aplicaÇÃo dos estudos de bioequivalÊncia aos fÁrmacos de...

i

NEY CARTER DO CARMO BORGES

APLICAÇÃO DOS ESTUDOS DE

BIOEQUIVALÊNCIA AOS FÁRMACOS DE

AÇÃO CARDIOVASCULAR

CAMPINAS 2005

iii

NEY CARTER DO CARMO BORGES

APLICAÇÃO DOS ESTUDOS DE

BIOEQUIVALÊNCIA AOS FÁRMACOS DE

AÇÃO CARDIOVASCULAR Tese de doutorado apresentada à Pós-Graduação da Faculdade de Ciências Médicas da Universidade Estadual de Campinas para a obtenção do título de Doutor em Farmacologia.

Orientador: Prof. Dr. Glberto de Nucci

CAMPINAS 2005

iv

FICHA CATALOGRÁFICA ELABORADA PELA BIBLIOTECA DA FACULDADE DE CIÊNCIAS MÉDICAS DA UNICAMP

Bibliotecário: Sandra Lúcia Pereira – CRB-8ª / 6044

Borges, Ney Carter do Carmo B644a Aplicação de estudos de bioequivalência às drogas de ação

cardiovascular. / Ney Carter do Carmo Borges. Campinas, SP : [s.n.], 2005.

Orientador : Gilberto de Nucci Tese ( Doutorado ) Universidade Estadual de Campinas. Faculdade

de Ciências Médicas. 1. Medicamentos. 2. Plasma. 3. Medicamentos genéricos-

farmacocinética. 4. Espectometria de massa. I. Nucci, Gilberto de. II. Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas. III. Título.

(slp/fcm)

v

UNICAMP

Banca Examinadora da Tese de Doutorado

Orientador:

Prof. Dr. Gilberto de Nucci Membros:

Prof. Dr. Gilberto de Nucci

Prof. Dr. Eduardo Arantes Nogueira

Prof. Dr. José Roberto Maiello

Prof. Dr. Francisco Hideo Aoki

Prof. Dr. José Francisco Kerr Saraiva Programa de Pós-Graduação em Farmacologia da Faculdade de Ciências Médicas da Universidade Estadual de Campinas.

Data: 14/10/2005

vii

AGRADECIMENTOS

Agradeço a Deus pela chance de vida.

A minha esposa Márcia e aos meus filhos Bruno, Diego e Ney Jr., pela

tolerância e amor dedicados a mim.

Em especial ao Prof. Dr. Gilberto De Nucci - meu orientador e amigo, pela

paciência e confiança, mesmo após 10 longos anos de ausência.

Ao Dr. Gustavo Duarte Mendes pelo apoio e colaboração constante.

A todos que de forma direta e indireta contribuíram para realização deste

trabalho.

A todos o meu mais sincero obrigado.

ix

Trabalho, solidariedade e tolerância. León Hippolyte Denizart Rivail

xi

SUMÁRIO

LISTA DE ABREVIATURAS...............................................................................................xv

RESUMO.......................................................................................................................... xvii

SUMMARY ........................................................................................................................ xix

1. INTRODUÇÃO .............................................................................................................. 21

2. OBJETIVO..................................................................................................................... 29

CAPÍTULO 1 - Ticlopidine quantification in human plasma by high-performance liquid chromatography coupled to electrospray tandem mass spectrometry.application to bioequivalence study.................................................... 33

CAPÍTULO 2 - Comparative bioavailability study with two gemfibrozil tablets formulations in healthy volunteers ....................................................... 43

CAPÍTULO 3 - Quantification of carvedilol in human plasma by high-performance liquid chromatography coupled to electrospray tandem mass spectrometry application to bioequivalence study....................................... 51

CAPÍTULO 4 - Verapamil quantification in human plasma by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry an application for bioequivalence study.................................................................................. 63

CAPÍTULO 5 - Comparative bioavailability of two ramipril formulations in healthy volunteers after a single dose administration ............................... 73

CAPÍTULO 6 - A bioequivalence study of citalopram based on quantification by liquid high-performance liquid chromatography coupled to electrospray tandem mass spectrometry ......................................................... 93

3. DISCUSSÃO ............................................................................................................... 105

4. CONCLUSÃO.............................................................................................................. 115

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................................... 119

xiii

LISTA DE TABELAS

TABELA 1 - Anamnese e Exames Laboratoriais vinculados ao Processo de Seleção dos Voluntários ................................................................................................. 112

TABELA 2 - Características gerais da metodologia empregada através de cromatografia liquida de alta eficiência acoplada a espectrômetro de massa (LC-MS-MS) para quantificação dos diferentes medicamentos ...................................... 113

xv

LISTA DE ABREVIATURAS

AHA - American Heart Association

ANVISA - Agência Nacional de Vigilância Sanitária

ASC - Área sob a curva farmacocinética da substância analisada

BPFC - Boas Práticas de Fabricação e Controle de Qualidade

BPL - Boas Práticas de Laboratório

CB - Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo

CEP - Comitê de Ética em Pesquisa

Cmax - Pico de concentração plasmática máxima do medicamento

CONEP - Conselho Nacional de Ética em Pesquisa

FDA - Food and Drug Administration -Agência de Controle de

Medicamentos e Alimentos dos Estados Unidos da América

FUNCOR - Fundo de Aperfeiçoamento e Pesquisa Cardiológica

BPC - Boas Práticas Clínicas

HU - Hospital Universitário da Universidade de São Paulo

ICB - Instituto de Ciências Biomédicas

ICH - Conferência Internacional de Harmonização

LC-MS-MS - Cromatografia líquida de alta eficiência, acoplada a espectrômetro de

massa

LOQ - Limite de Quantificação

OMS - Organização Mundial da Saúde

RDC - Resolução da Diretoria Colegiada

SBC - Sociedade Brasileira de Cardiologia

Tmax - Tempo do pico de concentração máxima da droga

UNICAMP - Universidade Estadual de Campinas

USP - Universidade de São Paulo

xvii

RESUMO

A quantificação de substâncias farmacologicamente ativas em matrizes biológicas

pode ser obtida através de estudos de bioequivalência. Hoje em dia, os estudos

de bioequivalência com drogas de ação cardiovascular são pontos crítico na

comunidade científica, usando detectores tais como a espectrometria de massa

acoplada com cromatografia líquida de alta eficiência; o HPLC-MS-MS vem sendo

aplicado progressivamente para quantificação de fármacos em várias partes do

mundo inclusive no Brasil. Muitos aspectos diferentes, tais como uma

sensibilidade mais elevada, precisão, explicam certamente este fato: a

substituição com fármacos genéricos dos fármacos de referência, transformou-se

uma prática difundida em nosso país. Após aprovação pela ANVISA estas drogas

sendo bioequivalentes, são uma opção aos pacientes e as seguradoras de saúde

as quais procuram maneiras para baixar custos do sistema de saúde. Os

interesses foram levantados, entretanto, com o uso descontrolado de tal

substituição pode certamente ser prejudicial em determinados casos. Neste

estudo, nós analisamos 6 (seis) diferentes estudos de bioequivalência. As

amostras do plasma foram extraídas e quantificadas pelo HPLC-MS-MS na

unidade analítica de Cartesius (SP de São Paulo I). Os estudos aqui apresentados

são práticos, precisos com elevada significância e exatidão na avaliação de tais

drogas de ação cardiovascular, podendo contribuir desta forma com a comunidade

de médicos, profissionais da saúde e com os pacientes portadores de doença

cardiovascular na determinação se tais são bioequivalentes.

