REVISTA DE ODONTOLOGIA DA UNESP

Rev Odontol UNESP 2014 July-Aug 43(4) 258-264 copy 2014 - ISSN 1807-2577

ARTIGO ORIGINAL

Doi httpdxdoiorg101590rou2014041

Avaliaccedilatildeo dos efeitos da ropivacaiacutena sobre a reatividade vascular em arteacuteria mesenteacuterica de rato

Assessment of the effects of ropivacaine on vascular reactivity in rat mesenteric artery

Allan Carlos Arauacutejo DE OLIVEIRAa Anny Caroline Siqueira BRITTOa Liane Maciel de Almeida SOUZAa Maacutercio Roberto Viana dos SANTOSa

Patriacutecia dos Santos CUNHAa Francisco Carlos GROPPOb

aUFS ndash Universidade Federal de Sergipe Aracaju SE Brasil bFOP ndash Faculdade de Odontologia de Piracicaba UNICAMP ndash Universidade Estadual de Campinas

Piracicaba SP Brasil

ResumoIntroduccedilatildeo A ropivacaiacutena (ROPI) eacute um anesteacutesico local de longa duraccedilatildeo de accedilatildeo introduzido mais recentemente em Medicina mas ainda natildeo disponiacutevel para uso odontoloacutegico em tubetes Estudos cliacutenicos e com animais confirmam que a ROPI eacute um anesteacutesico local eficaz e que possui um efeito vasoconstritor intriacutenseco Objetivo Avaliar os efeitos da ROPI sobre a reatividade vascular em arteacuteria mesenteacuterica isolada de rato aleacutem de comparar esse efeito ao da lidocaiacutena (LIDO) e avaliar o possiacutevel envolvimento do endoteacutelio vascular na resposta induzida pela ROPI em anel de arteacuteria mesenteacuterica isolada de rato Material e meacutetodo Foram utilizados 14 ratos Wistar machos (250-300g) Os animais foram eutanasiados e atraveacutes de uma incisatildeo no abdome do animal foi retirada a arteacuteria mesenteacuterica Desta arteacuteria foram obtidos aneacuteis (1-2 mm) que foram mantidos em cubas contendo 10 mL de soluccedilatildeo nutritiva de Tyrode mantida a 37 degC e gaseificada com carbogecircnio Para o registro das contraccedilotildees isomeacutetricas cada anel foi suspenso por linhas de algodatildeo a um transdutor de forccedila conectado a um sistema de aquisiccedilatildeo Resultado Tanto a LIDO como a ROPI natildeo apresentaram efeito vasoconstritor sobre o tocircnus basal de aneacuteis com endoteacutelio funcional Poreacutem quando os aneacuteis foram preacute-contraiacutedos com fenilefrina ambas as drogas foram capazes de induzir vasorrelaxamentos dependentes da concentraccedilatildeo (Emaacutex = 317 plusmn 33 n = 6 para a LIDO Emaacutex = 69 plusmn 8 n = 6 para a ROPI) que natildeo foram alterados apoacutes a remoccedilatildeo do endoteacutelio (Emaacutex = 287 plusmn 13 n = 7 para a LIDO Emaacutex = 588 plusmn 59 n = 6 para a ROPI) Em aneacuteis sem endoteacutelio funcional poreacutem preacute-contraiacutedos com soluccedilatildeo despolarizante de Tyrode (KCl a 80 mM) o efeito vasorrelaxante induzido pela LIDO natildeo apresentou alteraccedilotildees significativas (Emaacutex = 29 plusmn 3 n = 7) Poreacutem o efeito da ROPI foi reduzido significativamente neste protocolo bem como na presenccedila de 1 mM de tetraetilamocircnio (TEA) (Emaacutex = 212 plusmn 51 n = 7 e Emaacutex = 174 plusmn 37 n = 4 respectivamente) Conclusatildeo A ROPI produz efeito vasorrelaxante em arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato preacute-contraiacuteda com fenilefrina sendo este independente da participaccedilatildeo do endoteacutelio Este efeito parece envolver os canais para K+ na ceacutelula muscular lisa vascular

Descritores Ropivacaiacutena vasorrelaxamento arteacuteria mesenteacuterica

AbstractIntroduction Ropivacaine (ROPI) is a local anesthetic of long duration of action more recently introduced in medicine however is not available for dental use in tubes yet Clinical and animal studies have confirmed that bupivacaine is an effective anesthetic that also has an intrinsic vasoconstrictor effect Objective To evaluate the effects of ropivacaine on vascular reactivity in isolated rat mesenteric artery compare this to the effect of lidocaine (LIDO) and evaluate the possible involvement of the vascular endothelium induced by ROPI in isolated rat mesenteric artery ring response Material and method It was used 12 male Wistar rats (250-300g) The animals were euthanized and through an incision in the abdomen of the animal the mesenteric artery was removed Artery rings (1-2 mm) were obtained by the mesenteric artery which were kept in vats containing 10 ml of Tyrodersquos nutrient solution kept at 37 degC and gassed with carbogen For the recording of isometric contractions each ring was suspended by cotton lines to a force transducer connected to a data acquisition system Result Both the LIDO as ROPI showed no vasoconstrictor effect on the basal tone of rings with functional endothelium However when the rings were precontracted with phenylephrine both drugs were able to induce concentration-dependent vasorelaxation (Emax = 317 plusmn 33 n = 6 for LIDO and 69 plusmn 8 n = 6 for ROPI) that were not altered after removal of the endothelium (Emax = 287 plusmn 13 n = 7 for LIDO and Emax = 588 plusmn 59 n = 6 for ROPI) In rings without functional endothelium and precontracted with depolarizing Tyrode solution (80 mM KCl) the LIDO-induced

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INTRODUCcedilAtildeO

A primeira anestesia foi relatada por volta de 1844 com oacutexido nitroso e com finalidade exodocircntica A anestesia local surgiu em setembro de 1884 com o uso da cocaiacutena por Carl Koumlller um Oftalmologista de Viena1

Visto os diversos relatos de toxidade com a cocaiacutena a Farmacologia evoluiu ateacute que foi desenvolvido o primeiro anesteacutesico local a procaiacutena no ano de 18991

Os anesteacutesicos locais satildeo classificados de acordo com sua estrutura quiacutemica em eacutester ou amida Os que tecircm maior aplicaccedilatildeo cliacutenica satildeo os anesteacutesicos do tipo amida compreendidos pela mepivacaiacutena lidocaiacutena articaiacutena bupivacaiacutena e ropivacaiacutena2 Assim a ROPI promete ser um grande anesteacutesico na induacutestria farmacecircutica por apresentar baixa toxidade e ser de longa duraccedilatildeo34 Eacute um anesteacutesico local de longa duraccedilatildeo de accedilatildeo introduzido mais recentemente em Medicina mas ainda natildeo disponiacutevel para uso odontoloacutegico em tubetes Alguns poucos trabalhos avaliaram a eficaacutecia anesteacutesica da ROPI em teacutecnica de bloqueio e infiltraccedilatildeo em Odontologia5-8 Experimentaccedilotildees in vitro e in vivo tecircm demonstrado ser a ROPI menos neurotoacutexica e cardiotoacutexica que a bupivacaiacutena devido agrave sua forma levoacutegira de amino-amida34 Liga-se 94 agraves proteiacutenas plasmaacuteticas e possui alta lipossolubilidade9

Estudos cliacutenicos e com animais confirmam que a ROPI eacute um anesteacutesico local eficaz e que possui um efeito vasoconstritor intriacutenseco Pesquisadores descreveram que a ROPI reduz o fluxo sanguiacuteneo capilar cutacircneo de porcos quando administrada por via subcutacircnea10 Outros estudos experimentais mostraram que este anesteacutesico promove contraccedilatildeo das arteriacuteolas cerebrais de catildees e reduz significativamente o fluxo sanguiacuteneo em nervos perifeacutericos de ratos1112 Contudo os estudos envolvendo suas propriedades farmacocineacuteticas satildeo bastante divergentes sobretudo aqueles que enveredam pela sua vasoconstriccedilatildeo intriacutenseca sua propriedade mais relevante1113

Assim este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da ROPI sobre a reatividade vascular em arteacuteria mesenteacuterica isolada de rato aleacutem de comparar este efeito com o efeito induzido pela LIDO e avaliar o possiacutevel envolvimento do endoteacutelio vascular e dos canais para K+ nessa resposta A arteacuteria mesenteacuterica foi escolhida neste estudo por ser uma arteacuteria de resistecircncia e portanto refletir melhor os possiacuteveis efeitos sobre a reatividade vascular nos leitos menores

MATERIAL E MEacuteTODO

Este trabalho foi submetido e aprovado pelo CEPA - Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa Animal da Universidade Federal de Sergipe sob o protocolo de nuacutemero 832011

1 Animais

Foram utilizados 14 ratos Wistar machos normotensos (Rattus norvegicus) jovens adultos (2 meses) pesando entre 250 e 300g provenientes do Bioteacuterio Central da Universidade Federal de Sergipe sendo mantidos no Bioteacuterio Setorial da Universidade Federal de Sergipe sob condiccedilatildeo controlada de temperatura e ciclo claro-escuro de 12 horas (6-18 horas) tendo livre acesso a alimentaccedilatildeo e aacutegua

2 Drogas

Durante a realizaccedilatildeo dos experimentos foram utilizadas as seguintes drogas ROPI (Cristaacutelia) LIDO (Cristaacutelia) fenilefrina (FEN) acetilcolina (Ach) tetraetilamocircnio (TEA) e tiopental Para a preparaccedilatildeo das soluccedilotildees estoques todas as drogas foram dissolvidas em aacutegua destilada mantidas a 0 degC e quando necessaacuterio estas foram diluiacutedas em soluccedilatildeo de Tyrode para concentraccedilotildees desejadas

3 Caracterizaccedilatildeo dos efeitos da ROPI sobre a reatividade vascular em arteacuteria mesenteacuterica de rato

31 Preparaccedilatildeo das arteacuterias

A eutanaacutesia dos animais foi realizada por dessangramento sob anestesia com tiopental e atraveacutes de uma incisatildeo no abdome do animal foi entatildeo retirada a arteacuteria mesenteacuterica superior De cada segmento arterial obteve-se ateacute quatro aneacuteis (1-2 mm) livres de tecido conjuntivo e adiposo Os aneacuteis de arteacuteria foram mantidos em cubas contendo 10 mL de soluccedilatildeo nutritiva de Tyrode (concentraccedilatildeo em mM NaCl 1583 KCl 40 CaCl2 20 MgCl2 105 NaH2PO4 042 NaHCO3 100 e glucose 56) a 37 degC e gaseificada com uma mistura carbogecircnica (95 de O2 e 5 de CO2) Os aneacuteis ficaram suspensos por linhas de algodatildeo fixadas a um transdutor de forccedila preacute-calibrado e acoplado a um sistema de aquisiccedilatildeo (Biodata BIOMED) para o registro das contraccedilotildees isomeacutetricas Cada anel foi entatildeo submetido a uma tensatildeo constante de 075g por um periacuteodo de no miacutenimo 60 min Durante este tempo a soluccedilatildeo nutritiva foi trocada a cada 15 minutos para prevenir a interferecircncia de metaboacutelitos Os aneacuteis sem endoteacutelio foram obtidos mecanicamente atraveacutes do atrito entre as paredes internas do vaso com o auxiacutelio de uma haste de accedilo

