AULAS PRÁTICAS

DE

IMUNOLOGIA

Universidade Federal da BahiaInstituto de Ciências da Saúde

Laboratório de Imunologia

O presente trabalho teve sua primeira versão realizada entre os anos de 2000 e 2001, pelos estudantes do curso de Medicina (UFBA) Adriana Campos, Nivaldo Cardozo Filho, Sabrina Oliveira e Silvana Asfora, bolsistas da Fundação de Apoio a Pesquisa e Extensão (FAPEX),através de recursos gerados pelo Laboratório de Imunologia do Instituto de Ciências da Saúde da UFBA.Passo a passo, o desenvolvimento dos arquivos foi acompanhadoe orientado pelos professores Roberto Meyer, Ivana Nasci-mento, Robert Schaer, Cláudia Brodskyn, Songelí Freire, e De- nise Lemaire, do laboratório mencionado acima, que continuam atualizando o trabalhoPretende-se apresentar os assuntos abordados nas aulas práticas, especialmente as principais técnicas de uso corrente na Imuno-logia, particularmente aquelas que além de utilizadas na pes-quisa científica, têm grande uso para o diagnóstico de diver-sas doenças e/ou na dosagem de hormônios e outras substâncias.

Salvador, maio de 2003

Os Professores

Roberto Meyer Ivana Nascimento Robert Schaer

Claudia Brodskyn Songelí Freire Denise Lemaire

O Laboratório de Imunologia

desenvolve uma atividade per-

manente de extensão, voltada

para o atendimento de pacien-

tes do SUS. Os recursos obti-

dos são reinvestidos na melho-

ria desta atividade, bem como

na ajuda ao ensino de graduação,

(como o presente trabalho), ao en-

sino de pós-graduação e à pes-

quisa. Deve ser ressaltado o apoio

recebido da FAPEX ao longo dos

últimos anos.

O Laboratório de Imunologia do ICS - UFBA

Trabalho realizado pelos acadêmicos de Medicina da UFBA Adriana Campos, Nivaldo Cardozo Filho, Sabrina Carvalho e Silvana Asfora, sob orientação dos Professores Roberto Meyer, Ivana Nascimento, Robert Schaer, Cláudia Brodskyn, Songelí Freire e Denise Lemaire, do Laboratório de Imunologia do Instituto de Ciências da Saúde da

UFBA.Atualizado em maio de 2003

Aula 1 :

Os Órgãos Linfóides Primários

• O sistema linfóide é composto por linfócitos e células mononucleares fagocíticas / apresentadoras de antígenos, que se encontram localizadas em órgãos capsulados ou em acúmulos de tecido linfóide difuso.

• Os órgãos linfóides podem ser classificados em dois grupos:

ÓRGÃOS LINFÓIDES CENTRAIS OU PRIMÁRIOSMedula ÓsseaTimoBursa de Fabrícius (aves)

Nesses órgãos os linfócitos se originam, ficam maduros e são suprimidos ou inativados sereconhecerem auto-antígenos.

ORGÃOS LINFÓIDES PERIFÉRICOS OU SECUNDÁRIOS Linfonodos BaçoTecidos linfóides associados à mucosa (MALT)

Nesses locais, os linfócitos maduros respondem a antígenos estranhos, gerando células efetoras e de memória, havendo a participação de macrófagos e de células apresentadoras de antígenos.

Principais órgãos linfóides e suas localizações

A medula óssea hematogênica no indivíduoadulto é encontrada nas cristas ilíacas, vértebras

e no esterno

O timoA medula óssea

Linfonodos Uma cadeia como exemplo.

O baço

“MALT”: apêndice, placas de Peyer, tonsilas...GRANT, 1993

Como já afirmado, linfócitos (L), macrófagos (M) e células apresentadoras de antígenos [reticulares dendríticas (R)],

constituem-se nas principais populações celulares dos órgãos linfóides.

