avaliação dos efeitos de um extrato bruto de cianobactérias

Download avaliação dos efeitos de um extrato bruto de cianobactérias

Post on 01-Jan-2017

221 views

Category:

Documents

5 download

Embed Size (px)

TRANSCRIPT

  • UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE

    CENTRO DE CINCIAS DA SADE

    PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIAS FARMACUTICAS

    AVALIAO DOS EFEITOS DE UM EXTRATO BRUTO DE

    CIANOBACTRIAS CONTENDO MICROCISTINAS SOBRE O

    DESEMPENHO REPRODUTIVO E A EMBRIOFETOTOXICIDADE DE

    RATOS

    Aluno: Cristhiano Sibaldo de Almeida

    Natal/2013

  • UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE

    CENTRO DE CINCIAS DA SADE

    PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIAS FARMACUTICAS

    AVALIAO DOS EFEITOS DE UM EXTRATO BRUTO DE

    CIANOBACTRIAS CONTENDO MICROCISTINAS SOBRE O

    DESEMPENHO REPRODUTIVO E A EMBRIOFETOTOXICIDADE DE

    RATOS

    Defesa apresentada ao Programa de

    Ps-graduao em Cincias

    Farmacuticas, do Centro de Cincias

    da Sade da Universidade Federal do

    Rio Grande do Norte como requisito

    para a obteno do ttulo de Mestre

    em Cincias Farmacuticas.

    Aluno: Cristhiano Sibaldo de Almeida

    Orientadora: Profa. Dra. Paula da Silva Kujbida

    Co-Orientadora: Profa. Dra. Aline Schwarz

    Natal/2013

  • AGRADECIMENTOS

    A DEUS, por saber que sempre esteve, est e estar ao meu lado me amando,

    protegendo, amparando, cuidando, mesmo sabendo que sou imperfeito e pecador.

    Aos meus pais, Gilson Candido e Rosilene Sibaldo, pelo incondicional amor e por

    saber que posso contar sempre que preciso.

    A minha irm, Thays Sibaldo, sempre do meu lado em todos os momentos e

    situaes da vida.

    Aos meus sobrinhos, Gabrielly, Joo e Thala, ensinado a cada dia que a vida

    simples e bela, dependendo do ponto de vista que voc a v.

    A Las Sibaldo e Pedro Natan, pelos momentos de descontrao, importantes para equilibrar os momentos de stress vividos durante todo o mestrado e pela calorosa recepo nesta cidade.

    Aos meus tios, Jos Sibaldo e Rosa Maria Sibaldo, pelo apoio, pacincia e por conceder que durante todo o mestrado pudesse est junto eles no seio da sua famlia, proporcionando um verdadeiro lar.

    A todos meus familiares, especialmente a Beth e Cristina pelas palavras de conforto em momentos difceis durante a caminhada.

    As minhas avs, Zlia e Aurea, pelas oraes dirias oferecidas a mim.

    A minha orientadora, Professora Dr Paula da Silva Kujbida, por seu apoio, amizade, compreenso, companheirismo, dedicao, competncia e por toda ateno e sugestes, fundamentais para a concluso deste trabalho.

    Aos professores, Aline Schwarz, Dulce Lima, Ivoneide Costa, Cludia Nunes, Ernani Pinto, que destinaram parte de seu precioso tempo para participarem desta pesquisa.

    Aos meus amigos que, de uma forma ou de outra, contriburam com sua amizade e com sugestes efetivas para a realizao deste trabalho, gostaria de expressar minha profunda gratido.

    Ao Programa de Ps-graduao em Cincias Farmacuticas da Universidade

    Federal do Rio Grande do Norte UFRN, pelo apoio minha participao no

    mestrado.

    A CAPES, pela bolsa concedida durante o tempo de curso.