A presenccedila ou a ausecircncia do endoteacutelio funcional foi verificada pela habilidade medida em percentagem () da ACh (1 microM) em relaxar os aneacuteis preacute-contraiacutedos com 1 microM de fenilefrina Foram entatildeo considerados com endoteacutelio funcional os aneacuteis que apresentarem relaxamentos superiores a 75 sobre a preacute-contraccedilatildeo com fenilefrina Jaacute os aneacuteis com relaxamentos

vasorelaxation was no significantly changed (Emax = 29 plusmn 3 n = 7) However ROPI-induced vasorelaxation was reduced in this protocol and the presence of 1 mM tetraethylammonium (TEA) (Emax = 212 plusmn 51 n = 7 and Emax = 174 plusmn 37 n = 4 respectively) Conclusion ROPI produces vasorelaxant effect in rat superior mesenteric artery which is independent of the participation of the endothelium This effect seems to involve K+ channels in vascular smooth muscle cell

Descriptors Ropivacaine vasorelaxation artery mesenteric

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inferiores a 10 foram considerados sem endoteacutelio funcional Aneacuteis com relaxamentos entre 10 e 75 foram descartados

32 Protocolos experimentais

321 Avaliaccedilatildeo do efeito da ROPI e da LIDO sobre o tocircnus basal de aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica

Apoacutes o periacuteodo de estabilizaccedilatildeo e a verificaccedilatildeo da presenccedila do endoteacutelio funcional foram adicionadas cumulativamente agrave cuba no tocircnus basal concentraccedilotildees crescentes da ROPI (10ndash12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 4) e da LIDO (10ndash12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 4) para obtenccedilatildeo de uma curva-resposta

322 Avaliaccedilatildeo do efeito da ROPI e da LIDO sobre aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica preacute-contraiacutedos com fenilefrina

Apoacutes o periacuteodo de estabilizaccedilatildeo e a verificaccedilatildeo da presenccedila do endoteacutelio funcional os aneacuteis foram preacute-contraiacutedos com FEN (1 microM) e sobre a fase tocircnica desta contraccedilatildeo foram adicionadas separadamente agrave cuba concentraccedilotildees crescentes da ROPI (10ndash12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 6) e da LIDO (10ndash12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 6) para obtenccedilatildeo de uma curva concentraccedilatildeo-resposta

323 Avaliaccedilatildeo da participaccedilatildeo do endoteacutelio vascular nos efeitos da ROPI e da LIDO em anel de arteacuteria mesenteacuterica isolada de rato

Para avaliar a participaccedilatildeo do endoteacutelio vascular no efeito induzido pela ROPI e pela LIDO curvas semelhantes ao protocolo anterior foram obtidas em aneacuteis sem endoteacutelio funcional

324 Avaliaccedilatildeo da participaccedilatildeo dos canais para Ca2+ nos efeitos da ROPI e da LIDO em anel de arteacuteria mesenteacuterica isolada de rato

Um possiacutevel efeito da ROPI e da LIDO sobre os canais para Ca2+ foi investigado construindo curvas concentraccedilatildeo-resposta para a ROPI (10ndash12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 7) e a LIDO (10ndash12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 7) em aneacuteis sem endoteacutelio e na presenccedila de altas concentraccedilotildees de K+ Neste protocolo experimental a soluccedilatildeo de Tyrode da cuba foi trocada pela soluccedilatildeo despolarizante de Tyrode com KCl a 80 mM (KCl 80) sendo que as preparaccedilotildees permaneceram nesta soluccedilatildeo ateacute o final do experimento

325 Avaliaccedilatildeo da participaccedilatildeo dos canais para K+ nos efeitos da ROPI em anel de arteacuteria mesenteacuterica isolada de rato

Um possiacutevel efeito da ROPI sobre os canais para K+ foi investigado obtendo curvas concentraccedilatildeo-resposta para a ROPI (10ndash12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 4) em aneacuteis sem endoteacutelio preacute-incubados com 1 mM de TEA um bloqueador natildeo seletivo de canais para K+14

326 Anaacutelise estatiacutestica

Os valores foram expressos como a meacutedia + erro padratildeo da meacutedia (epm) Quando necessaacuterio foi utilizada anaacutelise de variacircncia lsquotwo-wayrsquo (ANOVA) seguida do poacutes-teste de

Bonferroni para avaliar a significacircncia das diferenccedilas entre as meacutedias Em todos estes procedimentos foi utilizado o programa estatiacutestico GraphPad Prism versatildeo 302

RESULTADO

Para avaliar um possiacutevel efeito vasoconstritor apresentado pela LIDO e pela ROPI foram realizados experimentos em que aneacuteis com endoteacutelio funcional foram mantidos sobre o tocircnus basal e em seguida foram adicionadas agrave cuba concentraccedilotildees crescentes e cumulativas da LIDO e da ROPI Ambas as substacircncias natildeo apresentaram atividade vasoconstritora (Figura 1)

Diante desse resultado buscou-se avaliar um possiacutevel efeito vasorrelaxante apresentado pela LIDO e pela ROPI em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica Para isso foram obtidas curvas em aneacuteis com endoteacutelio funcional e preacute-contraiacutedos com fenilefrina Tanto a LIDO como a ROPI foram capazes de induzir relaxamentos dependentes da concentraccedilatildeo (Emaacutex = 317 plusmn 33 e 69 plusmn 8 respectivamente n = 6) O vasorrelaxamento obtido para a ROPI foi significativamente maior do que aquele obtido para a LIDO (Figura 2)

Em seguida para avaliar a participaccedilatildeo do endoteacutelio nas respostas apresentadas ateacute entatildeo foram obtidas curvas para a LIDO e para a ROPI em preparaccedilotildees com aneacuteis de arteacuteria sem endoteacutelio funcional observou-se que os efeitos vasorrelaxantes apresentados pelas duas substacircncias estudadas natildeo foram significativamente diferentes daquele obtido na condiccedilatildeo em que os aneacuteis estavam com endoteacutelio funcional (Emaacutex = 287 plusmn 13 n = 7 vs Emaacutex = 317 plusmn 33 n = 6 para a LIDO e Emaacutex = 588 plusmn 59 n = 6 vs Emaacutex = 69 plusmn 8 n = 6 para a ROPI) (Figura 3)

Um possiacutevel envolvimento dos canais para Ca2+ nas respostas apresentadas pela LIDO e pela ROPI foi investigado obtendo curvas em que os aneacuteis foram preacute-contraiacutedos com soluccedilatildeo despolarizante de Tyrode (KCl a 80 mM) Como mostrado na Figura 4 nestas preparaccedilotildees o efeito apresentado pela LIDO foi semelhante nas duas condiccedilotildees (Emaacutex = 29 plusmn 3 n = 7

Figura 1 Curvas concentraccedilatildeo-resposta para a LIDO (10-12 - 10-5 M n = 5) e a ROPI (10-12 - 10-5 M n = 7) sobre o tocircnus basal de aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato com endoteacutelio funcional Os valores estatildeo expressos como meacutedia plusmn EPM

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em aneacuteis de aorta de porco com endoteacutelio intacto a ROPI natildeo produziu qualquer resposta vasoativa

Resultados contraacuterios aos observados no presente trabalho foram observados por Gherardini et al15 em arteacuterias mamaacuterias internas de humanos e por Nakamura et al16 em arteacuteria e veia femoral de catildees Em um experimento que aferiu os efeitos contraacuteteis da ROPI in vitro em leitos mesenteacutericos arteriolares obtidos a partir de 22 ratos machos adultos os pesquisadores

Figura 2 Curvas concentraccedilatildeo-resposta para a LIDO (10-12 ndash 3 times 10-5 M) e a ROPI (10-12 ndash 3 times 10-5 M) em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato com endoteacutelio funcional (n= 6) preacute-contraiacutedos com FEN (1 microM) Os valores estatildeo expressos como meacutedia plusmn EPM Os dados foram analisados por ANOVA de duas vias seguido pelo poacutes-teste de Bonferroni p lt005 e p lt 0001 vs LIDO

vs Emaacutex = 287 plusmn 13 n = 7) mas por outro lado o efeito vasorrelaxante apresentado pela ROPI foi significativamente menor quando comparado agravequele obtido em aneacuteis sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com fenilefrina (Emaacutex = 212 plusmn 51 n = 7 vs Emaacutex = 588 plusmn 59 n = 6)

Para avaliar uma possiacutevel participaccedilatildeo dos canais para K+ no efeito apresentado pela ROPI os aneacuteis sem endoteacutelio funcional foram preacute-incubados com 1 mM de TEA O TEA na concentraccedilatildeo utilizada neste estudo eacute capaz de inibir de forma natildeo seletiva os canais para K+14 Neste protocolo o efeito vasorrelaxante induzido pela ROPI foi significativamente reduzido quando comparado agravequele apresentado pela droga na ausecircncia deste inibidor (Emaacutex = 174 plusmn 37 n = 4 vs Emaacutex = 588 plusmn 59 n = 6) (Figura 5)

DISCUSSAtildeO

Diferentemente dos outros anesteacutesicos locais a ROPI parece apresentar um efeito vasoconstritor intriacutenseco em experimentaccedilotildees in vivo e in vitro15-19 Portanto este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos vasculares da ROPI atraveacutes de uma abordagem in vitro usando preparaccedilotildees de anel de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato e comparaacute-los com os efeitos da LIDO um anesteacutesico local padratildeo usado na Odontologia

No presente estudo foi mostrado que tanto a ROPI como a LIDO natildeo apresentaram nenhum efeito contraacutetil sobre o tocircnus basal de aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica de rato Estes resultados corroboram os achados de Lin et al20 que demonstraram que

Figura 3 Curvas concentraccedilatildeo-resposta em (a) para a LIDO (10ndash

12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 7) e em (b) para a ROPI (10ndash12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 6) (b) em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com FEN (1 microM) Os valores estatildeo expressos como meacutedia plusmn EPM

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forma administrada sistecircmica ou local21 Enquanto em nosso estudo foram utilizados ratos nos estudos acima referidos foram utlizados camundongos catildees e seres humanos Aleacutem disso em todos os estudos em especial aquele em que se utilizou leito mesenteacuterico perfundido18 a menor concentraccedilatildeo de ROPI utilizada foi superior a 10ndash5 M ou seja 80 vezes maior do que a utilizada no presente estudo Estas discrepacircncias impedem uma comparaccedilatildeo mais precisa entre os achados Entretanto pode-se sugerir que a ROPI provavelmente apresente efeitos vasculares diversos a depender da espeacutecie animal estudada do leito vascular utilizado eou das concentraccedilotildees usadas

