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12-04-2007 1 Análise de OGM técnicas analíticas detectam: porção de DNA do gene inserido PCR (polymerase chain reaction) é método mais usado proteína expressa pelo gene ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) LFS (lateral flow “strip tests”) Análise de OGM necessários métodos muito sensíveis proteínas expressas a muito baixas concentrações ppm ɼ g/g métodos usados: HPLC electroforese capilar ensaios imunológicos muito sensíveis (ppb, ppt) grande especificidade ELISA LFS western blot MS Métodos de análise de proteínas

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12-04-2007

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Análise de OGM

técnicas analíticas detectam:porção de DNA do gene inserido

PCR (polymerase chain reaction) é método mais usadoproteína expressa pelo gene

ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)LFS (lateral flow “strip tests”)

Análise de OGM

necessários métodos muito sensíveisproteínas expressas a muito baixas concentrações

ppm ɼ g/g

métodos usados:HPLCelectroforese capilarensaios imunológicos

muito sensíveis (ppb, ppt)grande especificidadeELISALFSwestern blot

MS

Métodos de análise de proteínas

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Análise de OGM

ELISAusa 2 anticorpos

um é específico para um antigeneoutro está ligado covalentemente a uma enzima e reage com

complexos antigene-anticorpoquantidade de reagente ligado à enzima que resta após

análise depende da quantidade de proteína a analisar existente na amostra

presença da enzima demonstrada pela adição de uma solução de uma molécula incolor (substrato)

convertida em solução colorida pela enzimacor proporcional ao teor de proteína (antigene)

ensaio sandwichensaio competitivo

Métodos de análise de proteínas

elisa.mov

Análise de OGM

ELISA sandwichanticorpo ligado à proteína é imobilizado numa superfície sólida

placa de micro-titulação de 96 poçosnormalmente poliestirenopermite processamento simultâneo de várias amostras

material a ser testado é extraído e tamponizadoanticorpo na placa é incubado com amostra

captura proteína a analisar na amostra

Métodos de análise de proteínas

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Análise de OGM

ELISA sandwichadiciona-se anticorpo detector

liga-se ao antigenejunta-se anticorpo ligado a uma enzima

liga-se ao anticorpo detectoradiciona-se o substrato

convertido em forma detectável pela enzima

Métodos de análise de proteínas

Análise de OGM

ELISA sandwichcor resultante indica concentração do antigene presente na

amostradirectamente proporcional

Métodos de análise de proteínas

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Análise de OGM

LFSmuito simplespermite determinar se concentração de uma proteína está acima

ou abaixo de um dado patamarteste de gravidez

semelhantes aos ELISA sandwichusa pequenas esferas coloridas ligadas aos anticorpos para

produzir um sinal positivoamostra separada da proteína alvo por imobilização do

anticorpo de captura numa membrana porosaamostra atravessa anticorpo imobilizado por capilaridade

da membranaELISA mais sensível que LFS devido à presença da enzima

nalguns casos LFS pode detectar até ppb

Métodos de análise de proteínas

Análise de OGM

LFS

Métodos de análise de proteínas

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Análise de OGM

LFSimobiliza-se um anticorpo capaz de se ligar à proteína alvo

numa zona da membrana porosaoutro anticorpo capaz de se ligar à proteína reveste a superfície

de pequenas esferas coloridassecas e colocadas antes da zona de teste

quando amostra líquida as reconstitui, fluem por capilaridade junto com amostra

proteína da amostra liga-se à partícula com o anticorpoatravessa a membrana até ser capturada pelo anticorpo

imobilizado na zona de testevai-se formando uma linha colorida

indica presença de antigene na amostra

Métodos de análise de proteínas

Análise de OGM

Western blotusado sobretudo em laboratóriocombina 2 tecnologias

electroforese em gel de poliacrilamida (PAGE)separa diversas proteínas numa mistura, segundo PM

ensaio imunológicodetecta proteína específica após separação

detecção até ao nível de picograma

Métodos de análise de proteínas

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Análise de OGM

Western blotpreparação da amostra para PAGE

aquecer em tampão contendo agentes redutores e detergentes

desnaturação proteicaamostra aplicada no gel e separada por electroforese

Métodos de análise de proteínas

Análise de OGM

Western blotproteínas transferidas do gel para uma membrana de

nitroceluloseincubada com solução de complexo anticorpo-enzima

formação de banda corada na zona em que proteína fica imobilizada

cálculo de PM por comparação da posição relativamente a outras proteínas de PM conhecido

