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Apresentação LIM 60
Descrição-LIM 60
Salas 3205-3217 da FMUSP, algumas compartilhadas com o LIM 37
-Adota boas práticas de laboratório (BPL)
-LIM do grupo A
- Infraestrutura: Citometria de Fluxo (3 citômetros, de 8 a 18 cores)
-Biologia Molecular ( PCR, PCR em tempo real)
-Proteômica (identificação de alérgenos)
-Testes funcionais de alergia e imunodeficiências
-Experimentação animal
Líderes
CRISTINA M. KOKRON
EDECIO CUNHA NETO
ÉSPER KALLÁS
FÁBIO MORATO CASTRO
PEDRO GIAVINA-BIANCHI
Linhas de pesquisa
IMUNODEFICIÊNCIAS PRIMÁRIAS
HIV/AIDS
DENGUE
ALERGIA
Linha de pesquisa: Imunodeficiências primárias
MAIOR SERVIÇO DE IMUNODEFICIÊNCIAS PRIMÁRIAS EM ADULTO NO BRASIL
� ~ 420 pacientes em acompanhamento
� 370 pacientes com deficiência de anticorpos
� 121 pacientes com Imunodeficiência Comum Variável
Linha de pesquisa
Imunodeficiênciacomum variável
PLoS One, 2013
Blood, 2013
Linha de pesquisa
HIV e AIDS:Vacina HIV
Blood, 2013
7
B)
AAG CTT ACC ATG GAG GAG CTG AGA AGC CTG TAC AAC ACC GTG GCCACC CTG TAC TGC GTG CAC GGC CCC GGC CCC GGC AGC CCC GAG GTGATC CCC ATG TTC AGC GCC CTG AGC GAG GGC CCC GGC CCC GGC AAGAGA TGG ATC ATC CTG GGC CTG AAC AAG ATC GTG AGA ATG TAC AGCCCC ACC AGC ATC GGC CCC GGC CCC GGC GAC AAG GAG CTG TAC CCCCTG GCC AGC CTG AGA AGC CTG TTC GGC GGC CCC GGC CCC GGC CAGAGA CCC CTG GTG ACC ATC AAG ATC GGC GGC CAG CTG AAG GAG GGCCCC GGC CCC GGC ACC CCC GTG AAC ATC ATC GGC AGA AAC CTG CTGACC CAG ATC GGC GGC CCC GGC CCC GGC GGC AAG ATC ATC CTG GTGGCC GTG CAC GTG GCC AGC GGC TAC ATC GGC CCC GGC CCC GGC AGAGAC CTG CTG CTG ATC GTG ACC AGA ATC GTG GAG CTG CTG GGC AGAGGC CCC GGC CCC GGC ACC ATG CTG CTG GGC ATG CTG ATG ATC TGCAGC GCC GCC GGC CCC GGC CCC GGC GCC CTG TTC TAC AAG CTG GACGTG GTG CCC ATC GAC GGC CCC GGC CCC GGC AAC ACC AGC TAC AGACTG ATC AGC TGC AAC ACC AGC GTG ATC GGC CCC GGC CCC GGC AGCGAG CTG TAC CTG TAC AAG GTG GTG AAG ATC GAG CCC CTG GGC GTGGCC CCC GGC CCC GGC CCC GGC GAG CTG CTG AAG ACC GTG AGA CTGATC AAG TTC CTG TAC CAG AGC AAC CCC GGC CCC GGC CCC GGC GAGGCC ATC ATC AGA ATC CTG CAG CAG CTG CTG TTC ATC CAC TTC GGCCCC GGC CCC GGC CAG CAG CTG CTG TTC ATC CAC TTC AGA ATC GGCTGC AGA CAC AGC AGA ATC GGC GGC CCC GGC CCC GGC AGC CTG CAGTAC CTG GCC CTG GTG GCC CTG GTG GCC CCC AAG AAG GGC CCC GGCCCC GGC GTG CTG GCC ATC GTG GCC CTG GTG GTG GCC ACC ATC ATCGCC ATC GGC CCC GGC CCC GGC GTG CTG GAG TGG AGA TTC GAC AGCAGA CTG GCC TTC CAC CAC GTGTAG CTC GAG
AAG CTT –Hind III siteACC ATG –Kosak sequenceTAG – Stop CódonCTC GAG – Xho I siteGGC CCC GGC CCC GGC- spacers (GPGPG)
Insertion into
pVAX1 plasmid
Codon
optimization
Ribeiro, Cunha-Neto et al. 2010
Linha de pesquisa
HIV e AIDS:Vacina HIV
8Ribeiro, Cunha-Neto et al. 2010
antigen-specific T cell immune responses (pooled HIV-1 synthetic peptides)
100ug DNA/dose, IM: HIVBr18 or pVAX1
0 14 28 42
1st 2nd 3rd
days
BALB/C mice
Cardiotoxin
Linha de pesquisa
HIV e AIDS:Vacina HIV
9Ribeiro, Cunha-Neto et al. 2010
0 102 103 104 105
<FITC-A>: CFSE
0
102
103
104
105
<A
PC
-A>
: CD
8
0.75
0.75%
0 102 103 104 105
<FITC-A>: CFSE
0
102
103
104
105
<P
erC
P-C
y5-5
-A>
: C
D4 12.7
12.7%
0 102 103 104 105
<FITC-A>: CFSE
0
102
103
104
105
<P
erC
P-C
y5-5
-A>