Como os anesteacutesicos testados natildeo apresentaram efeito vasoconstritor sobre o tocircnus basal novos experimentos foram realizados para caracterizar melhor os efeitos vasorrelaxantes da ROPI e da LIDO Portanto em preparaccedilotildees de aneacuteis preacute-contraiacutedos com 1 microM de fenilefrina um agonista do receptor α1-adreneacutergico tanto a LIDO como a ROPI foram capazes de induzir relaxamentos dependentes da concentraccedilatildeo em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato com endoteacutelio funcional Aleacutem disso o vasorrelaxamento obtido para a ROPI foi significativamente maior do que aquele obtido para a LIDO

Estudos corroboram estes resultados demonstrando que quando injetados em tecidos moles todos os anesteacutesicos locais apresentam um efeito vasorrelaxante17 Em estudo com aneacuteis de aorta de porco os resultados checaram que a ROPI produziu um relaxamento dependente da concentraccedilatildeo em aneacuteis preacute-contraiacutedos com fenilefrina e com endoteacutelio intacto20

Diante do resultado vasorrelaxante apresentado pelos anesteacutesicos estudados buscou-se avaliar entatildeo o mecanismo de accedilatildeo envolvido neste efeito Sabendo-se que o endoteacutelio eacute um importante regulador do tocircnus vascular por liberar fatores

Figura 5 Curvas concentraccedilatildeo-resposta para ROPI (10-12 ndash 3 times 10-5 M) em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com FEN (10 microM) antes e apoacutes a incubaccedilatildeo com TEA (1 mM) Os valores foram expressos como meacutedia plusmn epm Os dados foram analisados por ANOVA de duas vias seguido pelo poacutes-teste de Bonferroni p lt 005 p lt001 e p lt 0001 vs ROPI

Figura 4 Curvas concentraccedilatildeo-resposta para a LIDO (10-12 ndash 3 times 10-5 M) e para a ROPI (10-12 ndash 3 times 10-5 M) em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com FEN (1 microM) (n = 7) e com KCl 80 mM (n = 7) Os valores foram expressos como meacutedia plusmn epm Os dados foram analisados por ANOVA de duas vias seguido pelo poacutes-teste de Bonferroni p lt001 e p lt 0001 vs LIDO

concluiacuteram que a ROPI apresenta um efeito vasoconstritor em arteacuteria mesenteacuterica de camundongos18 Em outro estudo envolvendo anestesia bulbar a ROPI apresentou menor amplitude de pulso ocular associada agrave manutenccedilatildeo da pressatildeo de perfusatildeo ocular sugerindo tambeacutem um efeito vasoconstrictor19

A discrepacircncia entre os resultados descritos acima e os do presente estudo possivelmente pode ser explicada pelo fato de que respostas a drogas podem variar a depender do tecido alvo da especie animal testada das concentraccedilotildees usadas e da

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relaxantes derivados do endoteacutelio ndash principalmente o NO e produtos derivados da ativaccedilatildeo da ciclo-oxigenase (COX) tal como prostaciclinas ndash foram realizados experimentos com o objetivo de avaliar a participaccedilatildeo do endoteacutelio nesta resposta2223 Para tanto curvas para a LIDO e para a ROPI foram obtidas em aneacuteis de arteacuteria sem o endoteacutelio funcional Na Figura 3 as respostas vasorrelaxantes para a LIDO e a ROPI em aneacuteis sem o endoteacutelio funcional natildeo foram significativamente diferentes daquelas obtidas na condiccedilatildeo em que os aneacuteis estavam com endoteacutelio funcional Isto sugere que o endoteacutelio natildeo parece ser importante para a expressatildeo desta resposta e uma via de sinalizacatildeo muscular pode estar envolvida

Diferentemente do observado neste estudo os resultados obtidos por Lin et al20 em aorta de cobaios demonstraram que a ROPI induz um vasorrelaxamento dependente do endoteacutelio funcional Estas diferenccedilas podem ser explicadas pelo fato de os resultados de Lin et al20 terem sido obtidos em aorta de cobaios ou seja leito vascular e espeacutecie animal diferentes daqueles usados no presente estudo Estes achados reforccedilam ainda mais a afirmaccedilatildeo de que a ROPI pode apresentar efeitos vasculares diversos a depender da espeacutecie animal estudada ou do leito vascular utilizado2425

O envolvimento de vias de sinalizaccedilatildeo independente do endoteacutelio tambeacutem foi investigados como o bloqueio dos canais para Ca2+ ou a abertura dos canais para K+ Sabe-se que o aumento da concentraccedilatildeo externa de K+ induz contraccedilatildeo do muacutesculo liso atraveacutes da ativaccedilatildeo de canais de Ca2+ operados por voltagem (Cavs) e consequente liberaccedilatildeo de caacutelcio do retiacuteculo sarcoplasmaacutetico As contraccedilotildees induzidas por altas concentraccedilotildees de K+ satildeo inibidas por bloqueadores de canais para Ca2+ ou por remoccedilatildeo de Ca2+ do meio externo e satildeo desta forma totalmente dependentes do influxo de Ca2+ Este procedimento tambeacutem impede parcialmente o efluxo de K+ e atenua relaxamentos mediados por abertura de canais para K+26

Dessa forma para investigar um possiacutevel envolvimento dos canais para Ca2+ na resposta induzida pela LIDO e pela ROPI curvas para os anesteacutesicos estudados foram obtidas em aneacuteis preacute-contraiacutedos com soluccedilatildeo despolarizante de Tyrode (KCl 80 mM) Nestas preparaccedilotildees a LIDO foi capaz de induzir um vasorrelaxamento que natildeo foi diferente daquele obtido em aneacuteis sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com fenilefrina sugerindo que o vasorrelaxamento induzido pela ROPI possivelmente envolve os Cavs Poreacutem o relaxamento induzido pela ROPI foi siginificativamente menor do que aquele observado

em aneacuteis preacute-contaiacutedos com fenilefrina o que sugere uma possiacutevel participaccedilatildeo dos canais para K+ no efeito vasorrelaxante induzido por este anesteacutesico

A abertura de canais para K+ presente na membrana das ceacutelulas musculares vasculares provoca um aumento da saiacuteda de iacuteons K+ do meio intracelular para o meio extracelular por difusatildeo passiva o que causa a hiperpolarizaccedilatildeo da membrana celular Este estado de hiperpolarizaccedilatildeo conduz ao fechamento de canais de Ca2+ voltagem-dependentes e agrave consequente diminuiccedilatildeo da entrada de iacuteons Ca2+ para o interior da ceacutelula causando o relaxamento vascular26

Para reforccedilar a hipoacutetese de que o efeito vasorrelaxante da ROPI envolveria os canais para K+ na ceacutelula muscular lisa vascular foram realizados experimentos em que aneacuteis de arteacuteria preacute-contraiacutedos com FEN foram preacute-incubados com 1 mM de TEA um bloqueador natildeo seletivo de canais de potaacutessio14 Nestas preparaccedilotildees a resposta induzida pela ROPI foi significativamente atenuada reforccedilando que possivelmente haacute um envolvimento dos canais para K+ neste efeito

Em estudo utilizando aneacuteis de aorta de rato preacute-contraiacutedos com KCl (3 times 10ndash2 M) a ROPI foi capaz de induzir uma resposta bifaacutesica dependente da concentraccedilatildeo na qual foi observada contraccedilatildeo nas concentraccedilotildees mais baixas (3 times 10ndash5 a 3 times 10ndash4 M) seguida pelo abrandamento da contraccedilatildeo em concentraccedilotildees mais elevadas (10ndash3 a 3 times 10ndash3 M) Eacute difiacutecil de explicar a dependecircncia da concentraccedilatildeo do mecanismo subjacente aos efeitos bifaacutesicos de ROPI na contraccedilatildeo vascular especialmente o relaxamento em concentraccedilotildees mais elevadas27

CONCLUSAtildeO

Estes resultados demonstram que a ROPI produz efeito vasorrelaxante em arteacuteria mesenteacuterica superior de rato sendo este efeito independente da participaccedilatildeo do endoteacutelio Esse efeito parece ainda ser causado pela abertura de canais para K+ na ceacutelula muscular lisa vascular Eacute possiacutevel sugerir que a ROPI apresenta efeitos diversos sobre a reatividade vascular e que este efeito depende principalmente do leito arterial estudado

AGRADECIMENTOS

Agradecemos agrave Universidade Federal de Sergipe e ao Laboratoacuterio Cristaacutelia pela colaboraccedilatildeo pela base e pelo incentivo agrave pesquisa

REFEREcircNCIAS

1 Calatayud J Gonzaacuteles Agrave History of the development and evolution of local anesthesia since the coca leaf Anesthesiology 2003 98(6) 1503-8 httpdxdoiorg10109700000542-200306000-00031

2 Ramacciato JC Motta RHL Groppo FC Volpato MC Ranali J Anesteacutesicos locais Rev Assoc Paul Cir Dent 2007 61(4) 486-7

3 Delfino J Estudo comparativo entre a bupivacaiacutena 05 e ropivacaiacutena 05 isobaacutericas na anestesia subaracnoacuteidea para cirurgia ortopeacutedica Rev Bras de Anestesiol 1999 49(3) 160-4

4 Delfino J Estudo comparativo entre a ropivacaiacutena 05 e 075 isobaacutericas na anestesia subaracnoacuteidea para cirurgia ortopeacutedica Rev Bras de Anestesiol 2000 50(3) 207-11

5 Kennedy M Reader A Beck M Weaver J Anesthetic efficacy of ropivacaine in maxillary anterior infiltration Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2001 91(4)406-12 PMid11312459 httpdxdoiorg101067moe2001114000

260 Oliveira Britto Souza et al Rev Odontol UNESP 2014 43(4) 258-264

inferiores a 10 foram considerados sem endoteacutelio funcional Aneacuteis com relaxamentos entre 10 e 75 foram descartados

32 Protocolos experimentais

321 Avaliaccedilatildeo do efeito da ROPI e da LIDO sobre o tocircnus basal de aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica

Apoacutes o periacuteodo de estabilizaccedilatildeo e a verificaccedilatildeo da presenccedila do endoteacutelio funcional foram adicionadas cumulativamente agrave cuba no tocircnus basal concentraccedilotildees crescentes da ROPI (10ndash12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 4) e da LIDO (10ndash12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 4) para obtenccedilatildeo de uma curva-resposta

322 Avaliaccedilatildeo do efeito da ROPI e da LIDO sobre aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica preacute-contraiacutedos com fenilefrina

Apoacutes o periacuteodo de estabilizaccedilatildeo e a verificaccedilatildeo da presenccedila do endoteacutelio funcional os aneacuteis foram preacute-contraiacutedos com FEN (1 microM) e sobre a fase tocircnica desta contraccedilatildeo foram adicionadas separadamente agrave cuba concentraccedilotildees crescentes da ROPI (10ndash12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 6) e da LIDO (10ndash12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 6) para obtenccedilatildeo de uma curva concentraccedilatildeo-resposta

323 Avaliaccedilatildeo da participaccedilatildeo do endoteacutelio vascular nos efeitos da ROPI e da LIDO em anel de arteacuteria mesenteacuterica isolada de rato