Métodos de análise de proteínas

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Análise de OGM

Western blotsó reage com proteínas desnturadasanálise de alimentos muito processados

capaz de determinar teores muito baixos de proteína

Métodos de análise de proteínas

Análise de OGM

diversos ensaios de PCR dão resultados qualitativos ou quantitativosmais usado é o teste de varrimento

varrimento da molécula de DNA para encontrar as sequências de iniciação e terminação do gene inserido

Métodos de análise de DNA

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Análise de OGM

Métodos de análise de DNA

Análise de OGM

PCRdetecção de características genéticas não aprovadasdetecção de mistura de alimentos

OGM e não OGMnecessária extracção de DNA de boa qualidade a partir da

amostrapor vezes difícil em alimentos muito processados

mais fácil em alimentos não processadosamostras bem homogeneizadas

Métodos de análise de DNA

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Análise de OGM

PCRDNA extraído é amplificado por PCR

pequena cadeia de DNA sintético (primer)sequência complementar à do DNA alvo

incubação e replicaçãoaté produção de cópias suficientes para permitir detecção

separação e reacção com produção de coridentificação e quantificação da % OGM

electroforese em gelcomparação com padrão

Métodos de análise de DNA

Análise de OGM

PCRcaracterização do DNA pode ser feita por:

digestão com enzimas de restriçãohibridização com sondassequenciação do DNA

só efectuadas em casos específicosraramente na análise de alimentos

análise por PCR pode ser automatizada e simplificada por utilização de kits

Métodos de análise de DNA

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Análise de OGM

PCRanálise quantitativausada quando legislação obriga a rotulagem acima de

determinada concentraçãogene endógeno (do material hospedeiro) tem que ser incluido

na análiseserve de gene de referênciapermite calcular teor de OGMmesmo nº de cópias para todas as variedades de planta

a ser testadascarcterístico para a espécie e não reagir com variedades

relacionadasmétodos baseados em PCR competitiva (real-time PCR)

Métodos de análise de DNA

Análise de OGM

PCRreal-time PCR

semelhante a PCR “normal”efectuada em tubo seladovariação na concentração dos produtos de reacção

seguida através de sondas fluorescentessondas hibridizam com secções de DNA das

novas cadeiasvalores permitem calcular quantidades de DNA

modificado relativamente ao da planta hospedeira

Métodos de análise de DNA

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Análise de OGM

PCRPCR específico

quando é necessário identificar a origem do material geneticamente modificado (organismo)

avaliar da existência de características não aprovadas para uso

primers desenhados para identificar regiões do genoma que representam tanto o DNA nativo como o DNA transgénico

ambos identificados num único tubo de reacçãoensaio pode ser qualitativo ou quantitativo

Métodos de análise de DNA

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas

métodos de resíduos múltiplos (MRMs)usados para detectar e medir múltiplos resíduos em diversos

alimentoscapazes de dar estimativas de confiança para maioria dos

pesticidas a níveis iguais ou inferiores aos de tolerânciaintegram passos de:

preparação da amostraextracçãopurificaçãoseparação cromatográfica com detecção on-line

quantificação automática

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas

métodos de resíduos múltiplosFDA e USDA usam 10 méodos

8 com GC2 com HPLC

nenhum MRM capaz de detectar todos os tipos de resíduo em todos os tipos de alimento

compromisso entre nº de reíduos, gama de alimentos e níveis de resíduos mensuráveis

principal vantagemvariedade de resíduos que pode ser determinada

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas

métodos de resíduo único (SRMs)usados para medir um único analito

também usado para medir seus metabolitos principais e produtos de transformação com relevância toxicológica

geralmente usam mesmos passos que MRMscada passo optimizado para analito de interesse

geralmente mais rápidos e com limites de detecção mais baixos que MRMs

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas

métodos semiquantitativos e qualitativoscapazes de detectar um nº limitado de resíduos de pesticidas

semelhantestambém designados métodos de varrimento

capazes de analisar um grande nº de amostras para a presença d um nº limitado de resíduos de pesticidas num curto período de tempo

métodos semiquantitativos dão uma estimativa da gama de concentrações de um resíduo

métodos qualitativos detectam pesticidas presentes acima de um nível pré-determinado

métodos baratos, rápidos e simplesusam:

TLCinibição enzimáticaensaios imunológicos

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas – métodos quantitativos

passos básicospreparação da amostra

planta separada em fracções comestíveis e não comestíveiscortadas, trituradas ou maceradas

extracçãosolvente adequadofiltração

isolamentopurificação do extracto bruto

separaçãocomponentes do extracto purificado separados por partição

entre fases móvel e estacionáriadetecção e quantificação

características físicas dos componentes separados na fase móvel medidas num detector

sinal relacionado com concentração

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas – métodos quantitativos

preparação da amostrapesticidas ocorrem como resíduos na superfície das plantas

distribuição não uniformepode haver contaminação de tecidos interiores se

existirem danos na superfíciefrutos e legumes não são lavados antes da análise

apenas remoção de folhas externas danificadasquando película externa não é consumida, removem-se

2 – 3 mm externoscebolas, melões, kiwis, ...

sementes e pedúnculos removidosdegradação de pesticidas pode ser acelerada por maceração

da amostrapartículas de solo ou outros contaminantes visíveis podem ser

removidos por acção mecânica suave

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas – métodos quantitativos

extracçãoobjectivo:

recuperar máxima quantidade possível de analito numa solução

solventes usados:acetonitrilo ou acetona

adição de sal anidro (NaCl, Na2SO4) para absorver água

OUadição de água para facilitar purificação por partição

contra outro solvente orgânicopode ocorrer formação de emulsões

minimizado por adição de um sal à fase aquosapodem ser destruídas por centrifugação

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas – métodos quantitativos

extracção (processo alternativo, mais simples)amostra colocada numa suspensão com ~70% H2Oadicionam-se acetonitrilo e diclorometano ou acetona e éter

de petróleojunta-se NaCl

agita-se fortementefase orgânica seca sobre Na2SO4

redução de volume, diluída em solvente adequado e de novo concentrada

passos repetidos até completa remoção dos solventes de extracção

podem interferir com detectorconcentrado pode ser directamente injectado em GC

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas – métodos quantitativos

isolamentoextracto bruto parcialmente purificado antes da separaçãoanalitos separados de interferentes na detecçãograu de isolamento depende do tipo de detector e da

cromatografiapasso mais moroso e mais sensível a errosextracto bruto (água-acetona ou água-acetonitrilo)

particionado contra solvente orgânico relativamente apolar

fase orgânica levada à securaresíduo pode ainda ser purificado por cromatografia em

colunaadsorção ou exclusão molecular

depende do analito e da matriz

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas – métodos quantitativos

isolamento (técnicas alternativas)extracção em fase sólida (SPE)

pequenas quantidades de material de empacotamento em pequenas colunas ou discos

não reutilizáveispurificarconcentrarderivatizar

menos frequente

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas – métodos quantitativos

isolamento (técnicas alternativas)microextracção em fase sólida (SPME)

fibras revestidas com um polímero imersas em extracto aquoso ou retidas no espaço de cabeça de uma amostra

analitos difundem para polímeroapós equilíbrio, fibra colocada no injector do GC

desorção térmica dos analitos para a coluna

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas – métodos quantitativos

isolamento (técnicas alternativas)extracção assistida por micro-ondas

tempo de extracção e volume de solvente fortemente reduzidos

operação a temperatura superior ao ponto de ebulição do solvente

transferência rápida do analito para a fase do solvente

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas – métodos quantitativos

isolamento (técnicas alternativas)extracção acelerada

pequenas quantidades de solventes a temperatura e/ou pressão elevadas

até 200 ºC e 10.3 – 13.8 MPatempos curtos de operação

< 10 min

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas – métodos quantitativos

derivatizaçãonormalmente pré-coluna

por vezes pós-colunadiversas reacções de derivatização para pesticidas

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas – métodos quantitativos

separaçãoGC

colunas de empacotamentocolunas capilares

melhor resoluçãomelhores limites de detecção

colunas megaboreintermédias entre capilares e de empacotamento

melhores características de ambos os formatoselevada resolução, mesmo a fluxo elevadomaior capacidade que as capilares

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas – métodos quantitativos

separaçãoGC

detectores tiram partido do facto de a maioria dos pesticidas conterem heteroátomos (não H, C, O)

FID (ionização de chama)S ou P

ECD (captura electrónica)halogéneos, S, N

condutividadehalogéneos, S, N

termo-iónicosN, P

MSelevada selectividade qualitativa e quantitativa

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas – métodos quantitativos

separaçãoGC

padrão interno mais usado:clorpirifos

pesticida bem separado na maioria das colunasdetectado em todos detectores de GC

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas – métodos quantitativos

separaçãoHPLC

restrito a analitos não voláteis ou termicamente instáveisN-metil carbamatos

vantagem:isolamento dos analitos é menos extenso

detectores:UVfluorescência

por vezes necessário derivatizarpré ou pós-coluna

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas – métodos quantitativos

confirmação químicaconfirmação da detecção para aumentar grau de confiançamais eficaz seria obtenção de resultdos concordantes usando

