ensaios sorológicos
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UNIME SALVADORCURSO DE FARMCIA RELAO MICRORGANISMO E HOSPEDEIRO II
ENSAIOS SOROLGICOSDiscentes: Elisama Andrade; Jamile Cirne; Joelma de Aquino; Steeven Gonalves; Tamires Ribeiro; Z Gilvan.
AGLUTINAO
Formao de agregados;
Ocorre com partculas naturais e com partculas inertes;
Se processa em dois estgios. Distingue-se em direta e indireta.
Aglutinao Direta
Antgenos livres + anticorpos especficos; Utilizam-se partculas antignicas insolveis; Sistema ABO e Rh; Diagnstico de salmoneloses, leptospirose, toxoplasmose, etc.
Aglutinao indireta ou passiva
Aglutinao em Ltex semelhante a aglutinao direta; O ltex a partcula carreadora mais utilizada; utilizada para deteco de vrus ou antgenos virais.
Vantagens e Desvantagens
Vantagens: Baixo custo; Boa especificidade; Leitura visual; Facilidade de execuo. Desvantagens: Baixa sensibilidade; Acessibilidade molecular para interao Ag-Ac.
HEMAGLUTINAO
Aglutinao de hemcias; No uma reao sorolgica; No se estende a todos os vrus; Tem grande importncia para deteco de vrus hemaglutinantes em laboratrio.Partculas viraisAusncia de interao vrus-hemcia
Hemcias
Interao vrus-hemcia
Partculas virais Hemcias
Partculas virais
Hemcias
INIBIO DA HEMAGLUTINAOPerda da capacidade de hemaglutinao; Ocorre em dois estgios; Aplicvel apenas para vrus hemaglutinantes; Utilizado tanto para identificao de vrus, quanto de anticorpos.
INIBIO DA HEMAGLUTINAO1 Estgio 2 Estgio
FIXAO DO COMPLEMENTO Sistema constitudo por mais de 30 protenas e
glicoprotenas plasmticas que participam da defesa inata e adquirida;
Este sistema funciona em cascata e possui trs vias: Via Clssica(patgenos e Ac), Alternativa e da Lectina. Os eventos inicias em todas as vias consistem em uma seqncia de reaes de clivagem.
* O teste fixao do complemento tem como base a via clssica.
FIXAO DO COMPLEMENTO
Funes biolgicas atribudas ativao do sistema complemento:Opsonizao: permite a fagocitose; Quimiotaxia: a ativao do SC atrai cel(s) para olocal da inflamao;
Anafilaxia: estimula o ac desencadeando aofarmacolgica na processo inflamatrio agudo;
FIXAO DO COMPLEMENTO
Elementos necessrios para a realizao do teste:
Soro teste; Sistema complemento; Sistema hemoltico ( hemcias recobertas com Ag); Estufa para incubao; Centrfuga
FIXAO DO COMPLEMENTO
Etapas da Fixao do Complemento:O teste fundamenta-se na capacidade de complexos Ag-Ac de fixar e inativar molculas de complemento presentes no soro.
realizado em duas etapas:Na 1; a amostra o Ag e o complemento so misturados; Na 2; adicionado o sistema indicador.
FIXAO DO COMPLEMENTO
Resultados :
Complemento fixado na 1 etapa
as hemcias ficaram intactas que Ag- Ac eram especficos um para o outro; Se, o Ac no for especfico para o Ag o complemento no ser fixado permanecendo livre e ativo;Quando o sistema revelador adicionado, o complexo ativo ir se fixar no complemento hemcia Ac, ativando a cascata e lisando as hemcias.
FIXAO DO COMPLEMENTO
Vantagens: Baixo
custo; Boa especificidade; Boa sensibilidade; Permite a realizao de um grande n de amostras simultaneamente.
FIXAO DO COMPLEMENTO
Desvantagens: Probabilidade para falso-negativo: Hemcias fragilizadas (velhas); Soro no-inativado; No adio do ag.