Palavras chave: Medicamentos, Plasma, Medicamentos genéricos,

Farmacocinética, Espectometria de massa.

xix

SUMMARY

The quantification of pharmacologically active substances in biological materials

can be performed through bioequivalence studies. Now-a-days, bioequivalence

study of cardiovascular drugs is critical point in scientific community, using

detectors such as mass spectrometry with HPLC; HPLC-MS-MS have been

progressively applied to this drugs quantifications in worldwide, including Brazil.

Many different aspects, such as higher sensitivity, precision, surely explain this

fact, specially generic substitution for drugs has become a widespread practice as

ANVISA approves bioequivalent drugs, and patients and payors seek ways to trim

healthcare costs. Concerns have been raised, however, that uncontrolled use of

such substitution may indeed be harmful in certain cases. In this study, we analyze

6 different bioequivalence studies. Plasma samples were extracted and quantified

by HPLC-MS-MS at the Cartesius Analytical Unit (ICB/USP - São Paulo - SP). The

herein presented studies practical with significantly high precision and accuracy in

evaluation of such drugs to contribute of physician’s community with cardiovascular

patients in determination if all of them are bioequivalence.

Key words: Drugs, Plasma, Generic drugs, Pharmacokinetics, Mass spectrometry .

1

Introdução

Introdução

23

1. Aplicações dos estudos farmacocinéticos.

O comportamento farmacocinético de uma nova droga é, normalmente,

determinado em animais antes de ser utilizado em humanos. Os testes em

animais de laboratório seguem até o ponto em que se faz necessário obter

resultados em experimentos clínicos envolvendo seres humanos, pois existem

variações nos parâmetros farmacocinéticos quando comparamos resultados

obtidos em animais e em humanos (ROBERTS et aI.,1988). Um número cada vez

maior de novas substâncias com potencial terapêutico, bem como a

comercialização de produtos similares por diferentes empresas, tem estimulado o

desenvolvimento de novos métodos para o controle de qualidade. Os ensaios

clínicos tomaram-se importantes ferramentas para avaliar isolada ou de forma

comparativa as propriedades farmacocinéticas e farmacodinâmicas (ATKINSON et

aI., 2001).O desenvolvimento e a regulamentação destes ensaios clínicos

tornaram-se reconhecidamente mais importantes a partir da década de 50, quando

passaram a ser conduzidos de acordo com os interesses científicos e éticos. Em

1959 BULL introduz o conceito de estudo duplo cego, onde nem médico nem

paciente tinham conhecimento prévio da formulação administrada. Sir Austin

Bradford Hill foi o principal pesquisador envolvido com ensaios clínicos no

"Medical Research Council" tendo organizado vários estudos clínicos e publicado

diversos artigos sobre condução destes protocolos, demonstrando a importância

da escolha dos pacientes, randomização, avaliação objetiva e análise estatística

(ATKINSON et al., 2001). Os motivos que retardaram o progresso dos ensaios

clínicos foram "reverência à autoridade, relacionamento entre médico e paciente,

poucos registros, falta de facilidades para investigação e falta de remédios ativos".

A razão mais importante para o desenvolvimento de novos estudos foi a crescente

preocupação com o tratamento de doenças não transmissíveis (BULL et al., 1959).

A indústria farmacêutica sofreu uma enorme expansão nos últimos 40 anos, e com

isso, novas drogas foram descobertas e sintetizadas. Antes da II Guerra Mundial

não havia qualquer controle para que uma droga fosse livremente comercializada.

Contudo nos Estados Unidos já existia, desde 1938, legislação para uso de drogas

Introdução

24

em animais. Foi apenas na década de 60, com a catástrofe da talidomida, que

tanto os Estados Unidos como a Inglaterra, intensificaram as regulamentações

para execução de ensaios em humanos. A partir de 1963 é obrigatória uma

aprovação oficial para que a droga inicie um ensaio clínico e posteriormente, nova

aprovação para ser comercializada no Reino Unido. Nos Estados Unidos, o FDA

(FOOD AND DRUG ADMINISTRATION) desenvolveu e aplicou diretriz (a partir da

década de 70) para a elaboração de um modelo seguro de pesquisa clínica,

seguido por muitos outros países, diferindo do modelo britânico, principalmente

por valorizar sobremaneira a documentação dos dados obtidos (ATKINSON at al.,

2001).

Em 1964, a Associação Médica Mundial aprova em Helsinque um

documento com princípios para proteção de indivíduos em pesquisa biomédica.

São introduzidos conceitos de responsabilidades do investigador, comitês de ética

e consentimento livre e esclarecido. Com revisões periódicas posteriores (1975,

1983, 1989 e 2000), a Declaração de Helsinque constitui-se, atualmente, no

documento universal que rege os parâmetros para o desenvolvimento científico e

tecnológico envolvendo seres humanos.

Em 1977, o FDA publica as primeiras diretrizes para pesquisas clínicas

com o objetivo de garantir qualidade dos dados e proteger os participantes das

mesmas. Ente 1977 e 1981, novas diretrizes sobre Boas Práticas Clínicas são

publicadas. Em 1988, uma consolidação de um código de Boas Práticas Clínicas

(BPC) é publicada pelo FDA.

As Boas Práticas Clínicas também foram adotadas em outros países:

• 1985 – Japão e Canadá

• 1986 – Inglaterra

• 1991 – Austrália e Comunidade Européia

• 1995 – Publicação do código de Boas Práticas Clínicas (GCP) pela

OMS.

Introdução

25

Em 1996, a realização da Conferência Internacional de Harmonização

(ICH) e posterior introdução das alterações propostas serviram de alicerce para

que os estudos clínicos pudessem ser conduzidos de acordo com as normas e

regulamentos similares em diferentes países e em conformidade com elevados

padrões éticos e científicos.

No Brasil, a implantação de normas definindo a pesquisa em seres

humanos deu-se com a Resolução nº 01/88, através de iniciativa do Professor

Elisaldo Carlini. Em outubro de 1996, esta foi revogada pela resolução nº

196/MS/CNS, sendo posteriormente completada pela Resolução nº 251/97. Por

meio destas Resoluções, o Ministério da Saúde define diretriz e normas

objetivando promover a proteção de sujeito de pesquisas envolvendo seres

humanos.

A Resolução 196/96, baseada nos quatro referenciais básicos da

bioética, autonomia, não maleficência, beneficência e justiça, traz à comunidade

científica, bem como à sociedade brasileira, reflexões sobre os aspectos éticos da

pesquisa envolvendo seres humanos e estabelece as diretrizes para a

implantação de um sistema de revisão ética em pesquisa, composto por Comitês

de Ética em Pesquisa (CEP) e pela Comissão Nacional de Ética em Pesquisa

(CONEP), do Conselho Nacional de Saúde.