Para avaliar a participaccedilatildeo do endoteacutelio vascular no efeito induzido pela ROPI e pela LIDO curvas semelhantes ao protocolo anterior foram obtidas em aneacuteis sem endoteacutelio funcional

324 Avaliaccedilatildeo da participaccedilatildeo dos canais para Ca2+ nos efeitos da ROPI e da LIDO em anel de arteacuteria mesenteacuterica isolada de rato

Um possiacutevel efeito da ROPI e da LIDO sobre os canais para Ca2+ foi investigado construindo curvas concentraccedilatildeo-resposta para a ROPI (10ndash12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 7) e a LIDO (10ndash12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 7) em aneacuteis sem endoteacutelio e na presenccedila de altas concentraccedilotildees de K+ Neste protocolo experimental a soluccedilatildeo de Tyrode da cuba foi trocada pela soluccedilatildeo despolarizante de Tyrode com KCl a 80 mM (KCl 80) sendo que as preparaccedilotildees permaneceram nesta soluccedilatildeo ateacute o final do experimento

325 Avaliaccedilatildeo da participaccedilatildeo dos canais para K+ nos efeitos da ROPI em anel de arteacuteria mesenteacuterica isolada de rato

Um possiacutevel efeito da ROPI sobre os canais para K+ foi investigado obtendo curvas concentraccedilatildeo-resposta para a ROPI (10ndash12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 4) em aneacuteis sem endoteacutelio preacute-incubados com 1 mM de TEA um bloqueador natildeo seletivo de canais para K+14

326 Anaacutelise estatiacutestica

Os valores foram expressos como a meacutedia + erro padratildeo da meacutedia (epm) Quando necessaacuterio foi utilizada anaacutelise de variacircncia lsquotwo-wayrsquo (ANOVA) seguida do poacutes-teste de

Bonferroni para avaliar a significacircncia das diferenccedilas entre as meacutedias Em todos estes procedimentos foi utilizado o programa estatiacutestico GraphPad Prism versatildeo 302

RESULTADO

Para avaliar um possiacutevel efeito vasoconstritor apresentado pela LIDO e pela ROPI foram realizados experimentos em que aneacuteis com endoteacutelio funcional foram mantidos sobre o tocircnus basal e em seguida foram adicionadas agrave cuba concentraccedilotildees crescentes e cumulativas da LIDO e da ROPI Ambas as substacircncias natildeo apresentaram atividade vasoconstritora (Figura 1)

Diante desse resultado buscou-se avaliar um possiacutevel efeito vasorrelaxante apresentado pela LIDO e pela ROPI em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica Para isso foram obtidas curvas em aneacuteis com endoteacutelio funcional e preacute-contraiacutedos com fenilefrina Tanto a LIDO como a ROPI foram capazes de induzir relaxamentos dependentes da concentraccedilatildeo (Emaacutex = 317 plusmn 33 e 69 plusmn 8 respectivamente n = 6) O vasorrelaxamento obtido para a ROPI foi significativamente maior do que aquele obtido para a LIDO (Figura 2)

Em seguida para avaliar a participaccedilatildeo do endoteacutelio nas respostas apresentadas ateacute entatildeo foram obtidas curvas para a LIDO e para a ROPI em preparaccedilotildees com aneacuteis de arteacuteria sem endoteacutelio funcional observou-se que os efeitos vasorrelaxantes apresentados pelas duas substacircncias estudadas natildeo foram significativamente diferentes daquele obtido na condiccedilatildeo em que os aneacuteis estavam com endoteacutelio funcional (Emaacutex = 287 plusmn 13 n = 7 vs Emaacutex = 317 plusmn 33 n = 6 para a LIDO e Emaacutex = 588 plusmn 59 n = 6 vs Emaacutex = 69 plusmn 8 n = 6 para a ROPI) (Figura 3)

Um possiacutevel envolvimento dos canais para Ca2+ nas respostas apresentadas pela LIDO e pela ROPI foi investigado obtendo curvas em que os aneacuteis foram preacute-contraiacutedos com soluccedilatildeo despolarizante de Tyrode (KCl a 80 mM) Como mostrado na Figura 4 nestas preparaccedilotildees o efeito apresentado pela LIDO foi semelhante nas duas condiccedilotildees (Emaacutex = 29 plusmn 3 n = 7

Figura 1 Curvas concentraccedilatildeo-resposta para a LIDO (10-12 - 10-5 M n = 5) e a ROPI (10-12 - 10-5 M n = 7) sobre o tocircnus basal de aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato com endoteacutelio funcional Os valores estatildeo expressos como meacutedia plusmn EPM

Rev Odontol UNESP 2014 43(4) 258-264 Avaliaccedilatildeo dos efeitos da ropivacaiacutena sobre a reatividade 261

em aneacuteis de aorta de porco com endoteacutelio intacto a ROPI natildeo produziu qualquer resposta vasoativa

Resultados contraacuterios aos observados no presente trabalho foram observados por Gherardini et al15 em arteacuterias mamaacuterias internas de humanos e por Nakamura et al16 em arteacuteria e veia femoral de catildees Em um experimento que aferiu os efeitos contraacuteteis da ROPI in vitro em leitos mesenteacutericos arteriolares obtidos a partir de 22 ratos machos adultos os pesquisadores

Figura 2 Curvas concentraccedilatildeo-resposta para a LIDO (10-12 ndash 3 times 10-5 M) e a ROPI (10-12 ndash 3 times 10-5 M) em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato com endoteacutelio funcional (n= 6) preacute-contraiacutedos com FEN (1 microM) Os valores estatildeo expressos como meacutedia plusmn EPM Os dados foram analisados por ANOVA de duas vias seguido pelo poacutes-teste de Bonferroni p lt005 e p lt 0001 vs LIDO

vs Emaacutex = 287 plusmn 13 n = 7) mas por outro lado o efeito vasorrelaxante apresentado pela ROPI foi significativamente menor quando comparado agravequele obtido em aneacuteis sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com fenilefrina (Emaacutex = 212 plusmn 51 n = 7 vs Emaacutex = 588 plusmn 59 n = 6)

Para avaliar uma possiacutevel participaccedilatildeo dos canais para K+ no efeito apresentado pela ROPI os aneacuteis sem endoteacutelio funcional foram preacute-incubados com 1 mM de TEA O TEA na concentraccedilatildeo utilizada neste estudo eacute capaz de inibir de forma natildeo seletiva os canais para K+14 Neste protocolo o efeito vasorrelaxante induzido pela ROPI foi significativamente reduzido quando comparado agravequele apresentado pela droga na ausecircncia deste inibidor (Emaacutex = 174 plusmn 37 n = 4 vs Emaacutex = 588 plusmn 59 n = 6) (Figura 5)

DISCUSSAtildeO

Diferentemente dos outros anesteacutesicos locais a ROPI parece apresentar um efeito vasoconstritor intriacutenseco em experimentaccedilotildees in vivo e in vitro15-19 Portanto este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos vasculares da ROPI atraveacutes de uma abordagem in vitro usando preparaccedilotildees de anel de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato e comparaacute-los com os efeitos da LIDO um anesteacutesico local padratildeo usado na Odontologia

No presente estudo foi mostrado que tanto a ROPI como a LIDO natildeo apresentaram nenhum efeito contraacutetil sobre o tocircnus basal de aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica de rato Estes resultados corroboram os achados de Lin et al20 que demonstraram que

Figura 3 Curvas concentraccedilatildeo-resposta em (a) para a LIDO (10ndash

12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 7) e em (b) para a ROPI (10ndash12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 6) (b) em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com FEN (1 microM) Os valores estatildeo expressos como meacutedia plusmn EPM

262 Oliveira Britto Souza et al Rev Odontol UNESP 2014 43(4) 258-264

forma administrada sistecircmica ou local21 Enquanto em nosso estudo foram utilizados ratos nos estudos acima referidos foram utlizados camundongos catildees e seres humanos Aleacutem disso em todos os estudos em especial aquele em que se utilizou leito mesenteacuterico perfundido18 a menor concentraccedilatildeo de ROPI utilizada foi superior a 10ndash5 M ou seja 80 vezes maior do que a utilizada no presente estudo Estas discrepacircncias impedem uma comparaccedilatildeo mais precisa entre os achados Entretanto pode-se sugerir que a ROPI provavelmente apresente efeitos vasculares diversos a depender da espeacutecie animal estudada do leito vascular utilizado eou das concentraccedilotildees usadas

Como os anesteacutesicos testados natildeo apresentaram efeito vasoconstritor sobre o tocircnus basal novos experimentos foram realizados para caracterizar melhor os efeitos vasorrelaxantes da ROPI e da LIDO Portanto em preparaccedilotildees de aneacuteis preacute-contraiacutedos com 1 microM de fenilefrina um agonista do receptor α1-adreneacutergico tanto a LIDO como a ROPI foram capazes de induzir relaxamentos dependentes da concentraccedilatildeo em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato com endoteacutelio funcional Aleacutem disso o vasorrelaxamento obtido para a ROPI foi significativamente maior do que aquele obtido para a LIDO

Estudos corroboram estes resultados demonstrando que quando injetados em tecidos moles todos os anesteacutesicos locais apresentam um efeito vasorrelaxante17 Em estudo com aneacuteis de aorta de porco os resultados checaram que a ROPI produziu um relaxamento dependente da concentraccedilatildeo em aneacuteis preacute-contraiacutedos com fenilefrina e com endoteacutelio intacto20

Diante do resultado vasorrelaxante apresentado pelos anesteacutesicos estudados buscou-se avaliar entatildeo o mecanismo de accedilatildeo envolvido neste efeito Sabendo-se que o endoteacutelio eacute um importante regulador do tocircnus vascular por liberar fatores

Figura 5 Curvas concentraccedilatildeo-resposta para ROPI (10-12 ndash 3 times 10-5 M) em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com FEN (10 microM) antes e apoacutes a incubaccedilatildeo com TEA (1 mM) Os valores foram expressos como meacutedia plusmn epm Os dados foram analisados por ANOVA de duas vias seguido pelo poacutes-teste de Bonferroni p lt 005 p lt001 e p lt 0001 vs ROPI

Figura 4 Curvas concentraccedilatildeo-resposta para a LIDO (10-12 ndash 3 times 10-5 M) e para a ROPI (10-12 ndash 3 times 10-5 M) em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com FEN (1 microM) (n = 7) e com KCl 80 mM (n = 7) Os valores foram expressos como meacutedia plusmn epm Os dados foram analisados por ANOVA de duas vias seguido pelo poacutes-teste de Bonferroni p lt001 e p lt 0001 vs LIDO

concluiacuteram que a ROPI apresenta um efeito vasoconstritor em arteacuteria mesenteacuterica de camundongos18 Em outro estudo envolvendo anestesia bulbar a ROPI apresentou menor amplitude de pulso ocular associada agrave manutenccedilatildeo da pressatildeo de perfusatildeo ocular sugerindo tambeacutem um efeito vasoconstrictor19

