aula 10 eletroforese

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Eletroforese

EletroforeseDocente: Dyego Miranda

1Mtodos Aps:ExtraoQuantficaoPCR

Visualizao do resultado da amplificao pelo procedimento de Eletroforese2Princpio Eletroforese Consiste na migrao e separao de partculas em uma matriz (suporte), submetidas a uma diferena de potencial eltrico;

Os suportes podem ser:Papel de filtroAcetato de celuloseGel de agaroseGel de poliacrilamida

A migrao das partculas depende do seu tamanho e carga, alm da DDP a que foram submetidas

3 Eletroforese em gelEletroforese em gel eficiente em promover a separao de partculas de acordo com o seu tamanhoGel de poliacrilamidaUsado em separao de protenas ou partculas muito pequenas

Gel de agaroseUtilizado para separao de partculas relativamente pequenas e partculas grandes

O DNA contm carga negativa, portanto migra para o plo positivo

Quanto mais concentrado o gel, mais fechada sua malha, portanto a partcula ter mais dificuldade em atravess-la

4 Princpio-+A amostra inserida nos pocinhosUma corrente eltrica aplicadaPartculas de menor tamanho ou carga mais negativa corre primeiro5 PrincpioQuando submetidas a luz UV o gel apresenta um padro de bandas. Cada banda um fragmento de DNA de determinado tamanho.

O ladder formado por diferentes tamanhos de DNA e serve como marcador de peso molecular6 Gel de agaroseA agarose, um polissacardeo extrado de uma alga marinha vermelha;Dissolve em gua fervente e ento gelifica quando esfria;Mais utilizada para separao de fragmentos longos de DNA

7 Gel de agarose utilizado em uma cuba horizontal ligada a uma fonteUma soluo tampo adicionada cuba, onde ir manter estveis as condies de pH do meio

8 IntercalantesBrometo de etdioAgente intercalante do DNACancergeno!Composto fluorescente luz UVNitrato de prataGel Red

9Visualizao do gel de agarose em luz UV

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11 Gel de poliacrilamidaApoliacrilamidatambm pode ser utilizada com gel para a eletroforese. A poliacrilamida uma mistura de doispolmeros,acrilamidae bisacrilamida;

Utilizada para observao de fragmentos menores (poucos pares de bases ou protenas);

Melhor resoluo do que a eletroforese em gel de agarose;

Desvantagem: Neurotxica

12 Gel de poliacrilamida realizada em uma cuba de eletroforese vertical.

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