rio de janeiro, 10 de dezembro de 2010 leandro santiago emmerick

Rio de Janeiro, 10 de Dezembro de 2010

Leandro Santiago Emmerick

INTRODUÇÃO

Caranguejo da LamaScylla serrata

Taxonomia

Característica do

sudeste asiático

Ampla importância

econômica

108 mil toneladas

em 2004 na China

INTRODUÇÃO

MCRV

Dicistrovírus - Família

recente (2002)

Retrovírus, positive-

sense fita única (ssRNA),

não envelopados

30nm de diâmetro e

simetria icosaédrica

INTRODUÇÃO

MCRV

Infectam invertebrados

Doença do sono

13 segmentos de RNA

Necrose da gills e

intestino dos

hospedeiros infectados

INTRODUÇÃO

VP3

121 aminoácidos

Região C-terminal é

carregada positivamente

Sinal para localização e

exportação nuclear

Induz apoptose celular

Muito imunogênica

Antígeno produzido durante

o processo de infecção e

replicação viral

OBJETIVO

Investigar os mecanismos da infecção por MCDV no caranguejo da lama

Controlar a doença viral

Estudar a estrutura da proteína VP3

EXPERIMENTOS

Desenho de primers

Expressão de MCDV-VP3 em E. coli

Produção de 3 MAbs contra MCDV-VP3

Clonagem, expressão e purificação da recombinante

Imunização de camundongos por injeção intraesplênica

Caracterização dos MAbs por ELISA e Western Blotting

Localização da MCDV-VP3 na superfície externa por MET

RESULTADOS

Proteína recombinante purificada e principais proteínas estruturais do MCDV

1:2.048x105

Western blotting ELISA indireto

3 MAbs:1G6H9 – 1E7B8 – 4B6E10

Os MAbs reconhecem a MCDV-VP3

RESULTADOS

VP3 é uma proteína do capsídeo do MCDV

RESULTADOS

DISCUSSÃO

MAbs: alta especificidade e atividade usadas para diagnóstico

VP3 < VP1 e VP2

MAbs reconheceram tanto a nativa quanto a recombinante

Os resultados sugerem que VP3 é uma nova proteína estrutural do MCDV

CONCLUSÃO

Foi obtido e caracterizado com sucesso

os MAbs contra MCDV que são altamente

sensíveis e específicas tanto para a forma recombinante

quanto para a forma nativa da proteína estrutural MCDV-

VP3. Os MAbs fornecem uma ferramenta conveniente para

uso em laboratório para estudar a biologia básica do MCDV

e aprofundar o estudo do imunodiagnóstico da MCDV para

controlar MCDV na aquicultura caranguejo da lama e reduzir

a perda de produção de caranguejo associados MCDV.