A discrepacircncia entre os resultados descritos acima e os do presente estudo possivelmente pode ser explicada pelo fato de que respostas a drogas podem variar a depender do tecido alvo da especie animal testada das concentraccedilotildees usadas e da

Rev Odontol UNESP 2014 43(4) 258-264 Avaliaccedilatildeo dos efeitos da ropivacaiacutena sobre a reatividade 263

relaxantes derivados do endoteacutelio ndash principalmente o NO e produtos derivados da ativaccedilatildeo da ciclo-oxigenase (COX) tal como prostaciclinas ndash foram realizados experimentos com o objetivo de avaliar a participaccedilatildeo do endoteacutelio nesta resposta2223 Para tanto curvas para a LIDO e para a ROPI foram obtidas em aneacuteis de arteacuteria sem o endoteacutelio funcional Na Figura 3 as respostas vasorrelaxantes para a LIDO e a ROPI em aneacuteis sem o endoteacutelio funcional natildeo foram significativamente diferentes daquelas obtidas na condiccedilatildeo em que os aneacuteis estavam com endoteacutelio funcional Isto sugere que o endoteacutelio natildeo parece ser importante para a expressatildeo desta resposta e uma via de sinalizacatildeo muscular pode estar envolvida

Diferentemente do observado neste estudo os resultados obtidos por Lin et al20 em aorta de cobaios demonstraram que a ROPI induz um vasorrelaxamento dependente do endoteacutelio funcional Estas diferenccedilas podem ser explicadas pelo fato de os resultados de Lin et al20 terem sido obtidos em aorta de cobaios ou seja leito vascular e espeacutecie animal diferentes daqueles usados no presente estudo Estes achados reforccedilam ainda mais a afirmaccedilatildeo de que a ROPI pode apresentar efeitos vasculares diversos a depender da espeacutecie animal estudada ou do leito vascular utilizado2425

O envolvimento de vias de sinalizaccedilatildeo independente do endoteacutelio tambeacutem foi investigados como o bloqueio dos canais para Ca2+ ou a abertura dos canais para K+ Sabe-se que o aumento da concentraccedilatildeo externa de K+ induz contraccedilatildeo do muacutesculo liso atraveacutes da ativaccedilatildeo de canais de Ca2+ operados por voltagem (Cavs) e consequente liberaccedilatildeo de caacutelcio do retiacuteculo sarcoplasmaacutetico As contraccedilotildees induzidas por altas concentraccedilotildees de K+ satildeo inibidas por bloqueadores de canais para Ca2+ ou por remoccedilatildeo de Ca2+ do meio externo e satildeo desta forma totalmente dependentes do influxo de Ca2+ Este procedimento tambeacutem impede parcialmente o efluxo de K+ e atenua relaxamentos mediados por abertura de canais para K+26

Dessa forma para investigar um possiacutevel envolvimento dos canais para Ca2+ na resposta induzida pela LIDO e pela ROPI curvas para os anesteacutesicos estudados foram obtidas em aneacuteis preacute-contraiacutedos com soluccedilatildeo despolarizante de Tyrode (KCl 80 mM) Nestas preparaccedilotildees a LIDO foi capaz de induzir um vasorrelaxamento que natildeo foi diferente daquele obtido em aneacuteis sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com fenilefrina sugerindo que o vasorrelaxamento induzido pela ROPI possivelmente envolve os Cavs Poreacutem o relaxamento induzido pela ROPI foi siginificativamente menor do que aquele observado

em aneacuteis preacute-contaiacutedos com fenilefrina o que sugere uma possiacutevel participaccedilatildeo dos canais para K+ no efeito vasorrelaxante induzido por este anesteacutesico

A abertura de canais para K+ presente na membrana das ceacutelulas musculares vasculares provoca um aumento da saiacuteda de iacuteons K+ do meio intracelular para o meio extracelular por difusatildeo passiva o que causa a hiperpolarizaccedilatildeo da membrana celular Este estado de hiperpolarizaccedilatildeo conduz ao fechamento de canais de Ca2+ voltagem-dependentes e agrave consequente diminuiccedilatildeo da entrada de iacuteons Ca2+ para o interior da ceacutelula causando o relaxamento vascular26

Para reforccedilar a hipoacutetese de que o efeito vasorrelaxante da ROPI envolveria os canais para K+ na ceacutelula muscular lisa vascular foram realizados experimentos em que aneacuteis de arteacuteria preacute-contraiacutedos com FEN foram preacute-incubados com 1 mM de TEA um bloqueador natildeo seletivo de canais de potaacutessio14 Nestas preparaccedilotildees a resposta induzida pela ROPI foi significativamente atenuada reforccedilando que possivelmente haacute um envolvimento dos canais para K+ neste efeito

Em estudo utilizando aneacuteis de aorta de rato preacute-contraiacutedos com KCl (3 times 10ndash2 M) a ROPI foi capaz de induzir uma resposta bifaacutesica dependente da concentraccedilatildeo na qual foi observada contraccedilatildeo nas concentraccedilotildees mais baixas (3 times 10ndash5 a 3 times 10ndash4 M) seguida pelo abrandamento da contraccedilatildeo em concentraccedilotildees mais elevadas (10ndash3 a 3 times 10ndash3 M) Eacute difiacutecil de explicar a dependecircncia da concentraccedilatildeo do mecanismo subjacente aos efeitos bifaacutesicos de ROPI na contraccedilatildeo vascular especialmente o relaxamento em concentraccedilotildees mais elevadas27

CONCLUSAtildeO

Estes resultados demonstram que a ROPI produz efeito vasorrelaxante em arteacuteria mesenteacuterica superior de rato sendo este efeito independente da participaccedilatildeo do endoteacutelio Esse efeito parece ainda ser causado pela abertura de canais para K+ na ceacutelula muscular lisa vascular Eacute possiacutevel sugerir que a ROPI apresenta efeitos diversos sobre a reatividade vascular e que este efeito depende principalmente do leito arterial estudado

AGRADECIMENTOS

Agradecemos agrave Universidade Federal de Sergipe e ao Laboratoacuterio Cristaacutelia pela colaboraccedilatildeo pela base e pelo incentivo agrave pesquisa

REFEREcircNCIAS

1 Calatayud J Gonzaacuteles Agrave History of the development and evolution of local anesthesia since the coca leaf Anesthesiology 2003 98(6) 1503-8 httpdxdoiorg10109700000542-200306000-00031

2 Ramacciato JC Motta RHL Groppo FC Volpato MC Ranali J Anesteacutesicos locais Rev Assoc Paul Cir Dent 2007 61(4) 486-7

3 Delfino J Estudo comparativo entre a bupivacaiacutena 05 e ropivacaiacutena 05 isobaacutericas na anestesia subaracnoacuteidea para cirurgia ortopeacutedica Rev Bras de Anestesiol 1999 49(3) 160-4

4 Delfino J Estudo comparativo entre a ropivacaiacutena 05 e 075 isobaacutericas na anestesia subaracnoacuteidea para cirurgia ortopeacutedica Rev Bras de Anestesiol 2000 50(3) 207-11

5 Kennedy M Reader A Beck M Weaver J Anesthetic efficacy of ropivacaine in maxillary anterior infiltration Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2001 91(4)406-12 PMid11312459 httpdxdoiorg101067moe2001114000

Rev Odontol UNESP 2014 43(4) 258-264 Avaliaccedilatildeo dos efeitos da ropivacaiacutena sobre a reatividade 261

em aneacuteis de aorta de porco com endoteacutelio intacto a ROPI natildeo produziu qualquer resposta vasoativa

Resultados contraacuterios aos observados no presente trabalho foram observados por Gherardini et al15 em arteacuterias mamaacuterias internas de humanos e por Nakamura et al16 em arteacuteria e veia femoral de catildees Em um experimento que aferiu os efeitos contraacuteteis da ROPI in vitro em leitos mesenteacutericos arteriolares obtidos a partir de 22 ratos machos adultos os pesquisadores

Figura 2 Curvas concentraccedilatildeo-resposta para a LIDO (10-12 ndash 3 times 10-5 M) e a ROPI (10-12 ndash 3 times 10-5 M) em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato com endoteacutelio funcional (n= 6) preacute-contraiacutedos com FEN (1 microM) Os valores estatildeo expressos como meacutedia plusmn EPM Os dados foram analisados por ANOVA de duas vias seguido pelo poacutes-teste de Bonferroni p lt005 e p lt 0001 vs LIDO

vs Emaacutex = 287 plusmn 13 n = 7) mas por outro lado o efeito vasorrelaxante apresentado pela ROPI foi significativamente menor quando comparado agravequele obtido em aneacuteis sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com fenilefrina (Emaacutex = 212 plusmn 51 n = 7 vs Emaacutex = 588 plusmn 59 n = 6)

Para avaliar uma possiacutevel participaccedilatildeo dos canais para K+ no efeito apresentado pela ROPI os aneacuteis sem endoteacutelio funcional foram preacute-incubados com 1 mM de TEA O TEA na concentraccedilatildeo utilizada neste estudo eacute capaz de inibir de forma natildeo seletiva os canais para K+14 Neste protocolo o efeito vasorrelaxante induzido pela ROPI foi significativamente reduzido quando comparado agravequele apresentado pela droga na ausecircncia deste inibidor (Emaacutex = 174 plusmn 37 n = 4 vs Emaacutex = 588 plusmn 59 n = 6) (Figura 5)

DISCUSSAtildeO

Diferentemente dos outros anesteacutesicos locais a ROPI parece apresentar um efeito vasoconstritor intriacutenseco em experimentaccedilotildees in vivo e in vitro15-19 Portanto este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos vasculares da ROPI atraveacutes de uma abordagem in vitro usando preparaccedilotildees de anel de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato e comparaacute-los com os efeitos da LIDO um anesteacutesico local padratildeo usado na Odontologia

No presente estudo foi mostrado que tanto a ROPI como a LIDO natildeo apresentaram nenhum efeito contraacutetil sobre o tocircnus basal de aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica de rato Estes resultados corroboram os achados de Lin et al20 que demonstraram que

Figura 3 Curvas concentraccedilatildeo-resposta em (a) para a LIDO (10ndash

12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 7) e em (b) para a ROPI (10ndash12 ndash 3 times 10ndash5 M n = 6) (b) em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com FEN (1 microM) Os valores estatildeo expressos como meacutedia plusmn EPM

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forma administrada sistecircmica ou local21 Enquanto em nosso estudo foram utilizados ratos nos estudos acima referidos foram utlizados camundongos catildees e seres humanos Aleacutem disso em todos os estudos em especial aquele em que se utilizou leito mesenteacuterico perfundido18 a menor concentraccedilatildeo de ROPI utilizada foi superior a 10ndash5 M ou seja 80 vezes maior do que a utilizada no presente estudo Estas discrepacircncias impedem uma comparaccedilatildeo mais precisa entre os achados Entretanto pode-se sugerir que a ROPI provavelmente apresente efeitos vasculares diversos a depender da espeacutecie animal estudada do leito vascular utilizado eou das concentraccedilotildees usadas

