adv/hmpv/rv assay (panther fusion system) .o panther fusionâ„¢ adv/hmpv/rv assay...

Download AdV/hMPV/RV Assay (Panther Fusion System) .O Panther Fusionâ„¢ AdV/hMPV/RV Assay © um exame de diagn³stico

Post on 26-Jan-2019

213 views

Category:

Documents

0 download

Embed Size (px)

TRANSCRIPT

AdV/hMPV/RV Assay (Panther Fusion System)

Panther Fusion AdV/hMPV/RV

Para efeitos de diagnstico in vitro.

Exclusivamente para exportao dos Estados Unidos.

NDICEInformaes gerais . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

Utilizao prevista . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2Resumo e explicao do teste . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2Princpios do procedimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3Advertncias e precaues . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4Requisitos de conservao e manuseamento de reagentes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6Colheita e conservao de espcimes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7Transporte de espcimes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8

Panther Fusion System . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 Reagentes e Materiais Fornecidos para o Panther Fusion AdV/hMPV/RV Assay . . . 9Materiais necessrios mas disponveis separadamente . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10Procedimento de Teste no Panther Fusion System . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .11Notas processuais . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12

Controlo de qualidade . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12Interpretao de resultados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13Limitaes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14Desempenho do Panther Fusion System Assay . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15

Desempenho clnico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15Sensibilidade analtica. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16Reatividade . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17Especificidade analtica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19Interferncia competitiva . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21Interferncia. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22Transmisso/Contaminao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23Preciso do ensaio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23

Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25

AdV/hMPV/RV - Panther Fusion System 1 AW-16164-601 Rev. 002

Informaes gerais Panther Fusion AdV/hMPV/RV

Informaes gerais

Utilizao previstaO Panther Fusion AdV/hMPV/RV Assay um exame de diagnstico in vitro de PCR (RT-PCR) multiplex, em tempo real, para a deteo e diferenciao rpidas e qualitativas do adenovrus (AdV), metapneumovrus humano (hMPV) e rinovrus (RV). Os cidos nucleicos so isolados e purificados a partir de espcimes de exsudado nasofarngeo obtidos de pessoas que apresentam os sinais e sintomas de uma infeo do trato respiratrio.

Este ensaio visa ajudar no diagnstico diferencial de infees em seres humanos pelo adenovrus, metapneumovrus humano e rinovrus. Os resultados negativos no excluem as infees pelo adenovrus, metapneumovrus humano e rinovrus, e no devem ser usados como a nica base para o tratamento ou outras decises de gesto. Este ensaio foi concebido para ser utilizado no Panther Fusion System.

Resumo e explicao do testeOs vrus respiratrios so responsveis por uma vasta gama de infees graves do trato respiratrio, incluindo a constipao comum, gripe e difteria, e representam a causa mais comum da contrao de doenas graves nos Estados Unidos. A gravidade da doena pode ser especialmente alta em jovens, imunodeprimidos e idosos. O diagnstico exato e atempado da causa das infees do trato respiratrio tem muitos benefcios. Estes incluem um melhor tratamento do paciente, assegurando um tratamento antiviral apropriado (por exemplo: o oseltamivir para a gripe), diminuindo o custo total dos cuidados, reduzindo a seleo de organismos resistentes a antibiticos devido ao uso excessivo e inadequado de antibiticos,1 ajudando os profissionais de controlo de infees a fornecer as medidas adequadas minimizao da propagao nosocomial, e fornecendo informaes valiosas s autoridades de sade pblica sobre os vrus atualmente em circulao na comunidade.2

Os adenovrus so membros da famlia Adenoviridae, os quais so vrus icosadricos de tamanho mdio (90 a 100 nm), no encapsulados, com um DNA de cadeia dupla.3 Neste momento, nos seres humanos h mais de 50 tipos de adenovrus de sete espcies (A a G).4 Os adenovrus mais comuns causam doenas respiratrias, as quais podem variar desde a constipao normal pneumonia, difteria, e bronquite.3 Dependendo do tipo, os adenovrus podem causar outras doenas, tais como gastroenterite, conjuntivite, cistite e, embora menos frequentemente, doenas neurolgicas.3 As crianas e as pessoas com um sistema imunolgico debilitado correm um alto risco de desenvolver doenas graves por causa de uma infeo pelo adenovrus.3 O adenovrus circula durante o ano inteiro e os surtos deste tipo de vrus so mais comuns no final do inverno, na primavera e no incio do vero, mas podem ocorrer em qualquer estao.5