  • SUMRIO

    LISTA DE TABELAS ................................................................................................vii

    LISTA DE FIGURAS ..................................................................................................ix

    LISTA DE ABREVIAES E SIGLAS ......................................................................xi

    RESUMO..................................................................................................................xiii

    ABSTRACT ..............................................................................................................xiv

    1 INTRODUO ....................................................................................................... 15

    2 FUNDAMENTAO TEORICA ............................................................................. 16

    2.1CIANOBACTRIAS E CIANOTOXINAS ............................................................ 16

    2.1.1 Microcistinas .............................................................................................. 22

    2.1.1.1 Absoro ................................................................................................. 24

    2.1.1.2 Mecanismo txico das microcistinas ....................................................... 25

    2.2 REPRODUO DE MAMFEROS .................................................................... 26

    2.2.1 Produo de gametas ................................................................................ 27

    2.2.1.1 Produo de gametas femininos ............................................................. 27

    2.1.2 Produo de gametas masculinos ............................................................. 28

    2.2.2 O ciclo estral ............................................................................................... 31

    2.3 TOXICOLOGIA DO DESENVOLVIMENTO ...................................................... 32

    2.4 EFEITOS DAS CIANOTOXINAS NO DESENVOLVIMENTO REPRODUTIVO E

    EMBRIOFETOTOXICIDADE ................................................................................... 36

    3 OBJETIVOS ........................................................................................................... 39

    3.1 OBJETIVO GERAL ........................................................................................... 39

    3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS ............................................................................. 39

    4 MATERIAL E MTODOS ...................................................................................... 40

    4.1 SELEO DO EXTRATO DE FLORAO DE CIANOBACTRIAS ................ 40

    4.1.1 Coleta das amostras de gua e identificao de cianobactrias e

    cianotoxinas ........................................................................................................ 40

    4.1.2 Preparo das solues de extrato de cianobactria ................................. 41

    4.2 ANIMAIS ........................................................................................................... 41

    4.3 DESEMPENHO REPRODUTIVO E EMBRIOFETOTOXICIDADE .................... 42

    4.3.1 Acasalamento ............................................................................................. 42

    4.3.2 Administrao de extrato bruto de cianobactria contendo MCs ......... 44

    4.3.3 Eutansia e cesariana das progenitoras .................................................. 44

    4.3.4 Coleta de sangue ....................................................................................... 45

  • 4.3.5 Avaliao dos fetos ................................................................................... 46

    4.3.6 Avaliao do desempenho reprodutivo ................................................... 46

    4.3.7 Avaliao da Embriofetotoxicidade .......................................................... 47

    4.3.7.1 Estudo visceral ........................................................................................ 47

    4.3.7.2 Estudo esqueltico .................................................................................. 47

    4.4 ENSAIO DO DOMINANTE LETAL .................................................................... 49

    4.4.1 Administrao de extrato bruto de cianobactrias contendo MCs ....... 49

    4.4.2 Administrao de ciclofosfamida ............................................................. 49

    4.4.3 Acasalamento ............................................................................................. 49

    4.4.4 Eutansia dos machos .............................................................................. 50

    4.4.5 Estudo de desenvolvimento reprodutivo de ratas prenhes de ratos

    machos tratados ................................................................................................. 50

    4.5 ENSAIOS HEMATOLGICOS .......................................................................... 50

    4.5.1 Coleta de amostras de medula ssea ...................................................... 51

    4.5.2 Coleta de amostras de sangue perifrico ................................................ 51

    4.5.3 Contagem dos leuccitos totais da medula ssea ................................. 52

    4.5.4 Preparo do citocentrifugado e realizao do mielograma ...................... 52

    4.5.5 Contagem dos leuccitos totais e eritrcitos do sangue perifrico...... 52

    4.5.6 Dosagem de hemoglobina e determinao do hematcrito ................... 53

    4.6 AVALIAO HISTOPATOGICA ..................................................................... 53

    4.7 DOSAGEM BIOQUMICA ................................................................................. 54

    4.8 ANLISE ESTATSTICA ................................................................................... 54

    5 RESULTADOS ....................................................................................................... 55

    5.1 IDENTIFICAO DE CIANOTOXINAS ............................................................. 55

    5.2 AVALIAO DO DESEMPENHO REPRODUTIVO DE RATAS PRENHES E DA

    EMBRIOFETOTOXICIDADE DE SUA PROLE ....................................................... 59

    5.3 AVALIAO DA TOXICIDADE MATERNA ....................................................... 62

    5.4 AVALIAO DE PARMETROS BIOQUMICOS DAS RATAS PRENHES ..... 66

    5.5 AVALIAO HISTOPATOLGICOS DAS RATAS PRENHES......................... 67

    5.6 AVALIAO DA FERTILIDADE DE RATAS MACHOS .................................... 69

    5.7 AVALIAO DE TOXICIDADE DOS RATOS MACHOS .................................. 70

    5.8 AVALIAO BIOQUMICA DOS RATOS MACHOS ..........