meios microbiologia 2
Post on 25-Jul-2015
175 Views
Preview:
TRANSCRIPT
Meios microbiologia 2 Micronutrientes – Pequena quantidade mas funcionalmente importantes.
Manganês
Cobalto
Cobre
Molibdénio
Zinco
Macronutrientes – Grandes quantidades e desempenham papeis fundamentais na estrutura e metabolismo da célula.
Carbono
Oxigénio
Hidrogénio
Azoto
Enxofre
Magnésio
Fósforo
Fatores de Crescimento – São nutrientes acessórios, que fazem parte da célula mas eu não podem ser sintetizados pelo microrganismo.
Microrganismos heterotróficos - São organismos que usam carbono orgânico como principal fonte de carbono.
Autotróficos – São organismos que usam CO2 como principal fonte de carbono.
Cultura pura ou axénia – Tem apenas um tipo de microrganismo.
Cultura Mista – Tem vários tipos de microrganismos (muitos microrganismos diferentes).
Os meios devem conter – Nutrientes indispensáveis ao organismo em causa sob a forma assimilável.
O meio deve ser – Estéril e efetuado com técnicas de assepsia.
Fatores de crescimento
PH de 2 – 10
Tensão de oxigénio
Atividade da água Nota: A temperatura não é um fator de crescimento que possa ser posto no meio de cultura, tem a ver sim com as condições ótimas para a incubação da bactéria. Cultura – Crescimento de uma população microbiana em meios laboratoriais. Isolamento - Separação de um microrganismo a partir de uma população mista. Cultura de enriquecimento- Permite o crescimento de uma espécie microbiana em detrimento de outras. Ex.: Gelose de sangue; chocolate; coração. Meios enriquecidos – Permitem o crescimento de microrganismos fastidiosos, devido ao seu alto teor nutritivo.
Estado Físico
Líquido
Caldos
Nutrientes dissolvidos em água
desionizada
Semi - sólido
Agar na concentração
0,3 - 0,5 %
3g Agas/L
Sólido
Agar na concentração
1 - 1,5 %
15 - 20 g Agar/ L
Tipos de “culturas”
Placas de Petri
Tubos de ensaio - Rampa - A direito
Distinção de colónias numa Placa
Cor
Aspeto
Brilho
Tipo de colónias
Classificação dos meios de cultura
Composição Química
Quimicamente Definido
Consoante o grau de exigência do microrganismo
Conhecemos o que é lá posto
Conhecemos a quantidade
exacta.
Quimicamente Complexos
Não se conhece a composição quimica
exacta.
Utiliza nutrientes complexos
Permitem o crescimento de muitos
microrganismos diferentes.
Objectivos Funcionais
Simples Selectivos
São formulados para suprimir o crescimento de organismos que não interessam, permitindo
o crescimento dos microrgaismos que desejamos isolar.
Diferenciais
Podem crecer vários tipos de
microrganismos, mas devido ao diferente aspecto que tomam
no meio podem distinguir-se as
colónias.
Complexos
Microrganismos
Heterotróficos
Fotoheterotróficos
Compostos orgânicos
Luz
Químiolitoheterotróficos
Compostos Orgânicos
Inorgânico
Quimiorganoheterotróficos Compostos orgânicos
Orgânica
Autotróficos
Fotoautotróficos
CO2
Luz
Químioautotróficos CO2
Inorgânico
Químiorganoautotróficos
CO2 Orgânica
Meios de Cultura
Caldo de açúcar – Para determinar se as bactérias fermentam a glucose. Resultados:
Glucose + - Cor amarela – Com gás – hidrogenoliase fórmica reage com o ácido fórmico
- Sem gás
Glucose (-) – cor vermelha Kligler - meio diferencial para a capacidade fermentativa da glucose e lactose e produção de sulfito de hidrogênio.
- Fermentação da lactose na rampa - Fermentação da glucose no fundo do tubo [Fermentação]> 10 xs na rampa do que a [glucose].