Assim, a Resolução 196/96, bem como as demais que complementam,

traz ao pesquisador as orientações para que o mesmo possa desenvolver, de

forma ética, pesquisas envolvendo seres humanos.

Esta Resolução estabelece que todas as pesquisas desenvolvidas com

seres humanos devem ser submetidas à apreciação de um Comitê de Ética em

Pesquisa (CEP), credenciado pela CONEP (Comissão Nacional de Ética em

Pesquisa). A resolução também preconiza que todas as instituições que realizam

pesquisas implantem o CEP, a fim de se promover em toda a rede o

desenvolvimento científico e tecnológico fundamentado nos princípios de ética e

do respeito à cidadania. Na impossibilidade de constituir um CEP de outra

Introdução

26

instituição ou o pesquisador principal deverá submeter o projeto a apreciação do

CEP de outra instituição, dentre os indicados pelo CONEP.

2. Genéricos

Medicamento genérico é um medicamento similar a um produto de

referência ou inovador, que pretende ser com este intercambiável, geralmente

produzido após expiração ou renúncia da proteção patenteária ou de outros

direitos de exclusividade, comprovada a sua eficácia, segurança e qualidade, e

designado pela Denominação Comum Brasileira ou, na sua ausência, pela

Denominação Comum Internacional.

No Brasil, a questão dos genéricos começa a tomar fôlego, a partir da

Lei 9.787, sancionada pelo presidente da República Fernando Henrique Cardoso,

em 10 de fevereiro de 1999, que estabelece o que é medicamento genérico e

dispõe sobre a utilização de nomes genéricos em produtos farmacêuticos, sob

fiscalização da ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária). Essa

legislação foi revista e atualizada com o objetivo de melhor esclarecer as

exigências, em relação aos medicamentos genéricos através da RDC 10 de

janeiro de 2001. Posteriormente, foi editada a RDC 84, de março de 2002, com o

intuito de detalhar as regulamentações já previstas na RDC 10. Esta nova

resolução transforma os anexos da RDC 10 em Guias publicados na forma de

resoluções (RE), como por exemplo, a RE 478-Guia para provas de

bioequivalência de medicamentos Genéricos (RIBEIRO, 2000). O objetivo dessa

Legislação é aumentar a oferta de medicamentos, o que resultará numa maior

concorrência entre os fabricantes e na diminuição dos gastos da população com

os mesmos (ABIFAM, 2001). O surgimento dos produtos denominados genéricos

aparece como uma alternativa aos produtos tradicionais e podem revolucionar as

questões inerentes à falta de recursos dos governos para subsidiar a população

de baixa renda (ABIFAM,2001).

Introdução

27

Do ponto de vista econômico, fala-se de um bem substituto à altura dos

concorrentes, tendo sua intercambialidade garantida pelos estudos de

bioequivalência, com preços competitivos e que podem mudar o cenário atual de

consumo da população brasileira, principalmente referindo-se aos menos

favorecidos (RIBEIRO, 2000).

A adoção de uma política de medicamentos genéricos, envolvendo a

produção, a garantia de qualidade, a prescrição, a dispensação e o uso dos

mesmos é parte fundamental de uma diretriz para promoção e o uso racional de

medicamentos em nosso País. A promoção do uso racional de medicamentos é,

também, uma das principais diretrizes preconizadas pela Organização Mundial da

Saúde - OMS. A fim de alcançar esse objetivo, é fundamental a realização de

estudos de farmacocinética comparada de fármacos, para verificar se existe

bioequivalência entre o medicamento teste e o medicamento referência adotado

como padrão pelo Ministério da Saúde. Também se torna necessário o

desenvolvimento de metodologias de baixo custo e fácil aplicação, com

sensibilidade e seletividade adequadas para realização desde tipo de estudo.

Considerando a importância dos estudos de biodisponibilidade/

bioequivalência no contexto da estratégia da política de implantação de

medicamentos genéricos no Brasil, os pesquisadores deverão estar atentos às

diretrizes estabelecidas pelo Ministério da Saúde na área de ética em pesquisas.

Pode-se afirmar que a cerca de estudos de biodisponibilidade iniciou-se

a partir de 1945, com a primeira publicação do conceito de disponibilidade

biológica. O desenvolvimento, durante a década de 1960, de técnicas analíticas

possibilitou o desenvolvimento de métodos sensíveis o suficiente para permitir a

quantificação de drogas ou metabólitos, inicialmente a urina, e posteriormente no

plasma, o que possibilitou a avaliação e comparação de biodisponibilidade de

diferentes formulações em voluntários, bem como a demonstração de que

diferenças significativas entre estas podem ocorrer.

Após a legislação de registro compulsório de medicamentos em 1969,

que facilitou a entrada de medicamentos genéricos no mercado canadense, o

Introdução

28

“Drugs Directorate” do “Canadian Federal Department of Health and Welfare”

começou a utilizar bioequivalencia como uma medida para aprovar o registro de

um medicamento durante a década de 1970. Este programa, juntamente com

outras informações, foi analisado pelo FDA, órgão a editar as primeiras diretrizes

para a realização de estudos de bioequivalência em 1977 A aplicação destas

diretrizes foi ampliada no “Drug Price Competition na Patent Term Restoration Act”

de 1984, o qual concedia ao FDA poderes para autorizar a aprovação de drogas

genéricas sem evidências clínicas de segurança ou eficácia, desde que a droga

seja bioequivalente ao produto inovador.

2

Objetivo

Objetivo

31

O presente trabalho teve por objetivo principal avaliar o desempenho de

6 (seis) fármacos com ação cardiovascular através de estudos de bioequivalência

realizado em voluntários sadios de ambos os sexos e em hospital brasileiro, pela

Unidade Analítica Cartesius - do Instituto de Ciências Biomédicas (ICB) da

Universidade de São Paulo (USP). Os estudos apresentados são os dos seguintes

medicamentos: (ticlopidina, gemfibrozil, carvedilol, verapamil, ramipril e

citalopram).