Probabilidade para falso-positivo: Perda da atividade do complemento; Diluies inadequadas; Contaminao de solues;
IMUNOFLUORESCNCIA
Caractersticas Bsicas:
Permite a deteco e localizao de antgenos em clulas e tecidos; Utiliza anticorpos especficos marcados com fluorcromos; Podem detectar e localizar anticorpos em fludos biolgicos, utilizando seu antgeno correspondente; Teste qualitativo/semi-quantitativo; Mtodo de alta sensibildade e alta especificidade.
IMUNOFLUORESCNCIA DIRETA
VantagensAlta especificiade e sensibilidade; Possibilidade de deteco de protenas intracelulares e de sua localizao
DesvantagensNecessidade de um conjugado para cada antgeno que se deseja identificar e localizar; Subjetividade da leitura; Equipamento de alto custo (microscpio).
Aplicaes
Deteco de microorganismos em fezes, urinas, secrees, cortes de tecidos, etc... Fenotipagem de clulas tumorais;
Bacteriologia: Streptococcus do tipo A.
IMUNOFLUORESCNCIA INDIRETACaractersticas Limitada: utilizada para amplificar o sinal e aumenta a sensibilidade; Pode ser empregado para pesquisa de antgenos e anticorpos.
IMUNOFLUORESCNCIA INDIRETA
VantagensSensvel; Fcil de ser controlado.
Desvantagens
Necessita de mais tempo e mais reagente.
IMUNOFLUORESCNCIA INDIRETA
Antgeno T cruzi
Anticorpo (anti-T cruzi)
ELISA (Enzyme-Linked Immunosobent Assay)
ENGVALL E PERLMANN, EM 1971; Caractersticas Bsicas Imobilizao de um dos reagentes em uma fase slida, enquanto outro reagente pode ser ligado a uma enzima, com preservao tanto da atividade enzimtica como da atividade imunolgica do anticorpo; Principais tipos: Indireto : Ac Sanduche: Ag Competio: Ag molecular Captura: Acs (IgM)
ELISA
Vantagens Elevada sensibilidade e especificidade; Rapidez e baixo custo; Objetividade de leitura; Possibilidade de adaptao e diferentes graus de automao. Desvantagens Mo de obra especializada; Degradao de reagentes; Erros de pipetagem.
ELISA DIRETO OU SANDUCHEAnticorpo
Fonte de protenas estranhas ao sistema Lavagens
Conjugado anti
ELISA INDIRETOAntgeno Fonte de protenas estranhas ao sistema Soro anti Conjugado anti
Lavagens Lavagens
ELISA DIRETO OU SANDUCHEAnticorpo
Fonte de protenas estranhas ao sistema Lavagens
Conjugado anti
ELISA POR COMPETIOAc Fonte de protenas estranhas ao sistema Antgeno Conjugado
Lavagens
CAPTURA DE IgMAntgeno Ac IgG Fonte de protenas estranhas ao sistema
Conjugado anti-IgMAc IgM especfico
Lavagens
INTERPRETAO DOS RESULTADOS
Elisa Indireto: A intensidade da cor diretamente proporcional concentrao de Ac da amostra pesquisada Elisa Direto ou Sanduche: A intensidade da cor diretamente proporcional concentrao de Ag da amostra Elisa por Competio: A intensidade da cor inversamente proporcional concentrao de Ag da amostra.
INTERPRETAO DOS RESULTADOS
REFERNCIASManifestao Primria da Reao Ag-Ac Disponvel em: Acesso em: 27/03/2011
FERREIRA, Avila; Diagnstico laboratrial. 2 ed. RJ, 2001. WIGG, Marcia; et al; Introduo virolugia humana; 2 ed, RJ, 2008. ABBAA, Abul K. Et al. Imunologia. 5 ed. SP,1999
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