: CD
4 0.97
0.97%
CD
3+C
D4+
Pooled HIV peptides
No peptide
CFSE
CD
3+C
D8+
0 102 103 104 105
<FITC-A>: CFSE
0
102
103
104
105
<A
PC
-A>
: C
D8
11.6
11.6%
HIVBr18
050
100150200250300350400450500
BALB/c HLA-DR2 HLA-DR4 HLA-DQ6 HLA-DQ8
spot
s/10
6cé
lula
s
Resposta a peptídeos combinados do HIV
Ribeiro, e cols. 2010 10
Linha de pesquisa
HIV e AIDS:Vacina HIV
Colônia de macacos Rhesus do Instituto Butantan
Linha de pesquisa
HIV e AIDS:Vacina HIV, macacos Rhesus
Não publicado
Rh
#33
Rh
#41
Rh
#43
Rh
#45
DR
2
DR
4
DQ
6
DQ
8
BA
LB/c
0
1000
2000
3000
4000
SFU
/ 106
cells
IFN-g ELISPOT assay
Linha de pesquisa
HIV e AIDS:marcadores de proteção ao desenvolvimentoda doença
Não publicado
New Engl J Med, 2010 Sci Transl Med, 2012
Lancet Infect Dis, 2014
Linha de pesquisa
HIV e AIDS: PrEP
Linha de pesquisa
HIV e AIDS: PrEPContinuidade: projeto “ponte” para emprego em saúde pública
Implementação da profilaxia Pré-Exposição (PrEP) ao HIV: Um Projeto Demonstrativo
Financiado pela Fiocruz, Ministério da Saúde e FAPESP
Fiocruz, CRT-DST/Aids, FMUSP
500 voluntários
Homens gays, travestis, mulheres transexuais
Linha de pesquisaDengue: Patogênese
Linha de pesquisaDengue: Marcadores de progressão
Linha de pesquisaDengue: Desenvolvimento de vacinasDEN-01-IB
Ensaio Clínico Fase II Escalonado, Randomizado, Duplo-cego e Controlado para a Avaliação da Segurança e da Imunogenicidade da Formulação Liofilizada da Vacina Dengue 1,2,3,4 (atenuada) em Adultos Saudáveis
Linha de pesquisaDengue: Desenvolvimento de vacinas
Etapa A
6 mo
5 anos
Soronegativos, por PRNT
50 voluntários: 20 vacina líquida, 20 vacina liofilizada, 10 placebos
Coleta intensiva de amostras
Etapa B 5 anos
Soropositivos, por PRNT
40 voluntários: 30 vacina liofilizada, 10 placebos
Coleta intensiva de amostras
5 anos
Qualquer sorologia
210 voluntários: 140 vacina liofilizada, 70 placebos
50 volunt.,Todos vacinados
250 volunt.,40 vacinados
210 em
recrutamento
00
AINEs Dipirona
Gravidade da reação
Agente etiológicoAgente etiológico
ATBs
Aun MV, et al. J Allergy Clin Immunol Pract 2014;2:414-20
Linha de pesquisa: Alergia
http://www.jwatch.org/na35612/2014/09/16/nsaids-are-major-cause-anaphylaxis-related-
emergency
Linha de pesquisa: Alergia
IDENTIFICAÇÃO DE NOVOS ALÉRGENOS EM FRUTAS TROPICAIS E VENENOS DE VESPAS
PARA AUXÍLIO NO DIAGNÓSTICO E FUTURA OTIMIZAÇÃO DO TRATAMENTO
Linha de pesquisa: Alergia
Identificação de proteínas alergênicas com análise proteômica
gel nitrocelulose Western Blotting
Transferência
Soro de paciente e conjugado anti-IgE
Linha de pesquisa: Alergia
24
Identificação das Proteínas
Espectrometria de Massas ⇒ Maldi - ToF
“Peptide Mass Fingerprint” Banco de Dados
Identificação da Proteína
P17540-00-00-00; Score: 106
(KCRS_HUMAN) Creatine kinase,
sarcomeric mitochondrial precursor
PM: 47490 pI: 8.46
Espectrometria de Massas ⇒ Maldi-ToF – ToF (Sequenciamento direto)
Linha de pesquisa: Alergia
Produção CientíficaLIM 60/Jan-Out2014
32 ARTIGOS
Programa de Pós-Graduação em
Alergia e ImunopatologiaFACULDADE DE MEDICINA CONCEITO 6 PELA CAPES
UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
Website:
http://www.alergiaeimunopatologia.com.br/
Website:http://www.alergiaeimunopatologia.com.br/