Como os anesteacutesicos testados natildeo apresentaram efeito vasoconstritor sobre o tocircnus basal novos experimentos foram realizados para caracterizar melhor os efeitos vasorrelaxantes da ROPI e da LIDO Portanto em preparaccedilotildees de aneacuteis preacute-contraiacutedos com 1 microM de fenilefrina um agonista do receptor α1-adreneacutergico tanto a LIDO como a ROPI foram capazes de induzir relaxamentos dependentes da concentraccedilatildeo em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato com endoteacutelio funcional Aleacutem disso o vasorrelaxamento obtido para a ROPI foi significativamente maior do que aquele obtido para a LIDO

Estudos corroboram estes resultados demonstrando que quando injetados em tecidos moles todos os anesteacutesicos locais apresentam um efeito vasorrelaxante17 Em estudo com aneacuteis de aorta de porco os resultados checaram que a ROPI produziu um relaxamento dependente da concentraccedilatildeo em aneacuteis preacute-contraiacutedos com fenilefrina e com endoteacutelio intacto20

Diante do resultado vasorrelaxante apresentado pelos anesteacutesicos estudados buscou-se avaliar entatildeo o mecanismo de accedilatildeo envolvido neste efeito Sabendo-se que o endoteacutelio eacute um importante regulador do tocircnus vascular por liberar fatores

Figura 5 Curvas concentraccedilatildeo-resposta para ROPI (10-12 ndash 3 times 10-5 M) em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com FEN (10 microM) antes e apoacutes a incubaccedilatildeo com TEA (1 mM) Os valores foram expressos como meacutedia plusmn epm Os dados foram analisados por ANOVA de duas vias seguido pelo poacutes-teste de Bonferroni p lt 005 p lt001 e p lt 0001 vs ROPI

Figura 4 Curvas concentraccedilatildeo-resposta para a LIDO (10-12 ndash 3 times 10-5 M) e para a ROPI (10-12 ndash 3 times 10-5 M) em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com FEN (1 microM) (n = 7) e com KCl 80 mM (n = 7) Os valores foram expressos como meacutedia plusmn epm Os dados foram analisados por ANOVA de duas vias seguido pelo poacutes-teste de Bonferroni p lt001 e p lt 0001 vs LIDO

concluiacuteram que a ROPI apresenta um efeito vasoconstritor em arteacuteria mesenteacuterica de camundongos18 Em outro estudo envolvendo anestesia bulbar a ROPI apresentou menor amplitude de pulso ocular associada agrave manutenccedilatildeo da pressatildeo de perfusatildeo ocular sugerindo tambeacutem um efeito vasoconstrictor19

A discrepacircncia entre os resultados descritos acima e os do presente estudo possivelmente pode ser explicada pelo fato de que respostas a drogas podem variar a depender do tecido alvo da especie animal testada das concentraccedilotildees usadas e da

Rev Odontol UNESP 2014 43(4) 258-264 Avaliaccedilatildeo dos efeitos da ropivacaiacutena sobre a reatividade 263

relaxantes derivados do endoteacutelio ndash principalmente o NO e produtos derivados da ativaccedilatildeo da ciclo-oxigenase (COX) tal como prostaciclinas ndash foram realizados experimentos com o objetivo de avaliar a participaccedilatildeo do endoteacutelio nesta resposta2223 Para tanto curvas para a LIDO e para a ROPI foram obtidas em aneacuteis de arteacuteria sem o endoteacutelio funcional Na Figura 3 as respostas vasorrelaxantes para a LIDO e a ROPI em aneacuteis sem o endoteacutelio funcional natildeo foram significativamente diferentes daquelas obtidas na condiccedilatildeo em que os aneacuteis estavam com endoteacutelio funcional Isto sugere que o endoteacutelio natildeo parece ser importante para a expressatildeo desta resposta e uma via de sinalizacatildeo muscular pode estar envolvida

Diferentemente do observado neste estudo os resultados obtidos por Lin et al20 em aorta de cobaios demonstraram que a ROPI induz um vasorrelaxamento dependente do endoteacutelio funcional Estas diferenccedilas podem ser explicadas pelo fato de os resultados de Lin et al20 terem sido obtidos em aorta de cobaios ou seja leito vascular e espeacutecie animal diferentes daqueles usados no presente estudo Estes achados reforccedilam ainda mais a afirmaccedilatildeo de que a ROPI pode apresentar efeitos vasculares diversos a depender da espeacutecie animal estudada ou do leito vascular utilizado2425

O envolvimento de vias de sinalizaccedilatildeo independente do endoteacutelio tambeacutem foi investigados como o bloqueio dos canais para Ca2+ ou a abertura dos canais para K+ Sabe-se que o aumento da concentraccedilatildeo externa de K+ induz contraccedilatildeo do muacutesculo liso atraveacutes da ativaccedilatildeo de canais de Ca2+ operados por voltagem (Cavs) e consequente liberaccedilatildeo de caacutelcio do retiacuteculo sarcoplasmaacutetico As contraccedilotildees induzidas por altas concentraccedilotildees de K+ satildeo inibidas por bloqueadores de canais para Ca2+ ou por remoccedilatildeo de Ca2+ do meio externo e satildeo desta forma totalmente dependentes do influxo de Ca2+ Este procedimento tambeacutem impede parcialmente o efluxo de K+ e atenua relaxamentos mediados por abertura de canais para K+26

Dessa forma para investigar um possiacutevel envolvimento dos canais para Ca2+ na resposta induzida pela LIDO e pela ROPI curvas para os anesteacutesicos estudados foram obtidas em aneacuteis preacute-contraiacutedos com soluccedilatildeo despolarizante de Tyrode (KCl 80 mM) Nestas preparaccedilotildees a LIDO foi capaz de induzir um vasorrelaxamento que natildeo foi diferente daquele obtido em aneacuteis sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com fenilefrina sugerindo que o vasorrelaxamento induzido pela ROPI possivelmente envolve os Cavs Poreacutem o relaxamento induzido pela ROPI foi siginificativamente menor do que aquele observado

em aneacuteis preacute-contaiacutedos com fenilefrina o que sugere uma possiacutevel participaccedilatildeo dos canais para K+ no efeito vasorrelaxante induzido por este anesteacutesico

A abertura de canais para K+ presente na membrana das ceacutelulas musculares vasculares provoca um aumento da saiacuteda de iacuteons K+ do meio intracelular para o meio extracelular por difusatildeo passiva o que causa a hiperpolarizaccedilatildeo da membrana celular Este estado de hiperpolarizaccedilatildeo conduz ao fechamento de canais de Ca2+ voltagem-dependentes e agrave consequente diminuiccedilatildeo da entrada de iacuteons Ca2+ para o interior da ceacutelula causando o relaxamento vascular26

Para reforccedilar a hipoacutetese de que o efeito vasorrelaxante da ROPI envolveria os canais para K+ na ceacutelula muscular lisa vascular foram realizados experimentos em que aneacuteis de arteacuteria preacute-contraiacutedos com FEN foram preacute-incubados com 1 mM de TEA um bloqueador natildeo seletivo de canais de potaacutessio14 Nestas preparaccedilotildees a resposta induzida pela ROPI foi significativamente atenuada reforccedilando que possivelmente haacute um envolvimento dos canais para K+ neste efeito

Em estudo utilizando aneacuteis de aorta de rato preacute-contraiacutedos com KCl (3 times 10ndash2 M) a ROPI foi capaz de induzir uma resposta bifaacutesica dependente da concentraccedilatildeo na qual foi observada contraccedilatildeo nas concentraccedilotildees mais baixas (3 times 10ndash5 a 3 times 10ndash4 M) seguida pelo abrandamento da contraccedilatildeo em concentraccedilotildees mais elevadas (10ndash3 a 3 times 10ndash3 M) Eacute difiacutecil de explicar a dependecircncia da concentraccedilatildeo do mecanismo subjacente aos efeitos bifaacutesicos de ROPI na contraccedilatildeo vascular especialmente o relaxamento em concentraccedilotildees mais elevadas27

CONCLUSAtildeO

Estes resultados demonstram que a ROPI produz efeito vasorrelaxante em arteacuteria mesenteacuterica superior de rato sendo este efeito independente da participaccedilatildeo do endoteacutelio Esse efeito parece ainda ser causado pela abertura de canais para K+ na ceacutelula muscular lisa vascular Eacute possiacutevel sugerir que a ROPI apresenta efeitos diversos sobre a reatividade vascular e que este efeito depende principalmente do leito arterial estudado

AGRADECIMENTOS

Agradecemos agrave Universidade Federal de Sergipe e ao Laboratoacuterio Cristaacutelia pela colaboraccedilatildeo pela base e pelo incentivo agrave pesquisa

REFEREcircNCIAS

1 Calatayud J Gonzaacuteles Agrave History of the development and evolution of local anesthesia since the coca leaf Anesthesiology 2003 98(6) 1503-8 httpdxdoiorg10109700000542-200306000-00031

2 Ramacciato JC Motta RHL Groppo FC Volpato MC Ranali J Anesteacutesicos locais Rev Assoc Paul Cir Dent 2007 61(4) 486-7

3 Delfino J Estudo comparativo entre a bupivacaiacutena 05 e ropivacaiacutena 05 isobaacutericas na anestesia subaracnoacuteidea para cirurgia ortopeacutedica Rev Bras de Anestesiol 1999 49(3) 160-4

4 Delfino J Estudo comparativo entre a ropivacaiacutena 05 e 075 isobaacutericas na anestesia subaracnoacuteidea para cirurgia ortopeacutedica Rev Bras de Anestesiol 2000 50(3) 207-11

5 Kennedy M Reader A Beck M Weaver J Anesthetic efficacy of ropivacaine in maxillary anterior infiltration Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2001 91(4)406-12 PMid11312459 httpdxdoiorg101067moe2001114000

262 Oliveira Britto Souza et al Rev Odontol UNESP 2014 43(4) 258-264

forma administrada sistecircmica ou local21 Enquanto em nosso estudo foram utilizados ratos nos estudos acima referidos foram utlizados camundongos catildees e seres humanos Aleacutem disso em todos os estudos em especial aquele em que se utilizou leito mesenteacuterico perfundido18 a menor concentraccedilatildeo de ROPI utilizada foi superior a 10ndash5 M ou seja 80 vezes maior do que a utilizada no presente estudo Estas discrepacircncias impedem uma comparaccedilatildeo mais precisa entre os achados Entretanto pode-se sugerir que a ROPI provavelmente apresente efeitos vasculares diversos a depender da espeacutecie animal estudada do leito vascular utilizado eou das concentraccedilotildees usadas

Como os anesteacutesicos testados natildeo apresentaram efeito vasoconstritor sobre o tocircnus basal novos experimentos foram realizados para caracterizar melhor os efeitos vasorrelaxantes da ROPI e da LIDO Portanto em preparaccedilotildees de aneacuteis preacute-contraiacutedos com 1 microM de fenilefrina um agonista do receptor α1-adreneacutergico tanto a LIDO como a ROPI foram capazes de induzir relaxamentos dependentes da concentraccedilatildeo em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato com endoteacutelio funcional Aleacutem disso o vasorrelaxamento obtido para a ROPI foi significativamente maior do que aquele obtido para a LIDO