CAPÍTULO 1

Artigo publicado

“Ticlopidine quantification in human plasma by high-performance

liquid chromatography coupled to electrospray tandem mass

spectrometry. Appilcation to bioequivalence study”

Ney Carter do Carmo Borges,1 Gustavo Duarte Mendes,2,3 André Borges,2,3

Sandro Evandir de Oliveira,2,3 Rafael Eliseo Barrientos-Astigarraga2 and

Gilberto De Nucci1,2,3* - J.Mass.Spectrom- 39: 1562 -1569 , 2004

Capítulo 1

35

Capítulo 1

36

Capítulo 1

37

Capítulo 1

38

Capítulo 1

39

Capítulo 1

40

Capítulo 1

41

Capítulo 1

42

CAPÍTULO 2

Artigo publicado

“Comparative bioavailability study with two gemfibrozil tablet

formulations in healthy volunteers”

Ney Carter do C. Borges a ,Gustavo Duarte Mendesbc ,Rafael E.Barrientos-

Astigarragab ,Eduardo Zappib ,Fabiana Duarte Mendesb,and Gilberto De

Nuccia,b,c

Arzneim. Forch. Drug. Res. 55: 382 – 386, 2005

Capítulo 2

45

Capítulo 2

46

Capítulo 2

47

Capítulo 2

48

Capítulo 2

49

CAPÍTULO 3

Artigo publicado

“Quantification of carvedilol un human plasma by high-

performance liquid chromatography coupled to electrospray

tandem mass spectrometry application to bioequivalence study”

Ney Carter do Carmo Borgesa , Gustavo Duarte Mendesb,c, Diogo de Oliveira

Silvac ,Vinicius Marcondes Rezendec , Rafael Eliseo Barrientos-astigarragab ,

Gilberto De Nuccia,b,c,* J.Chromatogr B. 822: 253 – 262, 2005

Capítulo 3

53

Capítulo 3

54

Capítulo 3

55

Capítulo 3

56

Capítulo 3

57

Capítulo 3

58

Capítulo 3

59

Capítulo 3

60

Capítulo 3

61

CAPÍTULO 4

Artigo Publicado

“Verapramil quantification in human plasma by liquid

chromatography coupled to tandem mass spectrometry an

application for bioequivalence study”

Ney Carter do C.Borgesa ,Gustavo Duarte Mendesb,c , Rafael E.Barrientos-

Astigarragab , PauloGalvinasb ,Celso H.Oliveirab ,Gilberto De Nuccia,b,c,*

J.Chromatogr B. 827 ( 2005 ) - 165-172

Capítulo 4

65

Capítulo 4

66

Capítulo 4

67

Capítulo 4

68

Capítulo 4

69

Capítulo 4

70

Capítulo 4

71

Capítulo 4

72

CAPÍTULO 5

Artigo Submetido

“Comparative bioavailability of two ramipril formulations in

healthy human volunteers after a single dose administration”

Gustavo Duarte Mendes1,3 ,André Tasso Dantas Sanfelice1 ,Ney Carter do

Carmo Borges2 ,Luiz Eduardo Cavedal2 ,João Henrique Módulo3 and Gilberto

De Nucci1,2,3*

Int.J.Clin.Pharmacol.Ther. 2005- IN PRESS

Capítulo 5

75

Capítulo 5

76

Comparative bioavailability of two Ramipril formulations in healthy human

volunteers after a single dose administration.

Gustavo Duarte Mendes1,3, André Tasso Dantas Sanfelice1, Ney Carter do Carmo

Borges2, Luiz Eduardo Cavedal2, João Henrique Módolo3 & Gilberto De Nucci1,2,3 *

1 Department of Internal Medicine, State University of Campinas, Campinas/SP,

Brazil

2 Department of Pharmacology, State University of Campinas, PO Box 6111

Campinas/SP, Brazil

3 Cartesius Development of Clinical Research, Jesuino Marcondes Machado Ave,

415, 13092-320 Campinas/SP, Brazil

Running title: ramipril and ramiprilat bioequivalence study

Key words: tandem mass spectrometry, LC/MS/MS, bioavailability,

pharmacokinetics

* Author for correspondence:

Gilberto De Nucci, MD, PhD.

415 Jesuino Marcondes Machado Ave

Campinas, SP, Brazil

Postal Code: 13092-320

Fax: 55 19 3252-1516

E-mail: [email protected]

Capítulo 5

77

Summary

Objective: To assess the bioequivalence of one ramipril 5 mg tablet formulation

(ramipril test formulation from Laboratórios Biosintética Ltda and Triatec® from

Aventis Pharma standard reference formulation) in 26 healthy volunteers of both

sexes. Methods: The study was conducted using an open, randomized, two-period

crossover design with a 2-week washout interval. Plasma samples were obtained

over a 36 h period. Plasma ramipril and ramiprilat concentrations were analyzed by

liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS-MS) with

positive ion electrospray ionization using multiple reaction monitoring (MRM). From

the ramipril and ramiprilat plasma concentration vs time curves, the following

pharmacokinetic parameters were obtained: AUC0-36h AUClast, AUC0–inf and Cmax.

Results: The limit of quantification was 0.2 ng.mL-1 and 1.0 ng.mL-1 for ramipril and

ramiprilat, respectively. The geometric mean and respective 90% confidence

interval (CI) Ramipril/Triatec® and Ramiprilat/ Triatec® percent ratios were

respectively: 104.69% (90% CI= 93.21%-117.59%) for Cmax,102.49% (90% CI=

92.76%-113.24%) for AUClast,102.97% (90% CI= 93.21%-113.74%) for AUC0-

36h,103.60% (90% CI= 93.56%-114.73%) for AUCinf,108.48% (90% CI= 98.86%-

119.03%) for Cmax,105.88% (90% CI= 101.55%-110.39%) for AUClast,105.81%

(90% CI= 101.53%-110.27%) for AUC0-36h, 97.30% (90% CI= 90.17%-104.99%) for

AUCinf. Conclusion: Since the 90% CI for AUClast, AUC0-36h, AUC0–inf and Cmax ratios

were within the 80–125% interval proposed by the US FDA, it was concluded that

ramipril formulation elaborated by Laboratórios Biosintética Ltda is bioequivalent to

Triatec® formulation for both the rate and the extent of absorption.

Introduction

The ramipril, 2-[N-[(S)-1-(ethoxycarbonyl)-3-phenylpropyl)]-L-alanyl]-

(1S,3S,5S) 2-azabicylclo(3-3-0) octane carboxylic acid, is an angiotensin-

converting enzyme inhibitor (ACEI) [1], that regulates the hypertension and

treatment of congestive heart failure [2,3,4]. It is a prodrug [1,2], that acts on the

Capítulo 5

78

renin-angiotensin aldosterone system by inhibiting the conversion of the inactive

angiotensin I to the highly potent vasoconstrictor, angiotensin II.

The aim of this study was to compare in healthy volunteers of both sexes,

the pharmacokinetic profiles and to evaluate the bioequivalence of two ramipril 5

mg tablet formulations. Ramipril and ramiprilat plasma levels were measured by

high performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry

(LC-MS-MS) in human plasma using enalapril and enalaprilat as the internal

standards.

Materials and methods

Clinical protocol Twenty six healthy volunteers of both sexes aged between 18 and 50 years

and within 15% of the ideal body weight, were selected for the study after

assessment of their health status by clinical evaluation (physical examination,

ECG) and the following laboratory tests: blood glucose, urea, creatinine, AST, ALT,

alkaline phosphatase, γ-GT, total bilirubin, albumin and total protein, triglyceride,

total cholesterol, hemoglobin, hematocrit, total and differential white cell counts,

and routine urinalysis. All subjects were negative for HIV, HCV and HBV (except

for serological scar).

The study was begun with 26 healthy volunteers and finished with 24

healthy volunteers. Two volunteers dropped out of the study for personal reasons.