2 métodos independentes, baseados em princípios analíticos diferentes

não é possível para MRMsalternativas:

GC-MS para obter espectro do analito e estimativa do teor

2 detectores selectivos2 colunas com fases diferentesanalito derivatizado e recromatografado

sinal do analito desaparece e é substituído por outro

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas – métodos quantitativos

ensaios imunológicosanticorpos com elevada afinidade para o analitoelevada selectividadesimplicidaderapidezcusto moderadorequer muito trabalho e tempoanticorpos desenvolvidos para um pesticida podem reagir

com outra molécula semelhantemaioria dos pesticidas são pouco solúveis em água

tampões aquosos usados em ensaios imunológicos

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas – métodos semiquantitativos e qualitativos

TLCmenor resolução que GCuso para teste semiquantitativo de grupos limitados de pesticidas

detecção de pesticidas inibidores de colinesterasesenzimas inibidas por organofosfatos e carbamatos

HPTLC permite melhores resultados

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

produtos naturais tóxicos para outros organismosmetabolitos secundários produzidos por bolores

podem ser produzidas quer no campo quer em armazenamentomoléculas pequenas (PM < 1000)toxicidade muito variável

Análise de micotoxinas

aflatoxina B1

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

amostragemamostras de grande dimensão para reduzir errostrituradas para homogeneizar

Análise de micotoxinas

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

análise química preliminarprocessos não quantitativos

cromatografia em minicolunaTLC

dão indicação preliminar sobra a presença do analito

Análise de micotoxinas

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

cromatografia em minicolunaexplora fluorescência natural de algumas micotoxinas

aflatoxinas, zearalenona, ocratoxina Acolunas pré-empacotadas disponíveis comercialmenteextracto sujeito a isolamento parcial e eluído na coluna com

vários solventestoxina visualizada como banda fluorescente sob luz de

365 nmlimite de detecção de ppb (ng/g)

Análise de micotoxinas

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

TLCpodem ser analisadas diversas amostras na mesma placa

requer menos padrõespermite estimativa grosseira dos teores de toxina

ajuste do volume de extracto para análise quantitativa posterior

pode existir coeluiçãoreduzida pela utilização de TLC 2D

menos amostras na mesma placarequer utilização de padrões em cada ensaio

Análise de micotoxinas

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

processos químicos quantitativosmesmo tipo de procedimentos que para pesticidas

extracçãofiltraçãoisolamentoconcentraçãoseparação cromatográficadetecção e quantificaçãoconfirmação

Análise de micotoxinas

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

extracçãoamostra misturada com MeOH aquoso, acetona e/ou

acetonitriloalimentos ricos em gordura requerem eliminação de lípidos

extracção com hexano ou isooctanoantes, durante ou depois da solubilização da

micotoxinafiltração

remoção de sólidos em suspensão

Análise de micotoxinas

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

isolamentopartição por solventecromatografia em colunaprecipitação aniónica

remoção de pigmentos e substâncias proteicaspp induzida com ácido fosfotungstico e sais de Zn, Pb e

NHŸlimitada a extractos em solventes orgânicos polares,

contendo > 55% H2Oconcentração

Análise de micotoxinas

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

separação2D-TLCHPLC

mais populardetecção por UV ou fluorescência

derivatização pré ou pós coluna de fase reversa para aumentar a resposta da fluorescência

sensibilidade: ppmGC

apenas em poucos casos

Análise de micotoxinas

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

métodos bioquímicosensaios imunológicos

ensaios rádio-imunológicos (RIA)ELISAdetecção ao nível do pg - ngrápidossimplesfiáveis

Análise de micotoxinas

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

separação por imunoafinidadeutilização de anticorpos para isolar toxinas a partir de matriz

biológicasimplesgrau de isolamento superior a métodos tradicionaisexistem colunas comerciais preparadas

material de empacotamento adsorve selectivamente as toxinas a partir de um extracto bruto

técnica de concentraçãoanalitos libertados com um solvente orgânico polar

Análise de micotoxinas

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

separação por imunoafinidadecromatografia pode usar anticorpos monoclonais

passo de isolamento antes da determinação fluorimétrica de aflotoxina M1 no leite

leite misturado com NaClcentrifugado e filtrado

aliquota cromatografada sob ligeira pressão positivaanalito eluído analisado por fluorescência