Resultados:
Amarelo na rampa e no fundo – fermentação da lactose e glucose
Amarelo só no fundo – fermentador da glucose
Amarelo só na rampa – fermentador da lactose
Vermelho – Não fermentou – Na rampa – Não fermenta a lactose - No fundo – Não fermenta a glucose - Na rampa e no fundo – Não fermenta nada
Se existir – deslocamento no fundo do tubo – formação de CO2 + H2 - Formação de precipitado negro – formação de H2S
Nota: Semeia-se em profundidade e na rampa em esteria.
Meio MacConkey - Fermentação da Lactose. Não permite o crescimento de bactérias Gram + e fungos Resultados Bactérias Gram (-) e fermentadoras da lactose – Colónias vermelhas Bactérias Gram (-) e não fermentadoras da lactose – Colónias amarelas.
Manitol Salt Agar – Permite saber se as bactérias fermentam ou não o manitol. Não permite o crescimento de bactérias Gram (-) por causa da grande concentração de NaCl. Resultados Meio de cor amarela – bactérias fermentadoras de manitol. Meio de cor rosa – bactérias não fermentadoras de manitol.
CLED - permite distinguir bactérias fermentadoras da lactose e não fermentadoras de lactose. Resultados Cor inicial do meio – verde Se meio de cor verde => Lac (-) – Bactérias não fermentadoras da Lactose Se meio de cor amarelo => Lac + - Bactérias fermentadoras da Lactose
ONPG – Permite saber se a bactéria possui ou não permease. Resultados Cor inicial do meio – incolor Se meio incolor – Não possui β-galactosidade Se meio amarelo – Tem β-galactosidade – que a bactéria fermenta a lactose na presença de permeases.
OF – Serve para ver se a bactérias fermentam ou oxidam a glucose. Resultados Cor original do meio - verde
Se cor amarela( microrganismo anaeróbio facultativo) (é porque ocorre acidificação em todo o tubo) – tubo fechado Usa a glicose por
via fermentativa - tubo aberto
Se cor verde (microrganismo aeróbio estrito) – Tubo fechado
- Tubo aberto Usa a glicose por via oxidativa (ocorre acidificação no topo do tubo)
MR-VP
+ vermelho de metilo
Se vermelho
MR+
Se incolor
MR-
Acetoína
KOH + α naftol
Anel Púrpura
VP+
Incolor
VP -
MR – VP – Indica se a bactéria produz ácidos fortes a partir do piuvato
Ocorre baixa de Ph no meio quando o teste dá MR+
As reações são mutuamente exclusivas
MR+ - Produz ácidos fortes a partir do piruvato VP+ - Produz acetoína
Cor Original do meio
Verde
Azul - houve subida de Ph
Citrato +
Verde
Citrato -
Citratos - Uso de citrato como fonte de carbono
APP – Serve para saber se o microrganismo possui fenilalanina
desaminase
APP+ Cor verde na rampa – Tem fenilalanina desaminase
Por causa da formação de um complexo com ferro APP - Cor amarela na rampa – Não tem fenilalanina desaminase Indica a presença de ácidos provenientes da degradação da glicose
Púrpura
Púrpura
LDC +
Com
parafina
Púrpura
LDC+
Amarelo
Preença de ácidos provenientes da
degradação da glicose
Ausência de decarboxilases
LDC -
LDC/ODC - Serve para verificar a existência de descarboxilases de aminoácidos
- O microrganismo começa por degradar a glucose acidificando o meio. Quando esta tiver sido completamente utilizada, os microrganismos que possuem a descarboxilase vão utilizar o aminoácido presente no meio tornando-o alcalino. -É necessário cobrir com parafina líquida. - Os falsos positivos acontecem quando não usamos a parafina e há uma falsa alcalinização na superfície do meio. SIM – Produção de Indol a partir do Triptofano - Mobilidade - Formação de H2S Indol + - Fromação de anel Púrpura (vermelho) no tubo + Reagente de Erlich – Kovac’s Possui Triptofanases H2S – Formação de composto de cor preta Nota: Este meio e semeado em profundidade.