Depois da descoberta do hMPV em 2001, este vrus foi identificado no mundo inteiro. O hMPV um agente patognico respiratrio comum, especialmente presente em bebs e crianas. Este vrus est associado s infees do trato respiratrio superior e inferior, e podem ser um fator desencadeante da asma.6 Os sintomas normalmente associados ao hMPV incluem tosse, febre, congesto nasal e falta de ar. Os sintomas clnicos da infeo pelo hMPV podem progredir para a bronquiolite ou pneumonia, e assemelham-se a outros vrus que causam infees do trato respiratrio superior e inferior. Estima-se que o perodo de incubao seja de 3 a 6 dias, e a durao mdia da doena pode variar consoante a gravidade, mas assemelha-se a outras

AdV/hMPV/RV - Panther Fusion System 2 AW-16164-601 Rev. 002

Panther Fusion AdV/hMPV/RV Informaes gerais

infees respiratrias causadas por vrus.7 O ponto mximo de incidncia do hMPV ocorre principalmente na primavera, em zonas temperadas.8

Membros da famlia Picornaviridae, os rinovrus so os agentes patognicos causadores da maioria das infees respiratrias virais, e esto associados s exacerbaes agudas das doenas respiratrias, incluindo asma, sinusite, otite mdia, e doena pulmonar obstrutiva crnica.9 Um determinado nmero de estudos confirma que o rinovrus a causa mais comum da "constipao comum" e afeta todas as faixas etrias.8 Os sintomas geralmente incluem inflamao da garganta, defluxo, tosse, espirros, olhos lacrimejantes, dores de cabea e dores de corpo. A maioria das pessoas recupera num prazo de 7 a 10 dias.8 Os rinovrus circulam o ano inteiro e so mais frequentes na primavera e no inverno.8

Princpios do procedimentoO Panther Fusion AdV/hMPV/RV Assay envolve os seguintes passos: lise celular da amostra, captura de cidos nucleicos e transferncia da eluio, e uma RT-PCR multiplex em que os analitos so simultaneamente amplificados, detetados e diferenciados. A captura e eluio de cidos nucleicos so feitas num tubo individual no Panther Fusion System. O eludo transferido para o tubo de reao do Panther Fusion System que contm os reagentes de ensaio. A RT-PCR multiplex depois realizada para os cidos nucleicos eludos no Panther Fusion System.

Captura e eluio de cidos nucleicos: Antes do processamento e realizao de testes no Panther Fusion System, os espcimes so transferidos para um tubo de lise para espcimes que contm um meio de transporte de espcimes (STM), que lisa as partculas virais, liberta os cidos nucleicos e os proteger da degradao durante o armazenamento.

O Controlo Interno S (IC-S) adicionado a cada espcime de teste e efetua o controlo atravs do Reagente de Captura S Panther Fusion (wFCR-S). O IC-S no reagente monitoriza o processamento, amplificao e deteo de espcimes.

Os oligonucletidos de captura hibridizam-se com os cidos nucleicos nos espcimes de teste. Os cidos nucleicos hibridizados so depois separados do espcime num campo magntico.

Os passos de lavagem retiram componentes estranhos do tubo de reao. O passo de eluio, elui os cidos nucleicos purificados. Durante o passo de captura e eluio dos cidos nucleicos, os cidos nucleicos so totalmente isolados dos espcimes.

Transferncia de eluio e RT-PCR: Durante o passo de transferncia da eluio, os cidos nucleicos eludos so transferidos para um tubo de reao Panther Fusion que j contm a mistura inicial reconstituda e leo.

Para o RV e o hMPV, assim como para os alvos de controlo interno, a amplificao ocorre via RT-PCR. A transcriptase inversa gera cpias do DNA na sequncia-alvo. Para o AdV, a amplificao do alvo ocorre por meio de PCR. Para todos os alvos, "primers" e sondas frontais e inversos especficos amplificam os alvos, enquanto simultaneamente detetam e discriminam mltiplos tipos-alvo atravs de PCR multiplex.

O Panther Fusion System compara o sinal de fluorescncia a um "cut-off" predeterminado, para produzir um resultado qualitativo pela presena ou ausncia do ana