Análise de micotoxinas

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

medicamentos administrados em doses terapêuticascombater doenças em animais produtores de alimentos

medicamentos antimicrobianos administrados em doses subterapêuticas

antibióticosrisco devido a:

bactérias resistentestransmissão de resistência a humanos

métodos químicos para resíduos múltiplos são limitadosdirigidos a classes específicas de resíduos

Análise de resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

ensaios preliminarestradicionais

inibição do crescimento microbiano por resíduos de antibióticos presentes na amostra

processos de difusão ou baseados em turvaçãoensaios imunológicos

nalguns casos também quantitativospodem ser totalmente manuais ou parcialmente automatizadossimplesrápidos

análise de grande nº de amostrasnão específicosrespondem apenas a resíduos biologicamente activos

Análise de resíduos de medicamentos

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

ensaios baseados na turvação do meioturbidez de um meio de cultura aumenta ao longo do tempo

de crescimento de um organismo indicador

Análise de resíduos de medicamentos

Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

ensaios baseados em processos de difusãomaterial a analisar difunde através do meio de crescimento,

cultivado com esporos do organismo indicadorapós incubação, surge uma zona de inibição de germinação e

crescimentoindica presença de inibidor

Análise de resíduos de medicamentos

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Análise de pesticidas, micotoxinas e resíduos de medicamentos

determinações químicas quantitativasmetodologia idêntica à utilizada para outros analitos residuais

pré-tratamento da amostralibertação dos resíduos ligados

resíduos solubilizados num solvente adequadoextracto bruto purificado

partição ou cromatografia em colunaanálise cromatográfica

HPLC é técnica mais usadamenor preparação de amostra que para GC

Análise de resíduos de medicamentos

Análise de contaminantes

sujidadespesadas

separadas por sedimentaçãoareia, terra, excrementos de insectos, roedores e outros

animaisleves

lipofílicasinsectos e seus fragmentos, pelos e fragmentos de

roedores e bárbulas de penaspeneiradas

diferentes tamanhos, separadas por peneirassubstâncias resultantes da putrefacção ou decomposição do alimentomateriais estranhos

adulteranteslubrificantespartículas de metal...

introduzidos intencionalmente ou por defeito no processamento

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Análise de contaminantes

identificação de contaminantes de pequenas dimensões pode ser difícil

isolamento pode ser simples ou complicadodepende do contaminante e do alimento

perca de fragmentos e variações devidas ao analista minimizadas por utilização de técnicas e métodos padronizados

Análise de contaminantes

sujidade pesada por sedimentação em frutos secospesar amostraadicionar éter de petróleo e aquecer

extrair lípidos para preparar amostra para análise de sujidade leve

perfazer volume perdido com mais éter de petróleodecantar solventeadicionar CHCl3 e deixar repousarretirar material flutuante (miolo) e ~⅔ do CHCl3repetir separação com pequenos volumes de CHCl3:CCl4 (1:1)

pedaços de casca, areia e solo sedimentam por diferença de densidade

miolo flutuaaté resíduo estar livre de partículas do fruto

Métodos

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Análise de contaminantes

sujidade pesada por sedimentação em frutos secostransferir resíduo para papel livre de cinzas

procurar sujidade pesadacontar nº de partículas

cascas, areia, solo

Métodos

Análise de contaminantes

fragmentos de insectos e pelos de roedores em farinha de centeiocontaminantes lipofílicos

extraídos para fase oleosa de uma mistura heptano/álcool num frasco de Wildman

outras partículas podem ficar retidas na fase de heptano como interferentes

método utiliza 2 reagentes para impedir esse fenómeno

solução de Tween 80 (mistura alcoólica)solução de Versene (à base de EDTA)

Métodos

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Análise de contaminantes

método de flotação para determinar sujidade leve em farinhafragmentos de insectos, pelos de roedores e outrasdigestão ácida degrada o amido

permite separação dos restantes constituintessujidade retida numa fase oleosa

separada com papel de filtrosedimentos mais pesados, resultantes da digestão, lavados e

retirados

Métodos

Análise de contaminantes

existem poucos métodos oficiais para isolamento de contaminantesmétodos alternativos

radiografia de raios Xinspecção de trigo para contaminação interna por insectos

medição de ácido úrico nas amostrascontaminação por excrementos de insectos ou pássarospermite automação

ELISAmedida quantitativa de material proveniente de insectos

medida da miosina produzida pelos insectospermite automação

espectroscopia NIRcontaminação interna por insectos no trigopermite automação

Métodos

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Análise de contaminantes

métodos alternativostécnicas de microscopia

microscopia de fluorescênciamicroscopia electrónica de varrimento

determinação de metais, plásticos, vidro, fibras, …

Métodos