aula 10 eletroforese

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Eletrofore se Docente: Dyego Miranda

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Page 1: Aula 10   eletroforese

EletroforeseDocente: Dyego Miranda

Page 2: Aula 10   eletroforese

Métodos Após:

ExtraçãoQuantficaçãoPCR

Visualização do resultado da amplificação pelo procedimento de Eletroforese

Page 3: Aula 10   eletroforese

Princípio Eletroforese Consiste na migração e separação de partículas em

uma matriz (suporte), submetidas a uma diferença de potencial elétrico;

Os suportes podem ser:Papel de filtroAcetato de celuloseGel de agaroseGel de poliacrilamida

A migração das partículas depende do seu tamanho e carga, além da DDP a que foram submetidas

Page 4: Aula 10   eletroforese

Eletroforese em gelEletroforese em gel é eficiente em promover a separação de

partículas de acordo com o seu tamanhoGel de poliacrilamida

Usado em separação de proteínas ou partículas muito pequenas

Gel de agarose Utilizado para separação de partículas relativamente pequenas e partículas

grandes

O DNA contém carga negativa, portanto migra para o pólo positivo

Quanto mais concentrado o gel, mais “fechada’’ é sua malha, portanto a partícula terá mais dificuldade em atravessá-la

Page 5: Aula 10   eletroforese

Princípio

-

+A amostra é inserida nos “pocinhos”

Uma corrente elétrica é aplicada

Partículas de menor tamanho ou carga mais negativa corre primeiro

Page 6: Aula 10   eletroforese

PrincípioQuando submetidas a luz UV o gel apresenta um padrão

de bandas. Cada banda é um fragmento de DNA de determinado tamanho.

O ladder é formado por diferentes tamanhos de DNA e serve como marcador de peso molecular

Page 7: Aula 10   eletroforese

Gel de agaroseA agarose, um polissacarídeo extraído de uma alga marinha

vermelha;Dissolve em água fervente e então gelifica quando esfria;Mais utilizada para separação de fragmentos longos de DNA

Page 8: Aula 10   eletroforese

Gel de agaroseÉ utilizado em uma cuba horizontal ligada a uma fonteUma solução tampão é adicionada à cuba, onde irá manter

estáveis as condições de pH do meio

Page 9: Aula 10   eletroforese

IntercalantesBrometo de etídio

Agente intercalante do DNA Cancerígeno!

Composto fluorescente à luz UVNitrato de prataGel Red

Page 10: Aula 10   eletroforese

Visualização do gel de agarose em luz UV

Page 11: Aula 10   eletroforese
Page 12: Aula 10   eletroforese

Gel de poliacrilamidaA poliacrilamida também pode ser utilizada com gel para a

eletroforese. A poliacrilamida é uma mistura de dois polímeros, acrilamida e bisacrilamida;

Utilizada para observação de fragmentos menores (poucos pares de bases ou proteínas);

Melhor resolução do que a eletroforese em gel de agarose;

Desvantagem: Neurotóxica

Page 13: Aula 10   eletroforese

Gel de poliacrilamidaÉ realizada em uma cuba de eletroforese vertical.