Antigénio versus AnticorpoO diagnóstico Imunológico

Visão geral do SI

Laboratório de Imunologia• A imunologia estuda os

mecanismos de resposta do organismo a substâncias estranhas - Antigénios

• A resposta pode ser Humoral ( mediada por anticorpos) ou Celular ( mediada por células, fundamentalmente linfócitos).

A resposta humoral ou celular pode ser medida no

laboratório

Anticorpos - a chave para um diagnóstico

• Uma variedade de técnicas permite a medida qualitativa e quantitativa do Ag ou Ab. Anticorpos são usados na investigação celular e molecular pois permitem a localização e caracterização dos antigénios

Efeitos da combinação Ag-Ab

• Aglutinação: particula antigénica+Ab específico resulta na agregação de partículas

• Precipitação: Ag solúvel + Ab resulta em precipitação• Activação do Complemento(C): Ag em solução ou em

partícula+Ab específico resulta na activação de complemento• Citolise: Celula+anti-celula Ab+C, resulta na lise da célula• Opsonização:Ag+Ab+C aumenta fagocitose por monócitos,

macrófagos ou PMNs• Neutralização: Toxinas, viroses, enzimas,…+Ab específico

resulta na sua inactivação

Anticorpos - a chave para um diagnóstico

• Todas as reacções de diagnóstico que usam Ag-Ab, têm por base a capacidade de um Ab reconhecer um dado epítope- parte estrutural reactiva de um antigénio.

• Anticorpos:• Monoclonais- reagem

apenas com um epítope específico de um Ag

• Policlonais- ligam-se a vários epítopes de um antigénio

Anticorpos - a chave para um diagnóstico

• Afinidade : capacidade ou intensidade de um Ab (paratope) se ligar a um Ag particular (epítope) – “lock and key”.

• Produção de Abs:• Injecta-se um animal (ex:ratinho) com o material antigénico, e

espera-se pelo desenvolvimento da resposta imune; depois retiram-se os Abs circulantes presentes no sangue do animal, sendo estes representantes de uma população de Abs específicos = Policlonais

• Os Abs monoclonais são mais difíceis de produzir: quando a resposta imune se desenvolve no ratinho imunizado o seu baço é removido; as células desenvolvem-se em células B maturas que são feitas replicar e depois fundidas com células de hibridoma. No final é feito um “screenning” de identificação das células que produzem o anticorpo de interesse, que são isoladas e clonadas

Abs/Ags+ligando+enzima- a chave para um diagnóstico

• Um grupo de técnicas destinadas a medir níveis/concentrações de Ag ou Ab em que um dos reagentes é conjugado com uma enzima, que quando junta com o seu substrato gera um produto com côr- ELISA

• Têm por base a capacidade de um Ab reconhecer um dado epítope

Abs/Ags+ligando+enzima=ELISA (Enzyme-linked Immunoadsorbent

Assay)

• Detecção ou quantificação de um antigénio ou anticorpo usando um ligando (Anti-Ag ou Anti-Ab) conjugado com uma enzima cuja reacção se traduz na alteração de côr do substrato:

• Ligando - qualquer molécula ligada a um composto• Enzima - proteína capaz de desencadear reacções

como hidrólises, oxidações ou reduções, e não é consumida no processo

• Substrato-composto que é degradado ( no caso da reacção de ELISA é cromogéneo)

• Epítope - parte estrutural do Ag que reage com o Ab

Abs/Ags+ligando+enzima=ELISA (Enzyme-linked Immunoadsorbent

Assay)

Laboratório de ImunologiaExploração da resposta imune

• Níveis

• Primeiro

• Segundo

• Terceiro

• Tipo de estudo• Quantificação de imunoglobulinas• Capacidade hemolítica total do C• Provas cutâneas de hipersensibilidade• Estudo da função fagocítica

• Quantificação de linfócitos T e B• Quantificação fraccionária de C• Capacidade funcional de T e B

• Actividade citotóxica de T e NK• Quantificação de citoquinas• Capacidade de síntese de Igs

Laboratório de ImunologiaExploração da resposta imune

Estudo de imunoglobulinas e complemento

• 1) métodos não-imunológicos (ex.análises bioquímicas)

• 2) métodos imunológicos– Imunoelectroforese– Difusão radial– Nefelometria– RIA

Quantificação de proteínas de complemento

– Hemólise– Imunodifusão– Nefelometria

Laboratório de ImunologiaExploração da resposta imune

• Estudo de células imunocompetentes• 1- Análise fenotípica

– Citometria de fluxo *– Imunofluorescência (simples, dupla ou

tripla)

• 2- Análise Funcional(capacidade de resposta linfoproliferativa

a diferentes estímulos)_ Lectinas,mitogéneos,Abs monoclonais

Citometria de Fluxo

*Resultados de Citometria de Fluxo

Granulócitos

Monócitos

Linfócitos

Laboratório de ImunologiaExploração da resposta imune

• 2.1- Análise Funcional- Medida do grau de

activação celular-activação-proliferação-produção de citoquinas-actividade citotóxica dos linfócitos T-actividade citotóxica das células NK-fluxo de cálcio, fosforilação proteica-provas de aderência-ensaios de mobilidade celular-fagocitose-actividade bactericida