficiente ou fraudulenta, assumirei a responsabilidade junto com os outros autores.

Descompromisso de conflito de interesse. Todas as minhas afiliações corporativas ou institucionais e todas as fontes de apoio financeiro ao trabalho estão devidamente citadas ou mencionadas em carta anexa. Certifico que não possuo nenhum interesse comercial ou associativo que represente conflito de interesse em conexão com o trabalho submetido.

NOME: ________________ASSINATURA:_________DATA:_______

1.7 Para maiores informações sobre o sistema de submissão online, consultar o TUTORIAL FOR AUTHORS disponível em: http://www.scielo.br/jaos