The volunteers had the following clinical characteristics (according to gender and

expressed as mean ± SD [range]): male: age: 30.7 ± 8.8 yr. [20 – 44], height: 172.0

± 8.0 cm [160.0 – 185.0], body weight: 68.1 ± 7.8 kg [55.0 – 81.5]; female: age:

32.4 ± 6.2 yr. [22 – 39], height: 157.0 ± 6.0 cm [144.0 – 165.0], body weight: 58.7 ±

5.7 kg [49.5 – 68.2]. All subjects gave written informed consent and the State

University of Campinas - Unicamp approved the clinical protocol. The study was

conducted in accordance with the provisions of the Declaration of Helsinki (1964),

Tokyo (1975), Venice (1983), Hong Kong (1989), Somerset West (1996) and

Capítulo 5

79

Edinburgh (2000) revisions. After screening and wash-out period (of at least 2

weeks), the individuals who qualified were confined for 2 periods of approximately

48 hours.

The study was a single dose, two-way randomized crossover design with a

two-week washout period between the doses. During each period, the volunteers

were hospitalized at 03:00 p.m. and after an overnight fast they received (at

approximately 7:00 a.m.) a single dose of ramipril (5 mg of either tablet

formulation). Water (200 mL) was given immediately after the drug administration

and the volunteers were then fasted for 2 h, after which period, a standard lunch

was served; an evening meal was provided 10 h after dosing. Standard meal was

constituted by rice, beans, vegetables, and fried chicken meat plus a fruit as

dessert. No other food was permitted during the "in-house" period and liquid

consumption was allowed ad libitum after lunch (with the exception of xanthine-

containing drinks, including tea, coffee, and cola). At each time 0, 2, 4, 6, 8, 12, 18,

24 and 36 hours, systolic and diastolic arterial pressure (measured non-invasively

with a sphygmomanometer), heart rate and temperature were recorded.

Formulations

The following formulations were employed: ramipril (test formulation from

Laboratórios Biosintética Ltda, Brazil; lot N° 273/03, expiry 07/2005) and Triatec®

(standard reference formulation from Aventis Pharma, lot N° 204971, expiry date

06/2005.)

Drug analysis Blood samples (4 mL) from a suitable antecubital vein were collected by

indwelling catheter into EDTA containing tubes before and 0.33h, 0.66h, 1h, 1.33h,

1.66h, 2h, 2.5h, 3h, 3.5h, 4h, 4.5h, 5h, 5.5h, 6h, 7h, 8h, 10h, 12h, 14h, 16h, 18h,

24h, 32h and 36h post-dosing. The blood samples were centrifuged at

approximately 2000 x g for 1 min at 4°C and the plasma decanted stored at -20°C

until assayed for ramipril and ramiprilat contents.

Capítulo 5

80

Drug plasma extraction was performed using a solid-phase extraction.

Briefly, 500 µL of each plasma sample were introduced into glass tube following by

the internal standards (50 µL of 0.1 µg/mL of Enalapril/Enalaprilat in

methanol/water 50/50; v/v solution) and vortex-mixed the samples for

approximately 10s. The HLB Oasis SPE cartridges for the assay were pre-

conditioned by washing with 1 mL methanol and with 1 mL of deionized water. All

samples were applied to individual HLB Oasis SPE cartridges, then washed (5

times) the cartridges with 1 mL of washing solution (aqueous hydrochloric acid

solution (10 mM)). Cartridges were then eluted with 0.5 mL of the methanol and the

solvent was evaporated using a flow of nitrogen. The residue was dissolved with

0.2 mL of pure deionized water and vortex-mixed for 15 s. All solutions were

transferred to 96-well plates and placed them into auto injector racks. Typical

standard retention times were 2.1, 1.6, 1.7 and 1.3 min for ramipril, ramiprilat,

enalapril and enalaprilat, respectively. The mass spectrometer (Micromass model

Quattro Ultima) equipped with an electrospray source using a crossflow counter

electrode was run in positive mode (ES+), was set up in Multiple Reaction

Monitoring (MRM), monitoring the transitions 417.00 > 234.0, 389.00 > 206.00,

377.00 > 234.0 and 349.00 > 206.0 for ramipril, ramiprilat, enalapril maleate and

enalaprilat, respectively as the precursor ions m/z and the respective product ions.

Stability

Stability quality control plasma samples (0.6, 4.0 and 40.0 ng/mL for ramipril

and 3.0, 9.0 and 16.0 ng/mL for ramiprilat) were subjected to short-term (6h) room

temperature, three freeze/thaw (-20 to 25°C) cycles, 73h autosampler stability

(room temperature) and long-term stability (116 days) tests. Subsequently, the

ramipril and ramiprilat concentrations were measured compared to freshly

prepared samples. The significance of the results obtained was analyzed by

Student’s t-test (p<0.05).

Capítulo 5

81

Pharmacokinetics and statistical analysis

Bioequivalence between the two formulations was assessed by calculating

individual test/reference ratios for the peak of concentration (Cmax), area under

curve (AUC) of plasma concentration until the last concentration observed

(AUClast), and the area under curve between the first sample (pre-dosage) and

infinite (AUC0-inf). The Cmax and the time taken to achieve this concentration (Tmax)

were obtained directly from the curves. The areas under the ramipril and ramiprilat

plasma concentration vs. time curves from 0-to the last detectable concentration

(AUClast) were calculated by applying the linear trapezoid rule. Extrapolation of

these areas to infinity (AUC0-inf) was done by adding the value Clast/ke to the

calculated AUClast (where Clast = the last detectable concentration). The AUC and

Cmax data for the two formulations were analyzed by ANOVA to establish whether

the 90% CI of the ratios was within the 80-125% interval indicating bioequivalence

as proposed by the US Food and Drug Administration. Parametric and non-

parametric analyses of ln-transformed arithmetic means and individual Tmax

differences between test and reference formulations were also performed.

Results

The ramipril was well tolerated at the administered doses and no significant adverse

reactions were observed or reported. All biochemical parameters did not present any

clinical relevant alterations.

The mass chromatograms of a sample are shown in Figure 1, in which both the

retention times of Ramipril, Ramiprilat, Enalapril and Enalaprillat were 2.1, 1.6, 1.7 and

1.3 min respectively. Table 1 shows the precision and accuracy for the LOQ and QCs.

The mean ramipril plasma concentrations vs time profiles after a single oral dose of

each 5mg tablet formulation of ramipril is shown in Figure 2. Table 2 shows the

mean pharmacokinetics parameters obtained from 26 volunteers after the

administration of 5 mg ramipril tablet. Table 3 shows geometric mean of the

individual Cmax, AUClast, AUC0-36h, AUCinf, (test/reference formulation), the

respective 90% confidence intervals (CI), Intra-subject CV for the 26 volunteers

and separated gender.

