1 - propriedades Ácido-base de aminoáidos

7
FACULDADE DE FILOSOFIA CIÊNCIAS E LETRAS DE RIBEIRÃO PRETO - FFCLRP Relatório de Bioquímica Experimento 1 – Propriedades Ácido-Base de Aminoácidos Alunos: Daniel Blascke Carrão Willian Cardoso Introdução Nesse experimento analisaremos as propriedades ácido- base dos aminoácidos. O experimento é separado em duas partes, sendo a primeira uma titulação potenciométrica e a última uma cromatografia em papel. A titulação potenciométrica diferencia-os através da curva potenciométrica, já que cada aminoácido apresenta uma curva característica, devido aos diferentes grupos presentes. Já cromatografia em papel diferencia-os através de princípios físico-químicos, levando-se em conta que cada aminoácido apresenta um diferente grupamento R, que interagirá de uma forma diferente com o solvente. Objetivo

Upload: franco-murat-la-luna

Post on 03-Jul-2015

2.293 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: 1 - Propriedades Ácido-Base de Aminoáidos

FACULDADE DE FILOSOFIA CIÊNCIAS E LETRAS DE RIBEIRÃO PRETO - FFCLRP

Relatório de Bioquímica

Experimento 1 – Propriedades Ácido-Base de Aminoácidos

Alunos:

Daniel Blascke Carrão

Willian Cardoso

Introdução

Nesse experimento analisaremos as propriedades ácido-base dos aminoácidos. O experimento é separado em duas partes, sendo a primeira uma titulação potenciométrica e a última uma cromatografia em papel. A titulação potenciométrica diferencia-os através da curva potenciométrica, já que cada aminoácido apresenta uma curva característica, devido aos diferentes grupos presentes. Já cromatografia em papel diferencia-os através de princípios físico-químicos, levando-se em conta que cada aminoácido apresenta um diferente grupamento R, que interagirá de uma forma diferente com o solvente.

Objetivo

O objetivo do experimento é identificar e diferenciar os vários tipos de aminoácidos existentes, através de técnicas potenciométricas e cromatográficas.

Page 2: 1 - Propriedades Ácido-Base de Aminoáidos

FACULDADE DE FILOSOFIA CIÊNCIAS E LETRAS DE RIBEIRÃO PRETO - FFCLRP

Parte Experimental

Parte A: Titulação Potenciométrica de um Aminoácido

Através da titulação potenciométrica determinar a curva de pH da glicina, usando soluções de HCl e NaOH.

Prepara-se em um béquer uma solução de glicina diluída em água. Coloca-se o eletrodo medidor de pH na solução e titula-se primeiramente com uma solução de NaOH padronizada (~0,1M), posteriormente titula-se com uma solução de HCl padronizada (~0,1M). Durante as titulações, mede-se com o auxilio do eletrodo o pH da solução de glicina. Através do cálculo do número de equivalentes de ácido ou de base adicionados a solução, monta-se um gráfico de Nº de Equivalentes X pH, com o qual podemos analisar a curva de pH da glicina.

Parte B: Cromatografia em Papel de uma Mistura de Aminoácidos

Através da cromatografia em papel identificar através dos diferentes valores de Rf, os respectivos aminoácidos.

Prepara-se um papel em que são aplicadas, através de capilares, diferentes aminoácidos em diferentes pontos (numerandos de 1 a 6). Enrola-se o papel em formato cilíndrico e coloca-o em uma placa de Petri com solvente de Partridge [n-butanol / ácido acético glacial / água (4:1:1)]. Cobre-se o sistema com um béquer e deixa-se que o solvente “corra pelo papel”. Após isso, retira-se o papel que é posteriormente secado e sofre uma pulverização com uma solução de ninidrina (para revelar a cromtografia). Seca-o novamente e calcula-se o valor do Rf

através do centro de cada mancha, identificando assim os respectivos aminoácidos.

Page 3: 1 - Propriedades Ácido-Base de Aminoáidos

FACULDADE DE FILOSOFIA CIÊNCIAS E LETRAS DE RIBEIRÃO PRETO - FFCLRP

Resultados e Discussões

Parte A: Titulação Potenciométrica de um Aminoácido

Questões

1) Equação de Titulação da Glicina

2) Gráfico do Nº de Equivalentes X pH.

Sendo que a orientação positiva é o nº de equivalentes de OH- e o de negativa e o de H+

Page 4: 1 - Propriedades Ácido-Base de Aminoáidos

FACULDADE DE FILOSOFIA CIÊNCIAS E LETRAS DE RIBEIRÃO PRETO - FFCLRP

3) A curva experimental da glicina é parecida com a curva teórica da glicina Podemos notar que o valor do pK1 encontrado na experimental é ~ 2,2 e na teórica é de 2,34, ou seja, valores relativamente próximos. Já o pK2 na experimental é >11 e o teórico é de 9,6, ou seja, um pequeno desvio é encontrado na curva experimental.

4) As faixas de pH em que os aminoácidos titulados podem atuar como tampões é entre +1 e -1 acima dos valores de pK1 e pK2. Podemos visualizar pelo gráfico que a glicina realmente age como um tampão em pH próximos aos seus valores de pK.

Parte B: Cromatografia em Papel de uma Mistura de Aminoácidos

Questões

1)

Ácido GlutâmicoGrupo R carregado negativamente

AlaninaGrupo R não-polares e alifáticos

ArgininaGrupo R carregado positivamente

ProlinaGrupo R

não-polares e alifáticosTirosina

Grupos R aromáticos

LeucinaGrupo R não-polares e alifáticos

Page 5: 1 - Propriedades Ácido-Base de Aminoáidos

FACULDADE DE FILOSOFIA CIÊNCIAS E LETRAS DE RIBEIRÃO PRETO - FFCLRP

2) A reação entre os aminoácidos e a ninidrina é geral, sendo q independentemente do aminoácido, o mesmo produto é formado (pigmento púrpura), sendo que só no caso da prolina a reação é diferente, já que o nitrogênio da prolina é cíclico.

=

3) Na cromatografia em papel a fase móvel é o solvente (Partridge) e a fase estacionária são as fibras de celulose do papel. Nesta técnica os aminoácidos são arrastados pelo solvente e retidos pela celulose, sendo que os aminoácidos que possuem maior afinidade com o solvente e/ou menor afinidade com a celulose são mais arrastados pelo solvente, do que os aminoácidos que possuem afinidades contrárias.

4) Os valores do Rf de cada aminoácido podem ser encontrados através da fórmula:

Sendo que D = 11,4 cm

Abaixo, segue-se uma tabela dos aminoácidos e seus respectivos Rf.

Fig.1 - Alanina + Ninidrina (Esquema Geral da Reação entre Aminoácidos e Ninidrina

Page 6: 1 - Propriedades Ácido-Base de Aminoáidos

FACULDADE DE FILOSOFIA CIÊNCIAS E LETRAS DE RIBEIRÃO PRETO - FFCLRP

Aminoácido d Rf exp.

Ácido Glutâmico 2,9 0,25Alanina 4,2 0,37Arginina 2,7 0,24Leucina 9,4 0,82Prolina 5,2 0,46Tirosina 3,6 0,32

Através dos valores dos Rf, podemos classificar os aminoácidos por ordem de afinidade com o solvente. Sendo que o que possui maior afinidade é o que possui um Rf.

Ordem crescente de afinidade:

1. Arginina2. Ácido Glutâmico3. Tirosina4. Alanina5. Prolina6. Leucina

Bibliografia

D.L. Nelson e M.M. Cox – Lehninger – Princípios de Bioquímica. 3ª Ed. 2003. Editora Sarvier