Nitratos – Redução de Nitratos NO3
- NO2- N2
NO3
- NO2- + Reagente A e B Vermelho – Bactéria tem nitrato redutases
NO3- NO2
- N2 + Reagente Incolor + Zinco Incolor Bactéria tem Nitrato Redutases NO3
-+ Reagente Incolor+Zinco Vermelho – Bactéria não tem Nitrato Redutases
Nitrato Redutases Nitrato Redutases
NaCl 6,5% ou PYR - determina a atividade da enzima pyrrolidonil arilamidase Teste positivo – Há turvação no meio – há crescimento bacteriano Teste negativo – Não há turvação do meio – não há crescimento bacteriano
Hidrólise da Esculina – meio contém Bílis e Esulina - Não crescem bactérias Gram neg. e também muitas de Gram positivo. - Crescem bem o Enterococcus e estes vão hidrolisar a esculina – Na presença de sais férricos presentes no meio este fica preto - A exceção neste meio é o S. bovis Resultados: Teste positivo – meio de cor preta Teste negativo – meio de cor amarela (cor original)
XLD – Xylose Desoxychocolate (xilose lisina deoxicolato) É usado para isolar enterobactérias patogénicas - Cor original do meio – vermelho
Microrganismo Crescimento Cor da Colónia
Proteus vulgaris Bom - Abundante Amarela
Proteus mirabilis Bom – Abundante Amarela
S. Thyphi Bom – Abundante Vermelha com pontos pretos
S. Typhimurium Bom – Abundante Vermelha com pontos pretos
Sigella dysenteriae Bom – Abundante Vermelha
Enterobater aerogenes Pobre Amarela
E.Coli Pobre Amarela
Staphylococcus Aureus Inibido -
SS –Destinado a isolar Salmonella e Sigella - Contém sais biliares e verde brilhante Cor original do meio – Rosa Alaranjado
Oraganismo Cor das colónias
Sigella Transparentes
Salmonella Transparentes com centro negro
MacConkey Sorbito Agar - A E. coli O157: H7 difere da maioria das outras estirpes de E. coli por ser incapaz de fermentar sorbitol. - No meio MacConkey sorbitol, a lactose é substituída por sorbitol. - A maioria das estirpes de E. coli fermentar sorbitol para produzir ácido, a E. coli O157: H7 não pode fermentar sorbitol, de modo que esta estirpe utiliza a peptona par a crescer. Isto eleva o pH do meio, permitindo que a estirpe O157: H7 possa ser distinguida de outras estirpes de E. coli.
Resultado: Positivo – Crescimento de colónias vermelhas
Ctalase Enzima intracelular que decompões o peróxido de hidrogénio encontrado no citoplasma de procariotas. 2H2O2 2H2O + O2
Teste Positivo – formação de bolhas Teste negativo – Não formação de bolhas Oxidase - Ultimo aceitador de eletrões no citocromo C - Encontrado em proteínas transmembranares de bactérias e mitocôndrias - Coverte O2 em H2O DNAse Enzima responsável pela quebra das ligações no DNA durante a apoptose. Verificar se o microrganismo possui a enzima desoxiribonuclease, a qual degrada o ácido nucléico (DNA). Resultados:
Formação de halo transparente, identifica Staphylococcus aureus; Ausência de formação de halo transparente, identifica Staphylococcus coagulase
negativa.
Coagulase É uma adesina produzida pelo staphylococcus aureus e staphylococcus intermedius. - No laboratório é usado para distinguir os diferentes tipos de staphylococcus. - Teste negativo exclui a presença de S. aureus. - A coagulase não é uma enzima. - Reage com a protrombina no sangue. Factor de coagulação Teste positivo – no eppendorf a solução fica colada ao fundo. Teste negativo - no eppendorf a solção escorre dentro do tubo. Adesina – complexo proteico que reconhece e se liga a recetores também proteicos na superfície das células do hospedeiro. Pili
top related