Existem tres populações principais de linfócitos:

-os linfócitos T, com dois padrões fenotípicos e funcionais básicos: - o CD4+, conhecido como linfócito T auxiliar – tem papel central na regulação da resposta imune e funciona através da produção de citocinas (são divididos, com base nas citocinas que produzem, em linfócito T auxiliar 1 e 2). - o CD8+, conhecido como linfócito T citotóxico – tem atividade citolítica espe- cífica para, por exemplo, células infectadas por vírus, células tumorais etc.

-os linfócitos B, com duas atividades principais: - produção de anticorpos, particularmente após se diferenciarem em plasmócitos. - apresentação de antígenos. Os linfócitos B endocitam, processam e apresentam antígenos para os linfócitos T.

-os linfócitos NK (“natural killer”) possuidores de atividade citolítica inespecífica.

CÉLULA INDIFERENCIADA

BURSA (aves)MEDULA ÓSSEA (mamíferos)

TIMO

Linf. B

Linf. T

SANGUE

SANGUE E LINFA

MEDULA ÓSSEA

ORIGEM SÍTIO DE DESENVOLVIMENTO PRINCIPAL DESTINO

LINFONODO MEDULA ÓSSEA BAÇO MALT

RECIRRCULAÇÃO

Acompanhe o caminho seguido pelo linfócito, da medula óssea onde são primariamente gerados, até o órgão linfóide secundário

Veja a maturação de linfócitos T e B

Linfócitos e plamócitos:

As células mononucleares fagocíticas / apresentadoras de antí-genos, compreendem uma grande variedade de células capazes de,mais ou menos eficientemente, endocitar, processar e apresentarantígenos para os linfócitos T. Também participam da regula-ção do sistema imune através da produção de citocinas. São ori-ginadas a partir de monócitos do sangue (origem mielóide, por-tanto), apesar de uma menor parte ter origem linfóide.

linfócito pequeno linfócito grande plasmócito

Veja algumas das principais células apresentadoras de antígenos:

célula reticularmacrófago

monócito

células reticulares: de Langerhans dendrítica interdigitante dendrítica folicular

(os desenhos das células reticulares e do macrófago foram retirados de Roitt, Male and Brostoff, Immunology, 6th ed, Mosby, 2002)

Linfócitos e os diferentes tipos de fagócitos mononucleares,aí incluindo as diversas populações de células apresentado-ras de antígeno, estão compondo o tecido linfóide, que podeser frouxo, denso e nodular.

Veja:

frouxodenso

mais células mono- nuleares fagocíticas, menos linfócitos

bastante linfócitos,menos células mono-nucleares fagocíticas

nodular

nódulo em formação

nódulo bem desenvolvido,evidenciando o manto e o centro germinativo

o nodular tem celula-ridade do denso, or-ganizado, porém, emnódulos (= folículos)

frouxo denso

centrogerminativo

manto

• Durante a vida fetal a hematopoiese ocorre inicialmente no saco vitelino e depois no fígado e no baço.

• A medula óssea vai gradualmente assumindo essa função e, por volta da puberdade, a hematopoiese ocorre principalmente no esterno, vértebras, ossos ilíacos e nas costelas. Nesses ossos é encontrada a medula vermelha.

A medula é uma estruturareticular semelhante a uma esponja, localizada entre longas trabéculas.

TRABÉCULA

O parênquima nessa estruturaé ocupado por células adiposase por precursores de células

sanguíneas, que amadurecem esaem por meio de uma densa

rede de seios vasculares.

• Todas as células do sangue têm origem numa célula indiferenciada comum, que se diferencia em linhagens eritrocítica, megacariocítica, granulocítica, monocítica e linfocítica.

Célula precursora de célula do sangue

Células do sangue

Célula indiferenciada

Progenitora linfóideProgenitora mielóide

CFUeritróide

Mega-cariócito

CFU de basófilos

CFU deeosinófilos

CFU de granuló citos e monócitos

Hemácias Plaquetas Basófilos Eosinófilos Neutrófilos Monócitos

Linf. T Linf. B

Linfoblasto

Veja agora, de modo sumário, a formação das diferentes linhagens sanguíneas:

para os tecidosMacrófagos

+ Estímulo

Órgãos linfóides secundários

CFU = unidade formadora de colônia

• A proliferação e maturação das células precursoras na medula óssea é estimulada por citocinas, algumas também chamadas fatores estimulantes de colônias (CSF).