Discussion

Capítulo 5

82

Ramipril has been determined in plasma and other biological fluids by

several methods such as reversed-phase high-pressure liquid chromatography

quantified by radioimmunoassay (LOQ 0.25 - 0.4 fmol/mL RT 6 min) [2,3], gas

chromatography-mass spectrometry (LOQ 10 ng/mL; RT 10 min) [6], UV

spectrophotometry (LOQ 23000 ng/mL) [8], reversed-phase high-pressure liquid

chromatography (LOQ 500 ng/mL; RT 8.5-30 min) [9], polarography (LOQ 20

ng/mL) [7], high-pressure liquid chromatography coupled with UV detection (LOQ

180 ng/mL RT 7.36 min) [10] and liquid chromatography coupled to tandem mass

spectrometry (LOQ 0.5ng/mL RT 1.0-1.5 min for both ramipril and ramiprilat) [11].

Our method has a suitable LOQ (0.2 ng/mL,1 ng/mL ramipril and ramiprilat) is

sufficient for bioequivalence study and can be performed in a short time (RT 2.1,

1.6 min for ramipril and ramiprilat, respectively), employing a high yield solid-phase

extraction (mean recovery 93.4%).

After the oral administration of the ramipril tablets, the observed ramapril

and ramiprilat peak plasma concentration (Cmax) values and the time values (Tmax)

were similar to those reported in the literature [12,13] and equivalent between the

formulations (Table 2 and 3).

In addition, the calculated 90% CI for mean Cmax, AUC0-36h, AUClast and

AUC0-inf Ramipril/Triatec® and Ramiprilat/Triatec® individual ratios were within the

80–125% interval defined by the US Food and Drug Administration [14,15], thus

establishing the bioequivalence of the two formulations.

For future studies, we proposed the quantification of the ramipril only, since the

intra-subject variability of the metabolite is much lower than of the parent, making it

less discriminative for bioequivalence.

Conclusion

Since the 90% CI for Cmax and AUClast ratios were all inside the 80-125%

interval proposed by the US Food and Drug Administration Agency, it was concluded

that ramipril formulation elaborated by Laboratórios Biosintética, Brazil is bioequivalent

to Triatec® formulation for both the rate and the extent of absorption [14,15].

Capítulo 5

83

References

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Capítulo 5

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Capítulo 5

85

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Capítulo 5

86

Figure 1 - Selected ion chromatograms (MRM) of 2 channels ES+. 1A: blank

human plasma for monitoring the transitions 417.00 > 234.0, 389.00 > 206.00,

377.00 > 234.0 and 349.00 > 206.0 for ramipril, ramiprilat, enalapril maleate and

enalaprilat, respectively. The peaks illustrate the retention time and integrated

area.

Figure 2 - Mean concentrations vs. time curve for ramipril and ramiprilat.

Table 1 - Quantified concentration (µg/mL) of individual samples for intra-batch

and inter-batch validation.

Table 2 - Mean pharmacokinetic parameters obtained from volunteers after oral

administration of 5 mg Ramipril tablets.

Table 3 - Geometric mean of the individual Cmax, AUClast, AUCinf, (test/reference

formulation), the respective 90% confidence intervals (CI) and Intra-subject CV and

for each gender.

Capítulo 5

87

Figure 1: MRM chromatograms of blank normal human plasma: (A) ramipril, (B).

ramiprilat, (C) enalapril and (D) enalaprilat; MRM chromatogram of the LOQ: (E)

ramipril, (F). ramiprilat, (G) enalapril and (H) enalaprilat.

Capítulo 5

88

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0.0

2.5

5.0

7.5

10.0

12.5 Ramipril - referenceRamipril - test

12 18 24 30 36

Ramiprilat - referenceRamiprilat - test

Time (h)

Con

cent

ratio

n M

ean

(ng/

mL)

Figure 2: Ramipril and ramiprilat plasma means concentrations vs. time profile

obtained after the single oral administration of 5 mg of ramipril formulation.

Capítulo 5

89

Table 1: Accuracy and precision data for ramipril and ramiprilat from the pre-study validation in human plasma.

Intra-batch - Ramipril Nominal

concentration (ng.mL-1)

0.2 0.6 4.0 40.0

Mean Range

0.22 0.20 – 0.24

0.63 0.57 – 0.68

4.32 4.14 – 4.41

42.54 40.50 – 45.00

Accuracy (%) 111.69 104.96 107.91 106.34 Precision (%) 5.29 5.51 2.08 3.79

Inter-batch – Ramipril Nominal


0.2 0.6 4.0 40.0

Mean Range

0.21 0.18 – 0.24

0.61 0.52 – 0.68

3.95 3.45 – 4.41

39.57 32.60 – 45.00


Intra-batch – Ramiprilat Nominal


1.0 3.0 9.0 16.0

Mean Range

1.20 1.15 – 1.25

3.04 2.85 – 3.21

9.31 8.83 – 9.76

16.8 16.10 – 17.50


Inter-batch - Ramiprilat Nominal


1.0 3.0 9.0 16.0

Mean Range

1.14 1.02 – 1.25

3.02 2.82 – 3.21

9.24 8.52 – 9.76

16.7 15.50 – 17.60


Capítulo 5

90

Ramipril Ramiprilat

Pharmacokinetic Parameter Triatec®

5 mg Ramipril

5 mg Triatec®

5 mg Ramipril

5 mg AUClast (ng*h/mL)

Geom. Mean SD

12.77 5.09

12.84 4.58

105.95 25.22

112.18 21.70

AUCinf (ng*h/mL) Geom. Mean

SD

13.33 5.15

13.59 4.72

187.02 42.78

184.48 39.56

Cmax (ng/mL) Geom. Mean

SD

12.82 5.87

13.00 4.99

9.81 6.34

10.45 5.80

K (1/h) Median Range

0.52 0.03 – 1.29

0.57 0.01 – 2.40

0.02 0.01 – 0.05

0.03 0.01 – 0.06

T1/2 (h) Median Range

1.33 0.54 – 23.52

1.22 0.29 – 61.69

35.08 13.30 – 80.64

26.73 11.65 – 75.66

Tmax (h) Median Range

0.33 0.33 – 1.00

0.67 0.33 – 1.00

3.00 1.33 – 10.00

3.00 1.33 – 6.00

Table 2: Mean pharmacokinetic parameters obtained from 26 volunteers after administration of each 5 mg ramipril tablet formulation.

Capítulo 5

91

n = 24 Ramipril Ramiprilat Parametric Parametric

Triatec® / Ramipril

5 mg Geom. Mean 90% CI

Intra subject

CV% Geom. Mean 90% CI

Intra subject

CV% AUClast 102.49 92.76 – 113.25 19.57 105.88 101.56 – 110.39 7.92 AUCinf 103.60 93.56 – 114.73 19.79 97.30 90.17 – 104.99 15.71 Cmax 104.69 93.21 – 117.59 22.31 108.48 98.86 – 119.04 17.21

Man - n = 11 Ramipril Ramiprilat Parametric Parametric



Intra subject


Intra subject

CV% AUClast 114.39 95.43 - 137.12 19.50 104.39 98.85 - 110.26 6.43 AUCinf 116.44 96.85 - 139.99 19.47 96.17 84.17 - 109.89 17.05 Cmax 116.55 97.75 - 138.98 18.58 110.90 98.72 - 124.58 12.91

Woman - n = 13 Ramipril Ramiprilat Parametric Parametric



Intra subject


Intra subject

CV% AUClast 93.06 82.74 - 104.67 17.88 105.63 98.99 - 112.7 8.69 AUCinf 93.60 83.04 - 105.50 18.10 98.52 88.21 - 110.04 15.88 Cmax 96.22 80.79 - 114.61 25.71 103.86 89.48 - 120.54 20.30

Table 3: Geometric mean of the individual AUClast, AUC0-∞, and Cmax ratios (test/reference formulation), the respective 90% confidence intervals (CI) and CV.