Estudos corroboram estes resultados demonstrando que quando injetados em tecidos moles todos os anesteacutesicos locais apresentam um efeito vasorrelaxante17 Em estudo com aneacuteis de aorta de porco os resultados checaram que a ROPI produziu um relaxamento dependente da concentraccedilatildeo em aneacuteis preacute-contraiacutedos com fenilefrina e com endoteacutelio intacto20

Diante do resultado vasorrelaxante apresentado pelos anesteacutesicos estudados buscou-se avaliar entatildeo o mecanismo de accedilatildeo envolvido neste efeito Sabendo-se que o endoteacutelio eacute um importante regulador do tocircnus vascular por liberar fatores

Figura 5 Curvas concentraccedilatildeo-resposta para ROPI (10-12 ndash 3 times 10-5 M) em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com FEN (10 microM) antes e apoacutes a incubaccedilatildeo com TEA (1 mM) Os valores foram expressos como meacutedia plusmn epm Os dados foram analisados por ANOVA de duas vias seguido pelo poacutes-teste de Bonferroni p lt 005 p lt001 e p lt 0001 vs ROPI

Figura 4 Curvas concentraccedilatildeo-resposta para a LIDO (10-12 ndash 3 times 10-5 M) e para a ROPI (10-12 ndash 3 times 10-5 M) em aneacuteis de arteacuteria mesenteacuterica superior isolada de rato sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com FEN (1 microM) (n = 7) e com KCl 80 mM (n = 7) Os valores foram expressos como meacutedia plusmn epm Os dados foram analisados por ANOVA de duas vias seguido pelo poacutes-teste de Bonferroni p lt001 e p lt 0001 vs LIDO

concluiacuteram que a ROPI apresenta um efeito vasoconstritor em arteacuteria mesenteacuterica de camundongos18 Em outro estudo envolvendo anestesia bulbar a ROPI apresentou menor amplitude de pulso ocular associada agrave manutenccedilatildeo da pressatildeo de perfusatildeo ocular sugerindo tambeacutem um efeito vasoconstrictor19

A discrepacircncia entre os resultados descritos acima e os do presente estudo possivelmente pode ser explicada pelo fato de que respostas a drogas podem variar a depender do tecido alvo da especie animal testada das concentraccedilotildees usadas e da

Rev Odontol UNESP 2014 43(4) 258-264 Avaliaccedilatildeo dos efeitos da ropivacaiacutena sobre a reatividade 263

relaxantes derivados do endoteacutelio ndash principalmente o NO e produtos derivados da ativaccedilatildeo da ciclo-oxigenase (COX) tal como prostaciclinas ndash foram realizados experimentos com o objetivo de avaliar a participaccedilatildeo do endoteacutelio nesta resposta2223 Para tanto curvas para a LIDO e para a ROPI foram obtidas em aneacuteis de arteacuteria sem o endoteacutelio funcional Na Figura 3 as respostas vasorrelaxantes para a LIDO e a ROPI em aneacuteis sem o endoteacutelio funcional natildeo foram significativamente diferentes daquelas obtidas na condiccedilatildeo em que os aneacuteis estavam com endoteacutelio funcional Isto sugere que o endoteacutelio natildeo parece ser importante para a expressatildeo desta resposta e uma via de sinalizacatildeo muscular pode estar envolvida

Diferentemente do observado neste estudo os resultados obtidos por Lin et al20 em aorta de cobaios demonstraram que a ROPI induz um vasorrelaxamento dependente do endoteacutelio funcional Estas diferenccedilas podem ser explicadas pelo fato de os resultados de Lin et al20 terem sido obtidos em aorta de cobaios ou seja leito vascular e espeacutecie animal diferentes daqueles usados no presente estudo Estes achados reforccedilam ainda mais a afirmaccedilatildeo de que a ROPI pode apresentar efeitos vasculares diversos a depender da espeacutecie animal estudada ou do leito vascular utilizado2425

O envolvimento de vias de sinalizaccedilatildeo independente do endoteacutelio tambeacutem foi investigados como o bloqueio dos canais para Ca2+ ou a abertura dos canais para K+ Sabe-se que o aumento da concentraccedilatildeo externa de K+ induz contraccedilatildeo do muacutesculo liso atraveacutes da ativaccedilatildeo de canais de Ca2+ operados por voltagem (Cavs) e consequente liberaccedilatildeo de caacutelcio do retiacuteculo sarcoplasmaacutetico As contraccedilotildees induzidas por altas concentraccedilotildees de K+ satildeo inibidas por bloqueadores de canais para Ca2+ ou por remoccedilatildeo de Ca2+ do meio externo e satildeo desta forma totalmente dependentes do influxo de Ca2+ Este procedimento tambeacutem impede parcialmente o efluxo de K+ e atenua relaxamentos mediados por abertura de canais para K+26

Dessa forma para investigar um possiacutevel envolvimento dos canais para Ca2+ na resposta induzida pela LIDO e pela ROPI curvas para os anesteacutesicos estudados foram obtidas em aneacuteis preacute-contraiacutedos com soluccedilatildeo despolarizante de Tyrode (KCl 80 mM) Nestas preparaccedilotildees a LIDO foi capaz de induzir um vasorrelaxamento que natildeo foi diferente daquele obtido em aneacuteis sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com fenilefrina sugerindo que o vasorrelaxamento induzido pela ROPI possivelmente envolve os Cavs Poreacutem o relaxamento induzido pela ROPI foi siginificativamente menor do que aquele observado

em aneacuteis preacute-contaiacutedos com fenilefrina o que sugere uma possiacutevel participaccedilatildeo dos canais para K+ no efeito vasorrelaxante induzido por este anesteacutesico

A abertura de canais para K+ presente na membrana das ceacutelulas musculares vasculares provoca um aumento da saiacuteda de iacuteons K+ do meio intracelular para o meio extracelular por difusatildeo passiva o que causa a hiperpolarizaccedilatildeo da membrana celular Este estado de hiperpolarizaccedilatildeo conduz ao fechamento de canais de Ca2+ voltagem-dependentes e agrave consequente diminuiccedilatildeo da entrada de iacuteons Ca2+ para o interior da ceacutelula causando o relaxamento vascular26

Para reforccedilar a hipoacutetese de que o efeito vasorrelaxante da ROPI envolveria os canais para K+ na ceacutelula muscular lisa vascular foram realizados experimentos em que aneacuteis de arteacuteria preacute-contraiacutedos com FEN foram preacute-incubados com 1 mM de TEA um bloqueador natildeo seletivo de canais de potaacutessio14 Nestas preparaccedilotildees a resposta induzida pela ROPI foi significativamente atenuada reforccedilando que possivelmente haacute um envolvimento dos canais para K+ neste efeito

Em estudo utilizando aneacuteis de aorta de rato preacute-contraiacutedos com KCl (3 times 10ndash2 M) a ROPI foi capaz de induzir uma resposta bifaacutesica dependente da concentraccedilatildeo na qual foi observada contraccedilatildeo nas concentraccedilotildees mais baixas (3 times 10ndash5 a 3 times 10ndash4 M) seguida pelo abrandamento da contraccedilatildeo em concentraccedilotildees mais elevadas (10ndash3 a 3 times 10ndash3 M) Eacute difiacutecil de explicar a dependecircncia da concentraccedilatildeo do mecanismo subjacente aos efeitos bifaacutesicos de ROPI na contraccedilatildeo vascular especialmente o relaxamento em concentraccedilotildees mais elevadas27

CONCLUSAtildeO

Estes resultados demonstram que a ROPI produz efeito vasorrelaxante em arteacuteria mesenteacuterica superior de rato sendo este efeito independente da participaccedilatildeo do endoteacutelio Esse efeito parece ainda ser causado pela abertura de canais para K+ na ceacutelula muscular lisa vascular Eacute possiacutevel sugerir que a ROPI apresenta efeitos diversos sobre a reatividade vascular e que este efeito depende principalmente do leito arterial estudado

AGRADECIMENTOS

Agradecemos agrave Universidade Federal de Sergipe e ao Laboratoacuterio Cristaacutelia pela colaboraccedilatildeo pela base e pelo incentivo agrave pesquisa

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1 Calatayud J Gonzaacuteles Agrave History of the development and evolution of local anesthesia since the coca leaf Anesthesiology 2003 98(6) 1503-8 httpdxdoiorg10109700000542-200306000-00031

2 Ramacciato JC Motta RHL Groppo FC Volpato MC Ranali J Anesteacutesicos locais Rev Assoc Paul Cir Dent 2007 61(4) 486-7

3 Delfino J Estudo comparativo entre a bupivacaiacutena 05 e ropivacaiacutena 05 isobaacutericas na anestesia subaracnoacuteidea para cirurgia ortopeacutedica Rev Bras de Anestesiol 1999 49(3) 160-4

4 Delfino J Estudo comparativo entre a ropivacaiacutena 05 e 075 isobaacutericas na anestesia subaracnoacuteidea para cirurgia ortopeacutedica Rev Bras de Anestesiol 2000 50(3) 207-11

5 Kennedy M Reader A Beck M Weaver J Anesthetic efficacy of ropivacaine in maxillary anterior infiltration Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2001 91(4)406-12 PMid11312459 httpdxdoiorg101067moe2001114000

Rev Odontol UNESP 2014 43(4) 258-264 Avaliaccedilatildeo dos efeitos da ropivacaiacutena sobre a reatividade 263

relaxantes derivados do endoteacutelio ndash principalmente o NO e produtos derivados da ativaccedilatildeo da ciclo-oxigenase (COX) tal como prostaciclinas ndash foram realizados experimentos com o objetivo de avaliar a participaccedilatildeo do endoteacutelio nesta resposta2223 Para tanto curvas para a LIDO e para a ROPI foram obtidas em aneacuteis de arteacuteria sem o endoteacutelio funcional Na Figura 3 as respostas vasorrelaxantes para a LIDO e a ROPI em aneacuteis sem o endoteacutelio funcional natildeo foram significativamente diferentes daquelas obtidas na condiccedilatildeo em que os aneacuteis estavam com endoteacutelio funcional Isto sugere que o endoteacutelio natildeo parece ser importante para a expressatildeo desta resposta e uma via de sinalizacatildeo muscular pode estar envolvida

Diferentemente do observado neste estudo os resultados obtidos por Lin et al20 em aorta de cobaios demonstraram que a ROPI induz um vasorrelaxamento dependente do endoteacutelio funcional Estas diferenccedilas podem ser explicadas pelo fato de os resultados de Lin et al20 terem sido obtidos em aorta de cobaios ou seja leito vascular e espeacutecie animal diferentes daqueles usados no presente estudo Estes achados reforccedilam ainda mais a afirmaccedilatildeo de que a ROPI pode apresentar efeitos vasculares diversos a depender da espeacutecie animal estudada ou do leito vascular utilizado2425