• As citocinas hematopoiéticas são produzidas por células do estroma e macrófagos da medula óssea, e por linfócitos T estimulados por antíge-nos.

• Na medula óssea são geradas as células precursoras dos linfócitos T

que migram para o timo.

• Os linfócitos B são gerados e se diferenciam, a partir de células precursoras, na própria medula óssea.

TIMOSepto interlobularSepto interlobular

LóbulotímicoLóbulotímico

Localização e estrutura do timoLocalização e estrutura do timo

• O timo é um órgão bilobado, situado no mediastino anterior. Cada lobo é dividido em múltiplos lóbulos por septos fibrosos. Cada lóbulo consiste de um córtex e uma medula.

• O timo tem uma rica irrigação vascular e vasos linfáticos eferentes que drenam para os linfonodos mediastinais. A circulação de células para dentro do timo se dá pelas vênulas de endotélio alto.

• Dispersas por todo o timo, além dos linfócitos T, estão células reticulares epiteliais, células dendríticas interdigitantes (IDC) e macrófagos. Na medula, encontramos os corpúsculos de Hassall, que são compostos de espirais de células reticulares epiteliais.

• O córtex contém uma coleção densa de linfócitos T . A medula, de coloração mais clara, é mais escassamente povoada por linfócitos.

As vênulas de endotélio alto estão presentesno timo e em alguns órgãos linfóides secun-dários. Elas são a principal via de chegada de

linfócitos endereçados para esses órgãos.

Veja imagens de microscopia de varredura do córtex do timo,

onde se observa a riqueza de linfócitos e a ligação de algumasdestas células aos macrófagos (M), possivelmente para posterior

fagocitose.

Kessel, R., Histologia Médica Básica, 1a. ed., Ed Guanabara Koogan, 2001.

Veja a estrutura histológica do timo com mais detalhes:

- novamente o lóbulo tímico

córtex medula

córtex

medula

córtex: tecido linfóide denso medula: tecido linfóide frouxo

corpúsculo de Hassall

células reticulares epiteliais linfócitos

• Nos mamíferos o timo atrofia com a idade, quando também, o tecido linfóide é substituído por tecido adiposo. A atrofia tímica, no homem, inicia-se na puberdade e continua ao longo da vida do indivíduo através de um processo que se inicia no córtex.

• Essa atrofia está associada a ação de cortcoesteróides.

Medula

Córtex

T. AdiposoPodemos encontrar no adulto remanescentesmedulares.

TIMO ADULTO

TIMO JOVEM

Corpúsculo de Hassall

• No Timo, a maioria dos timócitos nos vários estágios de maturação, sofre seleção positiva e negativa entre o córtex e a medula de cada lóbulo.

MEDULA ÓSSEA

Precursores de células T

Entram

Saem

Lóbulo tímicoCórtex

Medula

Timócitos imaturos

Linfócitos T maduros

- No caminho do córtex para a medula, os linfócitos amadurecem e expressam receptores para antígenos (TCR) e marcadores de superfície (CD4 ou CD8).

- Este processo envolve a seleção positiva e negativa mencionada. As células T maduras saem da região medular tímica para os órgãos linfóides secundários, via circulação sangüínea.

Depois de maduros, os linfócitos T deixam o timo e migram para outros tecidos. Acompanhe de novo o trajeto, a partir da medula óssea:

medula óssea (esterno)

timo

tonsila

linfonodos

baço

placas de Peyerapêndicececal

medula timo timo órg. secundários

VISÃO HISTOLÓGICA DA BURSA DE FABRICIUS

ZOOM

Luz intestinal

Epitélio intestinal

Lóbulo

Córtex

Medula

A Bursa de Fabricius está presente nasaves. Está localizada na parede do intes-tino grosso, na cloaca. É responsávelpela maturação dos linfócitos B.

A Bursa de Fabricius possui estruturahistológica semelhante ao Timo. Tam-bém é dividida em lóbulos (nódulos, para alguns autores).

FIM