CAPÍTULO 6

Artigo Publicado

“A bioequivalence study of citalopram base don quantification by

high-performance liquid chromatography coupled to electrospray

tandem mass spectrometry”

G Duarte Mendes1,2, N Cater do Carmo Borges2, A. dos Santos Pereira2, F.

Duarte Mendes2, R. Eliseo Barrientos-Astigarraga2 and G. De Nucci1,2

Int.J.Clin.Pharmacol.Ther. v.43 - n. 8/2005 (389-398)

Capítulo 6

95

Capítulo 6

96

Capítulo 6

97

Capítulo 6

98

Capítulo 6

99

Capítulo 6

100

Capítulo 6

101

Capítulo 6

102

Capítulo 6

103

Capítulo 6

104

4

Discussão

Discussão

107

O objetivo final dos estudos de bioequivalência é o tratamento ou

prevenção de doenças com fármacos de padrões farmacocinéticos e qualidades

comprovados. No presente trabalhos foram utilizados como matriz biológica o

plasma humano para quantificação farmacocinética dos fármacos através do

método de cromatografia líquida acoplada a espectrômetro de massa (LC-MS-

MS). A quantificação de fármacos através de LC-MS-MS é geralmente baseada na

razão de áreas de picos do analito e do padrão interno (resposta). A utilização do

padrão interno determina uma compensação de diferenças no comportamento do

analito na extração, eventuais falhas no processo de injeção e em diferenças na

eficiência da ionização. Padrões internos mais utilizados são fármacos de

estrutura química semelhante ao analito ou o próprio analito que contenha alguns

dos seguintes isótopos estáveis: 2H, 13C, 180 ou 15N. A Anamnese e Exames

Laboratoriais vinculados ao Processo de Seleção dos Voluntários incluindo

avaliação clínica, eletrocardiográfica e laboratorial são demonstrados na Tabela 1. A quantificação das amostras de medicamentos foi realizada de acordo com os

parâmetros apresentados na Tabela 2 e Capítulos 1 a 6. Nesses capítulos

encontram-se os dados e resultados, gráficos, tabelas e análise estatística

correspondentes. Foi apresentado no Capítulo 1 e 3 pela primeira vez na literatura

mundial, o limite de quantificação (LOQ) no LCMSMS de 1 ng/mL e 0.1 ng/mL,

garantindo maior velocidade no processamento das amostras de plasma, maior

acurácia , maior sensibilidade e especifidade associado com menor custo por

estudo realizado. A biodisponibilidade e o bioequivalência entre duas formulações,

e a seleção das formulações, emergiram como temas críticos na medicina durante

os últimos anos em nosso país. O interesse em baixar custos do cuidado de saúde

resultou em um aumento tremendo no uso de genéricos; atualmente

aproximadamente mais da metade de todas as prescrições escritas é para as

drogas que podem ser substituídas com um produto genérico (MILLER e

STRONG 1990). Sobre 80% das aproximadamente 10.000 drogas da prescrição

disponíveis em 1990 (U.S.A.) já estavam disponível em mais de uma fonte (The

Food and Drug Letter 1990). Com a disponibilidade e o uso crescentes de

produtos genéricos, os profissionais de saúde são confrontados com uma

Discussão

108

disposição sempre maior dos genéricos produzidos por vários laboratórios

nacionais e internacionais, tendo como principal tarefa a de selecionar aqueles

que são terapeuticamente equivalentes. Este crescimento fenomenal da indústria

farmacêutica dos genéricos e da abundância de produtos oriundos de diferentes

laboratórios chamou-nos a atenção para algumas perguntas que muitos

profissionais e cientistas de saúde têm a respeito da equivalência terapêutica

destes produtos, particularmente daqueles em determinadas categorias

terapêuticas, críticas tais como os genéricos como os de ação cardiovascular

(MILLER e STROM, 1990; LAMY, 1985; FOSTER, 1991). Inerente aos guidelines

nacionais e internacionais, atualmente aceitos, para a substituição de uma

formulação inovadora, é a suposição de que a droga genérica seja considerada

bioequivalente a formulação inovadora ou de marca, produzirá o mesmo efeito

clínico. Tão direto como esta indicação a respeito da bioequivalência, parece ser

que gerou a controvérsia de muitos entre os cientistas e profissionais no campo do

cuidado a saúde. As numerosas publicações, indicam que há um interesse de que

os padrões atuais para a aprovação de drogas genéricas não podem sempre

assegurar a equivalência terapêutica (MEYER, 1985; LEVY,1960; LAMY, 1986;

DETTELBACH, 1986; SCHWARTZ, 1985; BERGER, 1980; LAMY, 1986;

HORWITZ, 1985; GOTTSCHALK, 1986;BARONE e COLAIZZI, 1985; STROM,

1987; WEAVER, 1987; NUWER, 1990).

Estudos de bioequivalência são realizados como substitutos da

equivalência terapêutica, com o objetivo de demonstrar que a eficácia, segurança

e qualidade de um determinado medicamento não apresentam diferenças

clinicamente significativas em relação a um medicamento referência no mercado

nacional. Segundo a legislação brasileira em vigor (RDC no135, de 29 de maio de

2003), dois medicamentos serão considerados bioequivalentes, quando eles forem

equivalentes farmacêuticos e, ao serem administrados, na mesma dose molar, nas

mesmas condições experimentais, não apresentem diferenças estatisticamente

significativas em relação a biodisponibilidade, a qual é determinada pela

quantificação dos seguintes parâmetros farmacocinéticos: área sob a curva de

Discussão

109

concentração plasmática versus tempo (ASC), pico de concentração plasmática

(Cmax) e, eventualmente, tempo para se atingir Cmax (Tmax).