O envolvimento de vias de sinalizaccedilatildeo independente do endoteacutelio tambeacutem foi investigados como o bloqueio dos canais para Ca2+ ou a abertura dos canais para K+ Sabe-se que o aumento da concentraccedilatildeo externa de K+ induz contraccedilatildeo do muacutesculo liso atraveacutes da ativaccedilatildeo de canais de Ca2+ operados por voltagem (Cavs) e consequente liberaccedilatildeo de caacutelcio do retiacuteculo sarcoplasmaacutetico As contraccedilotildees induzidas por altas concentraccedilotildees de K+ satildeo inibidas por bloqueadores de canais para Ca2+ ou por remoccedilatildeo de Ca2+ do meio externo e satildeo desta forma totalmente dependentes do influxo de Ca2+ Este procedimento tambeacutem impede parcialmente o efluxo de K+ e atenua relaxamentos mediados por abertura de canais para K+26

Dessa forma para investigar um possiacutevel envolvimento dos canais para Ca2+ na resposta induzida pela LIDO e pela ROPI curvas para os anesteacutesicos estudados foram obtidas em aneacuteis preacute-contraiacutedos com soluccedilatildeo despolarizante de Tyrode (KCl 80 mM) Nestas preparaccedilotildees a LIDO foi capaz de induzir um vasorrelaxamento que natildeo foi diferente daquele obtido em aneacuteis sem endoteacutelio funcional preacute-contraiacutedos com fenilefrina sugerindo que o vasorrelaxamento induzido pela ROPI possivelmente envolve os Cavs Poreacutem o relaxamento induzido pela ROPI foi siginificativamente menor do que aquele observado

em aneacuteis preacute-contaiacutedos com fenilefrina o que sugere uma possiacutevel participaccedilatildeo dos canais para K+ no efeito vasorrelaxante induzido por este anesteacutesico

A abertura de canais para K+ presente na membrana das ceacutelulas musculares vasculares provoca um aumento da saiacuteda de iacuteons K+ do meio intracelular para o meio extracelular por difusatildeo passiva o que causa a hiperpolarizaccedilatildeo da membrana celular Este estado de hiperpolarizaccedilatildeo conduz ao fechamento de canais de Ca2+ voltagem-dependentes e agrave consequente diminuiccedilatildeo da entrada de iacuteons Ca2+ para o interior da ceacutelula causando o relaxamento vascular26

Para reforccedilar a hipoacutetese de que o efeito vasorrelaxante da ROPI envolveria os canais para K+ na ceacutelula muscular lisa vascular foram realizados experimentos em que aneacuteis de arteacuteria preacute-contraiacutedos com FEN foram preacute-incubados com 1 mM de TEA um bloqueador natildeo seletivo de canais de potaacutessio14 Nestas preparaccedilotildees a resposta induzida pela ROPI foi significativamente atenuada reforccedilando que possivelmente haacute um envolvimento dos canais para K+ neste efeito

Em estudo utilizando aneacuteis de aorta de rato preacute-contraiacutedos com KCl (3 times 10ndash2 M) a ROPI foi capaz de induzir uma resposta bifaacutesica dependente da concentraccedilatildeo na qual foi observada contraccedilatildeo nas concentraccedilotildees mais baixas (3 times 10ndash5 a 3 times 10ndash4 M) seguida pelo abrandamento da contraccedilatildeo em concentraccedilotildees mais elevadas (10ndash3 a 3 times 10ndash3 M) Eacute difiacutecil de explicar a dependecircncia da concentraccedilatildeo do mecanismo subjacente aos efeitos bifaacutesicos de ROPI na contraccedilatildeo vascular especialmente o relaxamento em concentraccedilotildees mais elevadas27

CONCLUSAtildeO

Estes resultados demonstram que a ROPI produz efeito vasorrelaxante em arteacuteria mesenteacuterica superior de rato sendo este efeito independente da participaccedilatildeo do endoteacutelio Esse efeito parece ainda ser causado pela abertura de canais para K+ na ceacutelula muscular lisa vascular Eacute possiacutevel sugerir que a ROPI apresenta efeitos diversos sobre a reatividade vascular e que este efeito depende principalmente do leito arterial estudado

AGRADECIMENTOS

Agradecemos agrave Universidade Federal de Sergipe e ao Laboratoacuterio Cristaacutelia pela colaboraccedilatildeo pela base e pelo incentivo agrave pesquisa

REFEREcircNCIAS

1 Calatayud J Gonzaacuteles Agrave History of the development and evolution of local anesthesia since the coca leaf Anesthesiology 2003 98(6) 1503-8 httpdxdoiorg10109700000542-200306000-00031

2 Ramacciato JC Motta RHL Groppo FC Volpato MC Ranali J Anesteacutesicos locais Rev Assoc Paul Cir Dent 2007 61(4) 486-7

3 Delfino J Estudo comparativo entre a bupivacaiacutena 05 e ropivacaiacutena 05 isobaacutericas na anestesia subaracnoacuteidea para cirurgia ortopeacutedica Rev Bras de Anestesiol 1999 49(3) 160-4

4 Delfino J Estudo comparativo entre a ropivacaiacutena 05 e 075 isobaacutericas na anestesia subaracnoacuteidea para cirurgia ortopeacutedica Rev Bras de Anestesiol 2000 50(3) 207-11

5 Kennedy M Reader A Beck M Weaver J Anesthetic efficacy of ropivacaine in maxillary anterior infiltration Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2001 91(4)406-12 PMid11312459 httpdxdoiorg101067moe2001114000

264 Oliveira Britto Souza et al Rev Odontol UNESP 2014 43(4) 258-264

6 Ernberg M Kopp S Ropivacaine for dental anesthesia a dose-finding study J Oral Maxillofac Surg 2002 60(9) 1004-10 httpdxdoiorg101053joms200234409

7 Axelsson S Isacsson G The efficacy of ropivacaine as a dental local anaesthetic Swed Dent J 2004 28(2) 85-91 PMid15272513

8 El-Sharrawy E Yagiela JA Anesthetic efficacy of different ropivacaine concentrations for inferior alveolar nerve block Anesth Prog 2006 53(1) 3-7 httpdxdoiorg1023440003-3006(2006)53[3AEODRC]20CO2

9 Ramos G Pereira E Simonetti MPB Lemos Neto SP Mendonccedila M Neto JRP Alcalinizaccedilatildeo da ropivacaiacutena 075 para bloqueio peridural Rev Bras de Anestesiol 2000 50(6) 442-9

10 Kopacz DJ Carpenter RL Mackey DC Effect of ropivacaine on cutaneous capillary blood flow in pigs Anesthesiology 1989 71(1) 69-74 httpdxdoiorg10109700000542-198907000-00013

11 Iida H Ohata H Iida M Nagase K Uchida M Dohi S The differential effects of stereoisomers of ropivacaine and bupivacaine on cerebral pial arterioles in dogs Anesth Analg 2001 93(6) 1552-6 httpdxdoiorg10109700000539-200112000-00046

12 Bouaziz H Iohom G Estebe JP Campana WM Myers RR Effects of levobupivacaine and ropivacaine on rat sciatic nerve blood flow Br J Anaesth 2005 Nov 95(5) 696-700 PMid16183680 httpdxdoiorg101093bjaaei242

13 Malamed SF Local anesthesia J Calif Dent Assoc 1998 Sep 26(9) 657-60 PMid9879233

14 Cook NS Effect of some potassium channel blockers on contractile responses of the rabbit aorta J Cardiovasc Pharmacol 1989 13(2) 299-306 httpdxdoiorg10109700005344-198902000-00019

15 Gherardini G Samuelson U Aberg JJB Sjostrand N Comparison of vascular effects of ropivacaine and lidocaine on isolated rings of human arteries Acta Anaesthesiol Scand 1995 Aug 39(6) 765-8 PMid7484031 httpdxdoiorg101111j1399-65761995tb04167x

16 Nakamura K Toda H Kakuyama M Nishiwada M Yamamoto M Hatano Y et al Direct vascular effect of ropivacaine in femoral artery and vein of the dog Acta Anaesthesiol Scand 1993 Apr 37(3) 269-73 PMid8517104 httpdxdoiorg101111j1399-65761993tb03714x

17 Simonetti MPB Ropivacaiacutena estado atual e perspectivas futuras Rev Bras Anestesiol 1995 45(2) 131-40

18 Timponi CF Oliveira NE Arruda RM Meyrelles SS Vasquez EC Effects of the local anaesthetic ropivacaine on vascular reactivity in the mouse perfused mesenteric arteries Basic Clin Pharmacol Toxicol 2006 May 98(5) 518-20 PMid16635112 httpdxdoiorg101111j1742-78432006pto_397x

19 Govecircia CS Magalhatildees E Ropivacaine in peribulbar anesthesia vasoconstrictive properties Rev Bras Anestesiologia 2010 60(5) 495-512 httpdxdoiorg101016S0034-7094(10)70061-1

20 Lin PL Huan HH Fan SZ Tsai MC Lin CH Huang CH Effect of ropivacaine on endothelium-dependent phenylephrine-induced contraction in guinea pig aorta Acta Anaesthesiol Scand 2007 Nov 51(10) 1388-93 PMid17944643 httpdxdoiorg101111j1399-6576200701443x

21 Herlihy JT Berardo PV Effect of preload on rat aortic smooth muscle sensitivity to vasoactive agents Pharmacology 1986 33(1) 39-45 httpdxdoiorg101159000138198

22 Moncada S Palmer RMJ Higgs EA Nitric oxide physiology pathophysiology and pharmacology Pharmacol Rev 1991 43(2) 109-42 PMid1852778

23 Furchgott RF ZawadzkI JV The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine Nature 1980 Nov 288(5789) 373-6 PMid6253831 httpdxdoiorg101038288373a0

24 Adegunloye BI Sofola OA Differential responses of rat aorta and mesenteric artery to norepinephrine and serotonin in vitro Pharmacology 1997 Jul 55(1) 25-31 PMid9309798 httpdxdoiorg101159000139509

25 Low AM Kotecha N Neild TO Kwan CY Daniel EE Relative contributions of extracellular Ca2+ and Ca2+ stores to smooth muscle contraction in arteries and arterioles of rat guinea-pig dog and rabbit Clin Exp Pharmacol Physiol 1996 Apr 23(4) 310-6 PMid8717067 httpdxdoiorg101111j1440-16811996tb02829x

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27 Tokinaga Y Ogawa K Yu J Kuriyam T Minonishi T Hatano Y Mechanism of the ropivacaine-induced increase in intracellular Ca2+ concentration in rat aortic smooth muscle Acta Anaesthesiol Scand 2007 Oct 51(9) 1155-60 PMid17714580

CONFLITOS DE INTERESSE

Os autores declaram natildeo haver conflitos de interesse

AUTOR PARA CORRESPONDEcircNCIA

Allan Carlos Arauacutejo de Oliveira Departamento de Odontologia Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas e da Sauacutede UFS ndash Universidade Federal de Sergipe Rua Claudio Batista sn Santoacuterio 49060-108 Aracaju - SE Brasil e-mail allan_taperahotmailcom

Recebido Janeiro 14 2014 Aprovado Abril 27 2014