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AJCristóvão, Departamento Zoologia Universidade Coimbra 2003

A Parede Celular emBactérias

Tem como função:

-Manter as formas característicasdas células-Protecção contra alterações depressão osmótica-Fornecer uma plataforma rígidapara ligação dos apêndicessuperficiais

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Composta por umamacromolécula chamadapeptidoglicano, tambémdesignada por mureína.

ComposiComposiçãção eo eestrutura da paredeestrutura da parede

celularcelular

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1. Um esqueleto polissacar Um esqueleto polissacaríídeodeo

A. ácido N-acetile muramico(Mur)

B. N-acetile glucosamina (Gln)

2.2. CadeiasCadeias pept peptíídicasdicas laterais lateraiscontendo

A. aminoácidos D- e L-

B. ácido diaminopimelico (emalguns casos)

C. As cadeias laterais formampontes cruzadas,que podem variar entreespécies.

PeptidoglicanoPeptidoglicanoconsiste em:consiste em:

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r r r rr r

CitoplasmaCitoplasmaCitoplasma

rrrr

ácido lipoteóico

Peptidoglicano- ácido teóico

Membrana Citoplasmática

Envelope celular Gram +Envelope celular Gram +

CitoplasmaCitoplasmaCitoplasmaMembrana (citoplasmática) interna

Mem

bra

na E

xte

rna

Lipopolissacarídeo

r

Porina

Lipoproteína castanhaPeptidoglicano

Envelope celular Gram-Envelope celular Gram-

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Gram Gram positivaspositivas e GramGramnegativasnegativas

A coloração de Gram é baseadaem características quereflectem as diferençasestruturais entre os 2 grupos.

As diferentesAs diferentescaractercaracteríísticas dasticas da

parede celularparede celularpermite formar 2permite formar 2grandes Gruposgrandes Grupos

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Alta (devido àpresença de umamembranaexterna)

BaixoConteúdo lipidicoe delipoproteínas

AltaVirtualmentenenhum

Lipopolissacarideo

PresenteAusenteMembranaexterna

PresenteAusenteEspaçoperiplásmico

AusentePresente emmuitas

Ácidos teóicos

fina (camadaúnica)

Grossa (multi-camada)

Canada depeptidoglicano

Pde serdescorada erecorada comsafranina

Retem cristaisvioleta e ficapúrpura-violeta

Reacção ao testeGram

Gram-NegativaGram-PositivaCaracteristicas

Características dasBactérias Gram-Positivas e

Gram-Negativas I

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4 anéis no corpobasal

2 anéis no corpobasal

Estruturaflagelar

Endotoxinasprimárias

Toxinasproduzidas

BaixaAltaResistência físicaà ruptura

BaixaAltaInhibição porcorantes básicos

BaixaAltaSusceptibilidadea detergentesanionicos

BaixaAltaResistência àazida de sódio

BaixaAltaResistência àsecagem

Gram-NegativaGram-PositivaCaracteristicas

Características dasBactérias Gram-Positivas e

Gram-Negativas II

Exotoxinaspromárias

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Tipos de Parede Celular(Gram)

COLORAÇÃO DE GRAM

(POSITIVO E NEGATIVO)

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• Objectivo– Ver morfologia celular– De diagnóstico: Que tipo de

parede é que uma bactériapossui

– Classificação: O tipo de paredepermite separar as células em2 grandes grupos

Coloração de Gram

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• Cristal Violeta (violeta)– Coloração primária; coloração positiva– A parede celular cora de violeta

• Iodo de Gram– Mordante– Combina-se com os CV para formar um

complexo insolúvel que fica aprisionado nascamadas de peptidoglicano mais grossas

• Etanol/cetona– Descolorante– Os complexos CV-I são lavados para for a

das células Gram-, porque as camadas depeptidoglicano não são suficientementeespessas para osreter; atravessam amembrana externa

• Safranina (pink)– Cora todas as célula mas somente as Gram-

são visualizadas, nas outras sobrepõem-se ovioleta.

Reagentes para Coloraçãode Gram

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Colocar uma gota de água na laminae espalhar com ansa um pouco de células

Secar ao ar

Fixar à chama (NÃO QUEIMAR OS DEDOS)

Colocar uma gota de corante e após o tempo necessário

escorrer

Colocar uma gota de óleo deimersão

e observar ao microscópioampliação 100x

Óleo

100x

lamina

Adaptado de BROCK

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PASSO 1

PASSO 2

Após secar e fixar comcalor, colocar noreagente cristal violeta 1min

TODAS as células ficamvioletas

Após lavar com umpouco de água, colocarcom iodo de Gram 1 min

TODAS as célulascontinuam violetas

PASSO 3

PASSO 4

Após lavar com um poucode água, colocar cometanol/acetona 30 s

Células Gram+ violetas,restantes incolores

Após lavar com umpouco de água, colocarem safranina, 1 minGRAM-

Após lavar com umpouco de água, e secarcom um papel de filtro,as células Gram+ ficamvioletas e as Gram-ficam vermelho a rosado

GRAM+

Adaptado de BROCK

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Exemplos deColorações Gram

Gram+ Gram-

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• Géneros que formam endósporos– Bacillus– Clostridium

• É um mecanismo desobrevivência, não é parareprodução (só se formamquando o ambiente se tornademasiado agressivo para viver)

• Estas estruturas estão dormentese podem sobreviver eternamente,porque são extremamente difíceisde destruir

Endósporos

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Formação de umEndósporo

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• Interesse:– Para diagnosticar algumas

doenças– Algumas doenças são causadas

por endósporos– Como são praticamente

indestrutíveis algumas doenças,as bactérias que os formampodem ser particularmentepatogénicas e por issoperigosas, por ex o Clostridiumbotulinum, que causa obotulismo.

Coloração deEndósporos

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• Verde Malaquite (verde)– O aquecimento ajuda a passar a parede

do endósporo– Só se cora o esporo e não a parede

celular• Safranina (vermelho/rosa)

– Agente contrastante– Não cora o endósporo– Fornece contraste para o esporo.

Reagentes a usar

Procedimento1. Fazer um esfregaço2. Colocar num suporte com água a ferver por baixo3. Corar com malaquite 5% 5 min (sobre água a ferver)4. Lavar com água5. Corar com safranina 30s6. Lavar com água7. Observar ao microscópio (Objectiva de imersão)

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Exemplo deendósporo corado