A equivalência farmacêutica entre dois medicamentos relaciona-se à

comprovação de que ambos contêm o mesmo fármaco (mesma base, sal ou éster

da mesma molécula terapeuticamente ativa), na mesma dosagem e forma

farmacêutica, o que pode ser avaliado por meio de testes in vitro (SHARGEL e

YU, 1999; WHO, 1999). Portanto, pode ser considerada como um indicativo da

bioequivalência entre os medicamentos em estudo, entretanto não é o suficente

para garantir a bioequivalência. A legislação brasileira, tendo como base a

regulamentação técnica e a experiência de diversos países na área de

medicamentos genéricos, estabelece que, para um medicamento ser registrado

como genérico, é necessário que se comprove sua equivalência farmacêutica e

bioequivalência (mesma biodisponibilidade) em relação ao medicamento de

referência indicado pela Anvisa (RDC no135, de 29 de maio de 2003). Tal fato,

aliado ao cumprimento das Boas Práticas de Fabricação e Controle de Qualidade

(BPFC), fornece as bases técnicas e científicas para a intercambialidade entre o

genérico e seu medicamento de referência, uma vez que, nesse caso, ambos

podem ser considerados equivalentes terapêuticos, ou seja, medicamentos que

apresentam a mesma eficácia clínica e o mesmo potencial para gerar efeitos

adversos (MARZO e BALANT, 1995; MEREDITH, 1996; WHO, 1996; BENET,

1999; MARZO, 1999; MEYER, 1999). O medicamento de referência é, geralmente,

o inovador cuja biodisponibilidade foi determinada, durante o desenvolvimento do

produto, e que teve sua eficácia e segurança comprovada por meio de ensaios

clínicos, antes da obtenção do registro para comercialização. Nesse caso, a

empresa fabricante desenvolveu a formulação e a forma farmacêutica adequadas

à via de administração e ao objetivo terapêutico do medicamento, estabelecendo e

validando os processos de fabricação, bem como as especificações que deverão

ser reproduzidas posteriormente, lote a lote (STORPIRTIS, 1999). Para o

medicamento genérico, o fabricante deve investir no desenvolvimento

farmacotécnico de um produto que cumpra com as mesmas especificações in

vitro, em relação ao medicamento de referência. Entretanto, aceita-se que a

Discussão

110

formulação e o processo de fabricação não sejam idênticos, o que geralmente

ocorre devido aos diferentes equipamentos e fornecedores de matérias-primas

empregados por distintos fabricantes, desde que essas diferenças não

comprometam a bioequivalência entre os produtos (DIGHE, 1999). Nesse

contexto, é fundamental ressaltar que diferenças em relação a características

físicas e físico-químicas do fármaco e demais componentes da formulação, bem

como nos processos de fabricação, podem gerar diferenças na biodisponibilidade

que, no caso do genérico, podem comprometer a bioequivalência. Portanto, as

preocupações em termos de biodisponibilidade, bioequivalência, recaem sobre

medicamentos apresentados sob formas farmacêuticas para as quais existem

muitos fatores que podem alterar a liberação, a dissolução e a absorção do

fármaco no organismo. Tais fatores devem ser amplamente estudados durante o

desenvolvimento farmacotécnico do produto, o que, no entanto, não exclui a

necessidade da realização do teste de bioequivalência (BANAKAR, 1992;

MARQUES et al., 2002).

Desse modo, o teste de bioequivalência realizado, de acordo com as

Boas Práticas de Clínica (BPC) e de Laboratório (BPL), empregando-se

voluntários sadios, é fundamental para garantir que dois medicamentos que

comprovaram a equivalência farmacêutica apresentarão o mesmo desempenho no

organismo em relação à biodisponibilidade, expressa em termos da quantidade

absorvida do fármaco, a partir da forma farmacêutica administrada, e da

velocidade do processo de absorção (SHARGEL e YU, 1999).

A Sociedade Brasileira de Cardiologia através do FUNCOR criou o Selo

de Medicamentos da SBC/FUNCOR (http://prevencao.cardiol.br/selodeaprovacao/)

que é a certificação para orientar o consumidor que determinado medicamento

apresenta qualidade comprovada e está indicado para o tratamento ou prevenção

de doenças cardiovasculares, segundo evidencias técnico - científicas. A

certificação, dada através do Comitê do Selo de Aprovação da SBC/FUNCOR, é

baseada nos seguintes requisitos: Satisfação das leis e portarias vigentes:

Discussão

111

• Leis que regulamentam a entrada de medicamentos "referência" no

país;

• Leis que regulamentam a produção de "similares" no país;

• Lei 9787/99, publicada em 10/08/99 que trata da regulamentação dos

medicamentos genéricos.

Habitualidade de uso internacional e nacional, fazendo parte do

consenso da Sociedade Brasileira de Cardiologia e da AHA (American Heart

Association).

Aprovação pela comunidade científica brasileira – uso habitual, de

preferência fazendo parte do bulário de serviços universitários e hospitais de

referência.

Atender às exigências da ANVISA – Ministério da Saúde

Exigência de testes de bioequivalencia e biodisponibilidade para

produtos que não são "referência" (realizados em laboratórios nacionais,

credenciados pelo Ministério da Saúde)

O Comitê do Selo de Aprovação da FUNCOR é formado por médicos

cardiologistas, farmacologistas, bioquímicos e se necessário um convidado

especialista no assunto, que se reúnem para deliberação, análise e aprovação do

produto. Os padrões de referência usados são submetidos às revisões periódicas

de acordo com estudos e trabalhos científicos publicados em revistas

especializadas. A SBC/FUNCOR, por meio de seus profissionais especializados,

está apta a fornecer laudo técnico - científico a produtos relacionados à prevenção

de doenças cardiovasculares e promoção ou manutenção da saúde.

Discussão

112

Tabela 1 - Anamnese e Examaes Laboratoriais vinculados ao Processo de Seleção dos Voluntários

História Médica

Alergias; olhos, nariz e garganta; sistemas respiratório, cardiovascular, gastrointestinal, genito urinário, nervoso central, hematopoético-linfático, endócrino; dermatológico, musculoesquelético; estabilidade emocional, história familiar, cirúrgica.

Exame Físico Olhos, orelhas, nariz, garganta, pescoço(incluindo tireóide), coração, pulmões, abdomem (incluindo fígado e baço), pele, linfonodos, urogenital, sistema nervoso, esqueleto e músculos

Dados antropométricos Pressão arterial (medida 5 minutos após descanso), na posição sentada, pulso, altura, peso (roupas leves), índice de massa corpórea, temperatura em 0C

Categoria Exames

ECG ECG padrão com 12 derivações

Análise hematológica hemoglobina, hematócrito, contagem total e diferencial de leucócitos, contagem de glóbulos vermelhos, contagem de plaquetas

Análise Bioquímica Ureia, creatinina, bilirrubina total, proteinas totais, albumina, glicose em jejum, fosfatase alcalina, SGOT, SGTP, colesterol total, triglicérides, ácido úrico, γGT, potássio, sódio .

Urina Sumário de Urina (urina I)

Fezes Protoparasitológico

Sorologia Análise Sorológica para: hepatite B, hepatite C e HIV(1+2)β-HCG para mulheres

Discussão 113

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6

Conclusão

Conclusão

117

Os estudos apresentados demonstram uma grande aplicabilidade dos

estudos de bioequivalência com drogas de ação cardiovasculares aplicados com

uso de cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrômetro de massa

para a determinação de medicamentos em plasma humano. Essa aplicabilidade

pode ser utilizada com vantagens devido a alta confiabilidade dos métodos em

determinar com precisão e exatidão as concentrações de fármacos aliados com

custo por amostra quantificada menor. Deve-se ressaltar que um país como o

Brasil de dimensões continentais com parcos recurssos destinados à saúde, os

medicamentos genéricos são seguramente uma opção extremamente viável, para

o tratamento de patologias que têm alto índice de morbi-mortalidade.

7

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