8-met e mev
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Universidade Federal do Par Disciplina: Microscopia Analtica em Biotecnologia
Histrico-MET
1897 - J.J. Thomson - eltron. 1924 - De Broglie - um eltron em movimento = a ondas. 1926 Busch - focar um feixe de eltrons em lente magntica cilndrica 1931 - 1. Microscpio Eletrnico (Ruska). Nobel-dcada de 80 1939 - 1. modelo comercial pela Siemens.Chapa fotogrfica
Microscpio Eletrnico de Transmisso METProf. Dr. Susana Milhomem
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Princpios do METM.O. FONTE LENTES LUZ VISVEL DE VIDRO M.E.T.
Componentes do MET
Fonte geradora de eltrons Sistema de lentes eletromagnticas Tela revestida por substncia que se torna fluorescente quando bombardeada pelo feixe de eltrons, formando assim a imagem Sistema funciona sob vcuo da ordem de 10-7 Torr (1Torr=1 mmHg)
ELETRONS ELETROMAGNTICAS
LIMITE DE 0,2m ou 0,2 nm RESOLUO 200 nm FORMAO TRANSPARNCIA ELETRONLUCIDEZ DE IMAGEM
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MET
MO
Fonte
Aquecimento
Fonte
Filamento Escudo de Wehnelt Anodo +
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Lentes
Trajetria com efeito de solenide MET MO
Lentes
Aperfeioamento das LentesFerro doce: concentra e aumenta a fora da lente
Peas polares concentram os eltrons em um ponto do eixo do solenide
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Lentes
Outras caractersticas
Condensadoras Objetivas Intermediria Projetora
LIMITE DE RESOLUO Radiano > Grau x 57,30 d=0,61 =0,37A no MET a 100 KV =abertura da objetiva em radianos (0,5=0,01 rad) Assim, d=22,57A Aberraes:
Quanto menor for o dimetro da abertura, maior ser o contraste da imagem
Esfrica : do condensador Cromtica: da objetiva Astigmatismo: variando a corrente das lentes
Gerando imagens-Interao dos e- com a amostra
Gerando imagens
1-Ser desviado pela amostra 2-Atravessar a amostra sem desviar 3-Ser absorvido pela amostra 4-Provocar a emisso de e- pela amostra 5-Provocar a emisso de radiao eletromagntica pela amostra 6-Provocar a emisso de ons de carga positiva pela amostra
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Gerando imagens
Amostras
Fixao Ps-fixao Desidratao Incluso Microtomia Contrastao
Fixao - Formaldedo Processamento Tampo Desidratar - acetona
Ultramicrtomo
Osmium tetroxide Glutaraldehyde
Infiltrao em ceras e resinas
Contrastao com sais Acetato de uranila/citrato de chumbo Grade de cobre que serve de suporte p/ amostra em MET Ultramicrotomia
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Clula observada em MET
Localizao de Protenas no MET
Congelamento-fratura
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Aparelho de Criofratura-Obteno das clulas -Fixao em Glutaraldedo -Crioproteo -Congelamento das clulas -Fratura -Etching (opcional) -Metalizao com platina e carbono (sombreamento) -Limpeza da rplica
Universidade Federal do Par Disciplina: Microscopia Analtica em Biotecnologia
Histrico-MEV1965 MEVdesenvolvido pela empresa Cambridge Instruments.
Microscpio Eletrnico de Varredura MEVProf. Dr. Susana Milhomem
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Microscpio Eletrnico de Varredura1965- PRIMEIRO MODELO COMERCIAL Composio: 1. Canho de eltrons 2. A amostra
3. Um sistema de captao de eltrons secundrios que coleta o sinal e o amplifica4. um sistema de captao de imagem formada
Microscpio Eletrnico de Varredura
Microscpio Eletrnico de Varredura
Defletor de feixes
Escaneamento
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Microscpio Eletrnico de Varredura
Feixe e Amostra
Captao e amplificao do sinal
Composio da imagem
Visualizao lateral da amostra Coletor Cintilador Ftons Fibra tica Fotomultiplicador
Visualizao superficial da amostra
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Foco e lente
Foco e lentes
Abertura
Abertura
mais fino feixe abaixo a abertura
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Preparao das amostras
Fixao Desidratao Secagem gua por ar, remover acetona e etanol por CO2 Evaporao de ouro
Cmara de evaporao
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Imagens
Imagens
Imagens
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Imagens
Imagens
Imagens
Giardia lamblia
Benchimol, M. Protist, Vol. 155, 33-44, 2004.
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Vdeos
RefernciasLivro Mtodos de Estudo da Clulas Captulos 3, 4, 5 e 6.
Microscpio de Tunelamento
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